改性類(lèi)人膠原蛋白鐵的制備工藝及生物學(xué)功效.pdf

1、缺鐵性貧血是目前嚴(yán)重影響人類(lèi)健康的疾病之一，它是由于體內(nèi)貯存鐵不能滿足正常紅細(xì)胞生成的需要而引發(fā)的貧血。據(jù)WHO報(bào)道，全世界已有超過(guò)20％的人群患有不同程度的貧血。傳統(tǒng)的補(bǔ)鐵劑有無(wú)機(jī)鐵鹽、有機(jī)鐵鹽、氨基酸螯合鐵等，雖然它們的鐵含量較高，但由于其對(duì)身體均存在不同程度的副作用，嚴(yán)重影響了鐵的生物利用率。為了得到安全高效的補(bǔ)鐵劑，本實(shí)驗(yàn)以生物相容性良好的類(lèi)人膠原蛋白(HLC)為原料，通過(guò)巰基化改性，以FeSO4為配體，制備出一種新型的巰基化類(lèi)

2、人膠原蛋白鐵(SH-HLC-Fe)復(fù)合物補(bǔ)鐵劑。
　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)SH-HLC-Fe的合成工藝進(jìn)行了優(yōu)化，最終得出制備SH-HLC-Fe的最佳條件為:pH6.5，溫度25℃，物料比m(SH-HLC)/m(Fe2+)4∶1，底物濃度c(SH-HLC)4％。
　　采用火焰原子吸收光譜法、紅外光譜法和熱重分析法分別對(duì)HLC、SH-HLC和SH-HLC-Fe復(fù)合物三者進(jìn)行了比較。結(jié)果表明:通過(guò)進(jìn)一步的工藝優(yōu)化，SH-HLC與鐵的結(jié)合能力

3、有了顯著的提高，每摩爾SH-HLC可以結(jié)合35.34摩爾鐵離子。紅外光譜的數(shù)據(jù)表明SH-HLC與鐵離子的結(jié)合位點(diǎn)主要集中在蛋白的N-H基團(tuán)上。熱力學(xué)分析證明了SH-HLC-Fe具有良好的熱穩(wěn)定性。
　　采用小鼠成纖維細(xì)胞(L929)以及MTT法對(duì)SH-HLC-Fe的安全性進(jìn)行了評(píng)估，初步證明了SH-HLC-Fe復(fù)合物是安全無(wú)毒的，并且具有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。進(jìn)一步采用聚丙烯酰胺凝膠電泳及凝膠過(guò)濾色譜對(duì)模擬體外消化的樣品做了定量的分

4、析。模擬體外消化聯(lián)合Caco-2細(xì)胞吸收實(shí)驗(yàn)表明，SH-HLC-Fe相比于其它補(bǔ)鐵劑，鐵的生物利用率有了顯著的提高，同時(shí)發(fā)現(xiàn)維生素C在一定程度上能夠顯著提高鐵的生物利用度。
　　最后，通過(guò)建立缺鐵性貧血模型小鼠，研究幾種補(bǔ)鐵劑的補(bǔ)鐵功效，結(jié)果顯示鐵的生物功效性的大小依次為:SH-HLC-Fe消化物＞SH-HLC-Fe＞甘氨酸螯合鐵＞琥珀酸亞鐵＞硫酸亞鐵。表明SH-HLC-Fe復(fù)合物作為一種新型補(bǔ)鐵劑，為將來(lái)進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究為口服補(bǔ)鐵