產(chǎn)ε-聚賴氨酸鏈霉菌的誘變選育及發(fā)酵工藝研究.pdf

1、一直以來，ε-聚賴氨酸（ε-PL）都是通過微生物生產(chǎn)發(fā)酵的途徑獲得，是一種具有顯著抑菌活性，安全無毒并且水溶性和熱穩(wěn)定都非常好的新型生物防腐劑。本課題通過對(duì)白色鏈霉菌UD20進(jìn)行誘變得到高產(chǎn)菌種UN9后，主要對(duì)白色鏈霉菌UN9的發(fā)酵工藝進(jìn)行改進(jìn)研究。本課題的主要成果如下:
　　(1)通過對(duì)白色鏈霉菌UD20經(jīng)過AEC抗性篩選，NTG誘變，紫外氯化鋰誘變以及亞硝酸誘變處理，結(jié)合亞甲基藍(lán)篩選最終得到一株產(chǎn)量為0.619 g·L-1命名

2、為白色鏈霉菌UN9的高產(chǎn)菌，較出發(fā)菌UD20的產(chǎn)量0.368 g·L-1提高了68.2％，并且菌UN9可以穩(wěn)定遺傳。
　　(2)探究了外源賴氨酸對(duì)白色鏈霉菌UN9生物合成ε-PL的影響，確定了外源賴氨酸的添加量為2.0 g·L-1時(shí)對(duì)菌UN9的產(chǎn)量提高最顯著，從不添加賴氨酸的0.610 g·L-1提高到了0.721 g·L-1，產(chǎn)量提高了18.2％。
　　(3)白色鏈霉菌UN9的以葡萄糖為碳源的5L發(fā)酵罐自然發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，菌UN

3、9的產(chǎn)量達(dá)到了1.802 g·L-1，是搖瓶發(fā)酵的2.499倍。然后通過對(duì)碳源的補(bǔ)料操作，使得產(chǎn)量再次大幅度提高到6.908 g·L-1，是自然分批發(fā)酵的3.834倍。針對(duì)發(fā)酵后期白色鏈霉菌UN9活性降低，菌體大量死亡的問題，提出了對(duì)菌UN9發(fā)酵后期流加酵母粉的方法，提高了白色鏈霉菌UN9后期代謝及生長(zhǎng)能力，生物量提高到了44.46g·L-1，產(chǎn)量也進(jìn)一步提高到9.216 g·L-1。
　　(4)確定了甘油是除了葡萄糖外，白色鏈霉

4、菌UN9合適的發(fā)酵碳源，探究了白色鏈霉菌UN9的雙碳源發(fā)酵思路，最終葡萄糖和甘油的最適比例為20∶30的發(fā)酵工藝比單一葡萄糖為碳源提高了31.7％，比單一甘油作為碳源提高了13.3％，達(dá)到0.815 g·L-1。
　　(5)pH值是影響白色鏈霉菌UN9代謝的重要因素，考察了菌UN9在不同pH值（3.8和4.0）下的葡萄糖-甘油雙碳源發(fā)酵，雙碳源發(fā)酵的菌UN9在發(fā)酵體系pH3.8和4.0的產(chǎn)量分別達(dá)到11.657 g·L-1和11.