水蛭對(duì)大鼠肺纖維化模型干預(yù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本研究旨在觀察水蛭對(duì)博來霉素誘發(fā)的肺間質(zhì)纖維化的治療作用，通過檢測大鼠血清和肺組織轉(zhuǎn)化生長因子β<,1>(transforming growth factor-β<,1>，TGF-β<,1>)及纖溶酶原激活物抑制因子-1(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)的水平，探討水蛭干預(yù)肺纖維化的效果及可能的作用機(jī)制，為臨床治療開辟新的思路。 方法： 清潔級(jí)健康、雄性SD大鼠(河北

2、醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)120只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(C組)；模型組(B組)；水蛭干預(yù)組(H組)；激素干預(yù)組(D組)。各組又按1天、3天、7天、14天、28天5個(gè)時(shí)間點(diǎn)分為5個(gè)亞組，每個(gè)亞組6只大鼠。C組氣管穿刺注入生理鹽水，B組、H組和D組氣管內(nèi)注入博來霉素A<,5>(5mg／kg)復(fù)制成肺間質(zhì)纖維化模型，C組和B組與造模當(dāng)天大鼠清醒后開始給予生理鹽水灌胃，H組則于清醒后給予水蛭粉4g/kg灌胃，D組于清醒后給予地

3、塞米松(DEX)0.5mg/kg腹腔注射。各組動(dòng)物分別于造模后1天、3天、7天、14天、28天處死。取材：右肺做HE、Masson染色及用免疫組織化學(xué)法測定肺組織中TGF-β<,1>、PAI-1，圖像分析半定量測定TGF-β<,1>、PAI-1的陽性面積比。右肺下葉測定組織膠原含量，檢測大鼠血清和肺泡灌洗液中TGF-β<,1>的含量。觀察水蛭的治療效果，并分析TGF-β<,1>和PAI-1的相關(guān)性。 結(jié)果： 1、肺組織H

4、E染色、Masson染色：正常對(duì)照組各時(shí)相點(diǎn)均未出現(xiàn)明顯的病理變化。模型組第1天肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤。第3天肺泡腔內(nèi)巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞滲出增多，肺泡隔稍增寬，肺泡炎加重。第7天肺泡腔內(nèi)仍有大量炎性細(xì)胞滲出，形成嚴(yán)重肺泡炎，成纖維細(xì)胞開始增生，毛細(xì)血管增生，病灶內(nèi)肺泡萎陷。第14天肺泡炎逐漸減輕，肺泡壁增厚，肺纖維組織合成增加。第28天肺泡炎已不明顯，肺纖維化程度加重，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡腔消失。水蛭組和激素組肺

5、泡間隔增寬較模型組明顯減輕，單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤較輕，肺泡結(jié)構(gòu)基本正常，纖維化的病理改變也較模型組明顯減輕。模型組、水蛭組、激素組肺泡炎各期均明顯比正常對(duì)照組重，而肺纖維化在第14天和第28天與正常對(duì)照組比較差異顯著。水蛭組、激素組與模型組病理變化有同一規(guī)律，但肺泡炎、肺纖維化程度都輕于模型組。 2、羥脯氨酸(HYP)含量：第1天和第3天肺組織HYP含量模型組(0.29±0.04，0.40±0.07)和水蛭組(0.27

6、±0.03，0.36±0.04)、激素組(0.27±0.04，0.36±0.04)均輕微高于正常對(duì)照組(0.25±0.01)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p>0.05)，模型組HYP含量隨造模時(shí)間的延長逐漸增高，自第7天始升高明顯，而水蛭組和激素組HYP含量呈低水平增高趨勢。7天、14天、28天水蛭組(0.55±0.08，0.66±0.05，0.74±0.10)和激素組(0.57±0.07，0.69±0.03，0.77±0.09)與模型組(0

