高原肺水腫大鼠模型的建立及7-羥乙基白楊素的干預作用.pdf

1、目的:
　　1.采用低壓低氧動物實驗艙建立重復性良好的高原肺水腫大鼠模型，并探討急性低壓低氧、寒冷結合運動對大鼠發(fā)生高原肺水腫的影響。
　　2.研究7-羥乙基白楊素對高原肺水腫大鼠的干預作用及其初步作用機制。
　　方法:
　　1.120只Wistar大鼠隨機分為正常對照組、模型-Ⅰ（海拔6000m）、模型-Ⅱ（海拔6000m+低溫2℃）、模型-Ⅲ（海拔6000m+低溫2℃+跑步運動）、模型-Ⅳ（海拔6000m+晝

2、夜溫差12℃/2℃）、模型-Ⅴ組（海拔6000m+晝夜溫差12℃/2℃+跑步運動），通過預設條件處理各組大鼠，以肺組織病理改變、肺含水量及肺微血管通透性作為大鼠發(fā)生高原肺水腫的初步指示指標，篩選出高原肺水腫大鼠模型，通過肺組織氧化應激相關指標與相關炎性因子表達的檢測進一步評價模型，并通過重現性實驗考察模型穩(wěn)定性。
　　2.100只Wistar大鼠隨機分為正常對照組（等容滅菌注射用水）、高原肺水腫模型組（等容滅菌注射用水）、乙酰唑胺

3、組（200mg/kg）、白楊素組（350mg/kg）、7-羥乙基白楊素組（350mg/kg），復制高原肺水腫大鼠模型，灌胃給藥6天，通過對大鼠肺組織病理變化觀察、肺含水量與肺微血管通透性檢測、血氣與血常規(guī)分析、氧化應激與能量代謝相關指標檢測、炎性因子檢測、肺血管通透性相關指標檢測、肺動脈壓相關指標檢測、肺泡清除率相關指標檢測，評價白楊素及7-羥乙基白楊素對高原肺水腫大鼠的干預作用，并通過Real-Time PCR法檢測高原肺水腫發(fā)生相關

4、基因的表達，探討7-羥乙基白楊素預防大鼠高原肺水腫的初步作用機制。
　　結果:
　　1.模型-Ⅳ與模型-Ⅴ組大鼠肺組織均發(fā)生明顯病理改變，肺含水量升高、肺微血管通透性增大，其中以模型-Ⅴ的變化更為顯著，初步篩選模型-Ⅴ為高原肺水腫大鼠模型。同時檢測氧化應激相關指標與相關炎性因子表達，結果顯示模型-Ⅴ組大鼠發(fā)生明顯的氧化應激反應與炎癥反應，表現為肺組織MPO、MDA、H2O2水平明顯升高，SOD、CAT、GST、GPX及GSH

5、水平降低，血清NFκB p65、TNF-α、IL-1β及IL-6水平與肺組織VCAM-1、sICAM-1蛋白含量升高。進一步通過重現性實驗檢測模型-Ⅳ與模型-Ⅴ肺含水量及肺微血管通透性，發(fā)現模型-Ⅴ條件下大鼠肺組織含水量與肺微血管通透性顯著增大，發(fā)生明顯肺水腫，說明模型-Ⅴ為更穩(wěn)定、可靠的高原肺水腫大鼠模型。
　　2.7-羥乙基白楊素預防給藥可以明顯改善高原肺水腫大鼠肺組織病理改變、降低肺含水量與肺微血管通透性、緩解大鼠體重快速下

6、降，改善血氣與血常規(guī)各項指標變化，使之接近正常水平；降低MPO、MDA、H2O2水平，增強SOD、GST、GPX活力，升高GSH含量，對CAT無明顯作用，提高肺組織對·OH、O2-·的清除能力，明顯減弱氧化應激反應；增加ATP的生成，對LD/Pyr比值無影響，提示其可能提高大鼠對氧的利用，而對糖酵解途徑無明顯作用；下調NFκB p65蛋白的表達，減少由其調控的炎性因子的產生；升高NO、CO含量，增大eNOS/ET-1比值，抑制肺血管過度

7、收縮，降低肺動脈高壓；下調HIF-1α、VEGFA基因的表達，上調Occludin基因與蛋白表達，降低肺微血管通透性；上調AQP1、α-ENaC及Na+K+-ATPase基因及蛋白的表達，增大肺泡液體清除能力，改善肺泡主動重吸收功能障礙。
　　結論:
　　1.篩選出重現性良好的高原肺水腫大鼠模型，初步確定了高原肺水腫大鼠模型的建立條件。
　　2.7-羥乙基白楊素對預防大鼠高原肺水腫具有良好效果，且作用優(yōu)于乙酰唑胺與白楊