以跨膜蛋白疏水結構域為多肽標簽的目標蛋白酶定位研究.pdf

1、蛋白質分離純化技術推動了對基因工程、分子生物學、免疫學和疾病診斷學等許多新興學科的發(fā)展。隨著生命科學和生物技術的不斷進步，對于生物大分子分離和純化的要求也越來越高。蛋白質常存在于復雜的混合體系中，對溫度、pH、機械剪切力、酶等均非常敏感，穩(wěn)定性較差，易于變性，故用于小分子的分離技術大多并不能直接用來分離蛋白質。
　　 本研究對通過整合蛋白的跨膜結構域與材料表面的疏水相互作用達到蛋白分離問題進行了探討。整合蛋白約占各種生物體總蛋白

2、的四分之一以上，這些整合蛋白牢牢嵌入到了脂質膜中，對于保持蛋白的疏水結構及其功能是必不可少的。到目前為止，大多數的整合蛋白的應用都與它們的生理作用有關。然而，事實上整合蛋白的疏水結構也可以進行多功能方面的研究。在本研究中主要選用若干種整合蛋白的跨膜結構域以及全蛋白如枯草芽孢桿菌Mrp操縱子系統(tǒng)中的MrpD和MrpF兩種蛋白作為疏水蛋白標記結合到目標蛋白如綠色熒光蛋白(GFP)，大腸桿菌酸性磷酸酶(EcAP)或堿性磷酸酶(PhoA)，麥芽

3、糖結合蛋白(MBP)等的末端。經研究結果表明，大多數整合蛋白的跨膜結構域作為疏水標記可以起到將目標蛋白錨定在生物體體細胞膜上的作用。在此基礎上，研究了帶有該疏水標記的重組目標蛋白與材料表面的相互作用。一方面選用大腸桿菌酸性磷酸酶(EcAP)和大腸桿菌堿性磷酸酶(PhoA)作為目標蛋白模型，選用枯草芽孢桿菌MrpD全蛋白和MrpF的跨膜結構域作為疏水蛋白標記構建融合蛋白。另一方面，選用以MPEG(750)-SH改性后金片表面作為相互作用的