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文檔簡介
1、ε-聚賴氨酸(ε-poly-L-lysine,ε-PL)是由微生物合成的一種氨基酸同型聚合物,由人體必需氨基酸L-賴氨酸的ε-氨基和另一L-賴氨酸的α-羧基形成的酰胺鍵連接而成。ε-PL具有廣譜抑菌性,對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌、耐熱芽孢桿菌和一些病毒都有抑制作用,且具有水溶性好、熱穩(wěn)定性高等特點,是一種安全高效的天然生物防腐劑。目前ε-PL被廣泛用于食品防腐保鮮、可降解生物材料以及醫(yī)學(xué)研究中。
為了建立一種快速方
2、便的ε-聚賴氨酸檢測方法,本文基于ε-聚賴氨酸與Dragendorff's試劑的沉淀復(fù)合物可與硫脲產(chǎn)生顯色反應(yīng),提出了一種利用分光光度計快速檢測ε-聚賴氨酸的新方法。ε-聚賴氨酸含量與反應(yīng)復(fù)合物吸光度在pH2.0~5.0,反應(yīng)時間在45min以內(nèi),具有較高的線性相關(guān)性。分光光度計測定波長為435nm。濃度在0~1.50g/L范圍內(nèi),ε-聚賴氨酸工作曲線線性相關(guān)系數(shù)為R2=0.9999,RSD=3.63%,檢出限為0.01g/L。該方法相
3、比于Itzhaki法具有較高的準確性。最后以該方法為依據(jù)建立了一種利用96孔板高通量快速檢測ε-聚賴氨酸的方法。
對白色鏈霉菌UN2-71的原生質(zhì)體進行了制備和再生。確定了白色鏈霉菌UN2-71原生質(zhì)體制備和再生的最優(yōu)條件,即在含甘氨酸2%的菌絲培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h,收集菌絲體經(jīng)2.0mg/mL的溶菌酶,在30。C下酶解60min,可獲得大量的原生質(zhì)體。
以白色鏈霉菌UN2-71為出發(fā)菌株,進行了原生質(zhì)體的DE
4、S誘變實驗。首先研究了不同劑量的DES對結(jié)果的影響,然后繪制了致死率曲線,確定了0.1%DES,誘變38min和0.15%DES誘變18min最適誘變劑量。挑取了514株再生菌落,應(yīng)用搖試管培養(yǎng)和高通量快速測定方法初篩得到26株高產(chǎn)菌,經(jīng)過復(fù)篩最終得到了一株高產(chǎn)菌株D3-32,ε-聚賴氨酸產(chǎn)量達到1.56g/L,比出發(fā)菌株提高了49.43%。經(jīng)傳代發(fā)酵試驗,該突變株遺傳性狀穩(wěn)定。
采用2.3L自動發(fā)酵罐,研究了突變菌株D3
5、-32和原始菌株的發(fā)酵特性,可以得出突變株的菌體生長能力更高,ε-聚賴氨酸合成能力更高。調(diào)控pH4.0,有利于產(chǎn)物ε-聚賴氨酸的合成。突變株D3-32經(jīng)2.3L自控發(fā)酵罐發(fā)酵,發(fā)酵過程中調(diào)控pH4.0,發(fā)酵后期補充葡萄糖和硫酸銨,補料分批發(fā)酵并調(diào)控pH,采用不斷補充碳源來延長發(fā)酵周期,發(fā)酵體系中菌體濃度達到了31.58G/L,而ε-聚賴氨酸的產(chǎn)量則達到8.06g/L,比原始菌株自然發(fā)酵下提高了近5倍。
最后初步研究了發(fā)酵液
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