免儀器定量生物傳感新方法研究.pdf

1、液相比色分析法通常使用有機(jī)染料、酶底物、貴金屬納米顆粒等作為比色探針，將目標(biāo)物的濃度轉(zhuǎn)換成均相反應(yīng)溶液的顏色強(qiáng)度進(jìn)行分析。由于顏色強(qiáng)度僅是最終反應(yīng)溶液的一維信息，因此，現(xiàn)有的液相比色分析方法可統(tǒng)稱為一維液相比色分析法（One Dimensional Liquid-Phase Colorimetric Assay，1D LPCA）。它們具有操作簡(jiǎn)單、成本經(jīng)濟(jì)、可實(shí)現(xiàn)目視定性或半定量檢測(cè)等突出優(yōu)點(diǎn)，長(zhǎng)期以來(lái)備受分析工作者的青睞，美中不足的是

2、必須借助紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)等光學(xué)儀器才能進(jìn)行分析物的定量檢測(cè)。本論文以半胱胺、腺苷以及重金屬離子為模型分析物并巧妙結(jié)合二維液相比色分析（Two Dimensional Liquid-Phase Colorimetric Assay，2D LPCA）理論，成功開(kāi)發(fā)出了兩種具有原始創(chuàng)新性的免儀器定量生物傳感新方法。
　?。?）就現(xiàn)有的基于納米金的液相比色分析理論（GNP-LPCAs）而言，實(shí)現(xiàn)液相中目標(biāo)物的免儀器定量檢測(cè)基本上是一個(gè)

3、不可能完成的任務(wù)。為解決這一難題，在第二章中，開(kāi)發(fā)了一種基于半胱胺誘導(dǎo)GNPs團(tuán)聚的二維液相比色分析新方法（2D GNP-LPCA）。在反應(yīng)溶液中加入甲酰胺這一智能顏色分層調(diào)節(jié)劑后，會(huì)得到一種雙色（上紅-下藍(lán)或者上藍(lán)-下紅）混合溶液，更重要的是，隨著半胱胺濃度的增大，甲酰胺可以調(diào)節(jié)最終形成的雙色混合溶液中有色溶液的長(zhǎng)度隨之增長(zhǎng)，因此可將顏色長(zhǎng)度作為另一信息用于半胱胺的免儀器定量檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，半胱胺的線性檢測(cè)范圍為

4、1.3~80μM，目視檢測(cè)下限為1.3μM?；诖?，又開(kāi)發(fā)了一種基于核酸適配體的2D GNP-LPCA策略，并將之作為2D GNP-LPCA新理論的拓展性應(yīng)用，使其便捷、低成本、靈敏、特異性地檢測(cè)緩沖液或人血清樣品中的腺苷。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，腺苷的線性檢測(cè)范圍為9.7 nM~10μM，目視檢測(cè)下限為9.7 nM。將新方法應(yīng)用于人血清樣品分析，回收率結(jié)果令人滿意。
　?。?）在眾多重金屬中，銀屬于最高毒性中的一種。傳統(tǒng)

5、的銀離子（Ag+）定量檢測(cè)方法普遍需要借助大型分析儀器。在第三章中，提出了一種基于二維液相比色分析策略的低成本免儀器Ag+目視即時(shí)定量檢測(cè)新方法。新方法使用甲酰胺溶解3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）探針。當(dāng)將Ag+水溶液樣品滴入TMB溶液時(shí)，Ag+便快速氧化TMB生成藍(lán)色醌式聯(lián)苯胺。因該產(chǎn)物更傾向于在水相中形成，最終得到獨(dú)特的上層藍(lán)色-下層無(wú)色的雙色混合溶液。其中，甲酰胺可起到智能調(diào)節(jié)劑的作用。換言之，隨著Ag+濃度的增大，甲