7、.71.±0.08，0.82±0.05，0.91±0.04)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01.)。各時(shí)相點(diǎn)水蛭組HYP含量均低于激素組，但無顯著性差異(p>0.05)。正常對(duì)照組各時(shí)相點(diǎn)方差分析HYP含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 3、肺組織PAI-1面積百分比：模型組大鼠肺組織PAl.1陽性表達(dá)明顯增多，3-28天時(shí)間點(diǎn)與正常對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；水蛭組的PAI-1陽性表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)均低于模型組，

8、7-28天時(shí)間點(diǎn)水蛭組(6.52±0.70，8.77±0.84，10.88±0.85)與模型組(9.34±1.08，15.60±1.14，18.11±0.84)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)，1～3天時(shí)間點(diǎn)水蛭組(3.59土0.64，4.34±0.75)與正常對(duì)照組(3.67±0.53)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，而7-28天時(shí)間點(diǎn)明顯高于正常對(duì)照組(p<0.01)。激素組各時(shí)間點(diǎn)陽性面積百分比較水蛭組有所上升，但差異

9、無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。各組1天點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 4、血清和肺泡灌洗液TGF-β<,1>。含量：3天、7天、14天、28天各時(shí)間點(diǎn)模型組血清TGF-β<,1>含量均較正常對(duì)照組、水蛭組及激素組明顯增高(p<0.01)，1天點(diǎn)模型組TGF-β<,1>含量稍高于其它各組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各時(shí)間點(diǎn)水蛭組血清TGF-β<,1>含量高于正常對(duì)照組(p<0.01)；激素組血清各時(shí)間點(diǎn)TGF-β<,1>含量略高于

10、水蛭組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，水蛭在抑制肺纖維化大鼠TGF-β<,1>表達(dá)方面不優(yōu)于激素；肺泡灌洗液與血清各時(shí)間點(diǎn)TGF-β<,1>含量變化一致。 5、肺組織TGF-β<,1>面積百分比：模型組大鼠TGF-β<,1>表達(dá)量高于正常對(duì)照組、水蛭組及激素組，3-28天時(shí)間點(diǎn)與三組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)。水蛭組TGF-β<,1>的陽性表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)均低于模型組，7～28天時(shí)間點(diǎn)水蛭組(5.69±0.41，7.11±

11、0.68，7.65±0.70)與模型組(9.54±1.20，14.45±1.36，17.05±1.39)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；1-3天時(shí)間點(diǎn)水蛭組(3.52±0.50，4.09±0.53)與正常對(duì)照組(3.81.±0.67)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，而7-28天時(shí)間點(diǎn)水蛭組(5.69±0.41，7.11±0.68，7.65±0.70)明顯高于正常對(duì)照組(3.81±0.67)(p<0.01.)。激素組各時(shí)間點(diǎn)

12、陽性積分較水蛭組有所上升，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)；正常對(duì)照組的少數(shù)支氣管粘膜上皮細(xì)胞的胞漿可發(fā)現(xiàn)少量TGF-β<,1>蛋白弱表達(dá)，也可偶見TGF-β<,1>弱陽性的肺胞巨噬細(xì)胞。 6、血漿PAI-1活性變化：模型組(0.39±0.02)、水蛭組(0.34±0.04)和激素組(0.35±0.05)的PAI-1活性在1天點(diǎn)與正常對(duì)照組(0.36±0.05)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)；模型組3-28天點(diǎn)PAI-

13、1顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01)；而水蛭組3-28天組PAI-1活性明顯低于模型組(P<0.01)；激素組3-28天組PAI-1活性顯著高于水蛭組(p<0.01)。7血清TGF-β<,1>含量與肺組織PAI-1陽性面積比的相關(guān)分析：模型組實(shí)驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血清的TGF-β<,1>含量與肺組織的PAI-1陽性面積比之間經(jīng)等級(jí)相關(guān)分析顯示兩者呈正相關(guān)(r<,s>=0.936，P<0.01)。 結(jié)論： 1、水蛭可減少博來霉素誘發(fā)