檢測(cè)丙二醛的熒光探針的構(gòu)建及應(yīng)用研究.pdf

1、丙二醛，是脂質(zhì)過(guò)氧化的標(biāo)志性產(chǎn)物之一，在生物體內(nèi)的含量可以直接反映生物體被氧化的程度或損傷的程度，很多疾病的檢測(cè)都將其含量作為判斷的標(biāo)準(zhǔn)之一。到目前，已有很多的檢測(cè)方法應(yīng)用在丙二醛的檢測(cè)中，但這些檢測(cè)方法大多由于檢測(cè)條件苛刻而僅能應(yīng)用在體外樣品中的丙二醛檢測(cè)，在檢測(cè)過(guò)程中還需要依賴于高效的分離手段，才能獲得良好的檢測(cè)效果。而利用小分子熒探針對(duì)丙二醛進(jìn)行檢測(cè)則可以很好的避免上述問(wèn)題，并且分子熒光探針與熒光成像技術(shù)的連用可以直接監(jiān)測(cè)細(xì)胞及活

2、體內(nèi)的丙二醛。但選擇性檢測(cè)丙二醛的熒光探針的發(fā)展情況并不理想。因此設(shè)計(jì)合成針對(duì)檢測(cè)丙二醛的熒光探針是非常有必要的。
　　丙二醛分子有兩個(gè)醛基，可以與肼中的兩個(gè)氨基依次發(fā)生反應(yīng)，生成五元環(huán)狀的吡唑類化合物。我們利用肼與丙二醛的反應(yīng)的特異性，產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，設(shè)計(jì)合成了兩種高選擇性檢測(cè)丙二醛的熒光探針。本論文分為三章，主要內(nèi)容如下:
　　第一章 緒論。主要介紹檢測(cè)醛類化合物的熒光衍生化試劑，以及熒光探針的發(fā)展。在此基礎(chǔ)上提出的本

3、論文的思路。
　　第二章 本章中，我們構(gòu)建了一種羅丹明酰肼類熒光探針RB4-1，有機(jī)的將苯酰肼與丙二醛的專一反應(yīng)和羅丹明螺酰胺類化合物的螺環(huán)開環(huán)反應(yīng)結(jié)合起來(lái)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞內(nèi)丙二醛的專一檢測(cè)。探針RB4-1利用苯酰肼作為識(shí)別基團(tuán)，在弱酸性環(huán)境下與丙二醛反應(yīng)生成羅丹明-吡唑類化合物，探針?lè)肿觾?nèi)的螺環(huán)結(jié)構(gòu)被打破，羅丹明的大共軛π鍵體系恢復(fù)，紫外吸收在575 nm處與熒光強(qiáng)度在600 nm處均顯著增強(qiáng)。探針RB4-1在檢測(cè)丙二醛的實(shí)驗(yàn)條件

4、下，對(duì)常見的金屬離子、其他小分子醛類以及生物體內(nèi)的常見的物質(zhì)均無(wú)響應(yīng)，對(duì)丙二醛的選擇性非常好。應(yīng)用該探針?lè)肿?，我們成功?shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞內(nèi)丙二醛的檢測(cè)，測(cè)試條件改變后還可以應(yīng)用于體外樣品中丙二醛的檢測(cè)，表明該探針?lè)肿涌梢詰?yīng)用于不同生物體系中丙二醛的檢測(cè)，具有良好的應(yīng)用前景。
　　第三章 本章中，我們以4-肼-7-硝基-苯并呋咱(NBDH)作為熒光探針實(shí)現(xiàn)了對(duì)丙二醛高靈敏高選擇性的檢測(cè)。探針NBDH以苯肼作為識(shí)別基團(tuán)，與丙二醛反應(yīng)后生成化

5、合物NBD-P1，NBD-P1的最大吸收波長(zhǎng)在474 nm處，相比NBDH紅移100 nm，摩爾吸光系數(shù)為3.09×104 L·mol-1·cm-1，在水中的熒光量子產(chǎn)率高達(dá)0.105，本次實(shí)驗(yàn)利用NBD-P1這些優(yōu)異的光物理性質(zhì)以及苯肼與丙二醛反應(yīng)的特異性，通過(guò)選擇合適的測(cè)試條件，僅利用熒光分析法實(shí)現(xiàn)了對(duì)丙二醛的檢測(cè)，檢出限為7.2 nM。我們已經(jīng)成功的將NBDH應(yīng)用于胎牛血清環(huán)境中的丙二醛檢測(cè)，檢測(cè)的準(zhǔn)確度可達(dá)到98％，表明NBDH