乙酰半胱氨酸改善煙草提取物誘導非小細胞肺癌細胞株EGFR-TKI耐藥的機制研究.pdf

1、目的：
　　靶向治療是目前有相應位點突變的非小細胞肺癌患者的一線治療方案，有吸煙史的EGFR突變陽性非小細胞肺癌患者較無吸煙史患者具有較差的預后，吸煙與EGFR-TKI（Epithelial growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs）耐藥密切相關。本研究旨在探索煙草提取物（cigarette smoke extract,CSE）與肺腺癌EGFR-TKI耐

2、藥的潛在機制，乙酰半胱氨酸（N-Acetyl-L-Cysteine,NAC）能否改善CSE誘導的PC-9、A549細胞吉非替尼耐藥及相關機制。
　　方法：
　　第一部分：將PC-9、A549細胞分為吉非替尼空白對照組、10%CSE組，MTT方法檢測CSE對PC-9、A549細胞吉非替尼敏感性的影響，western blot方法檢測CSE處理后EGFR/AKT信號通路蛋白的表達，激光共聚焦掃描顯微鏡及流式細胞術方法直接或間接觀

3、察CSE對細胞內(nèi)活性氧水平的影響，流式細胞術檢測細胞凋亡。
　　第二部分：將PC-9、A549細胞分為空白對照組、10%CSE組、10%CSE+NAC組、Gefitinib組、10%CSE+Gefitinib組、10%CSE+NAC+Gefitinib組，MTT方法檢測NAC對CSE誘導的PC-9、A549細胞吉非替尼耐藥的影響，western blot方法檢測NAC對CSE上調的EGFR/AKT磷酸化水平的影響，激光共聚焦掃描顯

4、微鏡及流式細胞術方法直接或間接觀察NAC對CSE誘導的細胞內(nèi)活性氧水平升高的作用，流式細胞術檢測NAC對肺腺癌細胞凋亡的影響。
　　結果：
　　MTT檢測結果顯示：PC-9細胞吉非替尼空白對照組、10%CSE組、10%CSE+NAC組的IC50分別為0.0671±0.0131μM、0.9268±0.2042μM、0.0519±0.0018μM；A549細胞吉非替尼空白對照組、10%CSE組、10%CSE+NAC的 IC50分

5、別為22.11±1.13μM、55.51±3.40μM、31.01±1.25μM，兩組細胞中，10%CSE組IC50值明顯高于空白對照組（P均＜0.01），而經(jīng)NAC處理后IC50較10%CSE組明顯降低（P均＜0.01）。
　　Western blot檢測顯示煙草提取物可以激活EGFR/AKT信號通路，10%CSE組pY1068、pY1173、p-AKT水平較空白對照組明顯上調，且10%CSE+Gefitinib組相應磷酸化蛋白

6、水平較10%CSE組變化不明顯，而10%CSE+NAC+Gefitinib較10%CSE組、10%CSE+Gefitinib組EGFR/AKT磷酸化蛋白表達明顯降低。
　　激光共聚焦技術及流式細胞術均顯示煙草提取物暴露后細胞內(nèi)活性氧水平明顯升高，而乙酰半胱氨酸能夠降低CSE上調的細胞內(nèi)活性氧水平。
　　流式細胞術檢測顯示PC-9細胞空白組、10%CSE組、10%CSE+NAC組細胞凋亡率分別為：(6.24±0.22)%，(7

7、.51±1.11)%，(19.46±3.79)%； A549細胞空白組、10%CSE組細胞、10%CSE+NAC組凋亡率分別為：(4.71±1.27)%，(5.34±2.91)%，(8.83±1.54)%。兩株細胞中，10%CSE組細胞凋亡率較空白對照組均無明顯差異（P＞0.05）；PC-9細胞中，與10%CSE組相比，10%CSE+NAC組凋亡率明顯升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義，而在A549細胞中P值大于0.05，兩組差異不