納豆激酶的酶學(xué)特性及其微膠囊的制備研究.pdf

1、納豆激酶是由枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白酶，它主要的功能是溶解血栓，也作為新一代的溶栓藥物得到相應(yīng)的發(fā)展與研究。本文主要對(duì)納豆激酶的酶學(xué)特性以及海藻酸鈉對(duì)其包埋制備微膠囊的工藝優(yōu)化以及微膠囊穩(wěn)定性的研究。
　　采用SDS-PAGE法以及Zeta電位法分別測(cè)得納豆激酶的分子量為28 kDa以及等電點(diǎn)為8.58。采用纖維蛋白-瓊脂糖平板法測(cè)定納豆激酶的酶活，得到納豆激酶的酶活為62520 U/g。納豆激酶在不同的加熱溫度時(shí)，溫度越

2、高，其酶活越低。在pH6.5的緩沖溶液中，納豆激酶的相對(duì)酶活為最高。在40℃的水浴中，保溫不同的時(shí)間，納豆激酶在保溫60 min時(shí)，達(dá)到最高的酶活。NaCl在濃度低于1.35 mol/L時(shí)，對(duì)納豆激酶的酶活起到促進(jìn)作用，但是高于此濃度時(shí)，納豆激酶的酶活明顯的受到了抑制；Mg2+、Ca2+對(duì)納豆激酶有促進(jìn)作用；Cu2+、Zn2+對(duì)納豆激酶的活性有抑制作用；Fe2+對(duì)納豆激酶的抑制作用，即使在較低的濃度時(shí)對(duì)納豆激酶的酶活穩(wěn)定性的抑制作用也十

3、分的明顯。
　　使用海藻酸鈉包埋納豆激酶制備微膠囊的單因素最佳工藝條件是：海藻酸鈉的濃度為1.60％，羧甲基纖維素鈉的濃度為0.50%，CaCl2濃度為0.30%。正交實(shí)驗(yàn)所得的最佳工藝條件是：海藻酸鈉的濃度為1.80%，羧甲基纖維素鈉的濃度為0.50%，CaCl2濃度為0.30%。
　　對(duì)包埋的納豆激酶與游離狀態(tài)下的納豆激酶酶學(xué)性質(zhì)的比較，在不同的溫度以及不同的pH下，包埋的納豆激酶比游離的納豆激酶的相對(duì)酶活要高。并且在酶

4、活溫度為50℃時(shí)，游離的納豆激酶的相對(duì)酶活是51.69%，包埋的納豆激酶的相對(duì)酶活為71.67%；在pH8.5的條件下，游離的納豆激酶的相對(duì)酶活是38.09%，包埋納豆激酶的相對(duì)酶活是55.99%。經(jīng)過(guò)包埋的納豆激酶，其酶活受到了一定程度的保護(hù)。因此，經(jīng)過(guò)海藻酸鈉包埋的納豆激酶可以較好的保護(hù)酶的活性，免受外界環(huán)境的影響。同樣，關(guān)于混合多糖的研究發(fā)現(xiàn)，海藻酸鈉/CMC包埋的納豆激酶，有以下優(yōu)點(diǎn)：粒徑小、外觀(guān)規(guī)則并且酶活的回收率高、硬度強(qiáng)。