荷花粉和金針菇中巰基化合物的測定研究.pdf

1、本研究經(jīng)篩選研究的基礎上，主要對荷花粉和金針菇的樣品細胞內(nèi)的還原型谷胱甘肽（GSH）和含有半胱氨酸殘基的巰基化物的含量進行檢測，意在篩選出富含GSH和巰基化合物的藥食兩用植物類樣品。據(jù)文獻報道：人體內(nèi)含半胱氨酸殘基的巰基化合物含量的高低與人體的衰老和某些特殊的疾病有著密不可分的聯(lián)系。因此，通過篩選富含GSH及巰基化合物的藥食兼用的食品，對于人類的治病、防病、延年益壽具有實際意義。盡管，生物樣品中巰基化合物的測定有多種不同的方法，但是由于

2、這些方法采用不同的前處理過程，這導致了不同測定方法間存在較大的差異。本研究利用高效液相色譜法和光譜法對三種不同前處理方法得到的樣品提取液進行對比，發(fā)現(xiàn)采用細胞破壁、衍生化為一體的同步前處理方法，測得的分析信號強度最大，盡可能地避免了前處理過程中細胞內(nèi)的（-SH）因胞外氧化環(huán)境導致的氧化變性，使得測定的結果更加實時、可靠地反映了生物細胞內(nèi)的含量。同時，本研究也采用了兩種不同測定方法分別對生物樣品中GSH和總巰基（-SH）的含量進行測定，結

3、果顯示，所測樣品中GSH和總巰基（-SH）的含量基本吻合，這充分說明了本研究所選擇的高效液相色譜法以及光譜法對所選生物樣品中巰基化合物檢測的可靠性。同時利用荷花粉作為活細胞樣本探討了不同重金屬離子脅迫時，細胞內(nèi)的GSH和含巰基蛋白質(zhì)的應答作用，為巰基化合物對重金屬解毒機制的研究提供了基礎數(shù)據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用過量衍生化試劑DTNB的提取液，采用細胞破壁、衍生化為一體的同步前處理方法，對荷花粉中GSH和總巰基（-SH

4、）的含量進行高效液相色譜測定。測定結果顯示：荷花粉中 GSH和總巰基（-SH）的含量分別為2.0865μmol/g和9.5076μmol/g，但因荷花粉樣品中不含有類似于半胱氨酸（Cys）一樣的其他小分子巰基化合物，因此總巰基（-SH）和GSH含量的差值7.4211μmol/g，即為荷花粉中蛋白質(zhì)巰基（Prot-SH）的含量。方法的回收率為100.95％和99.91%，其檢測限分別為5.18μmol/L和6.22μmol/L。⑵采用衍生

5、化試劑5,5-二硫雙-2-硝基苯甲酸(DTNB)和鄰苯二甲醛（OPA）對荷花粉中總巰基（-SH）和GSH含量分別進行了紫外光譜和熒光光譜的測定。荷花粉中 GSH的含量為1.8007μmol/g；總巰基（-SH）的含量為9.6829mol/g。光譜法測定的結果與HPLC法測定結果相比較，可以發(fā)現(xiàn)兩者結果相差不大，基本吻合。可以證明兩種方法的可靠性。⑶采用高效液相色譜法測定不同重金屬浸泡下荷花粉中GSH和巰基蛋白質(zhì)（P-SH）的含量的變化，

6、以及采用ICP-MS法對不同重金屬浸泡后荷花粉中重金屬含量進行測定。初步探討不同重金屬浸泡下胞內(nèi)巰基化合物的應答機制，為生物細胞對重金屬解毒和積累機制的研究提供數(shù)據(jù)上的參考。⑷利用光譜法和高效液相色譜法分別對金針菇中GSH和總巰基（-SH）含量的進行了測定，測定結果表明：HPLC法測得的金針菇中 GSH和總巰基的含量分別為1.3665μmol/g和1.6366μmol/g，光譜法測得的GSH和總巰基的含量分別為1.3429μmol/g和