門冬酰胺酶對不同白血病細胞增殖抑制及兒童ALL融合基因動態(tài)檢測的研究.pdf

1、第一部分門冬酰胺酶對不同白血病細胞體外增殖及細胞周期的影響
　　目的：探討門冬酰胺酶（L-asp）對Jurkat、K562、K562/ADM三種白血病細胞的體外增殖抑制作用及細胞周期的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)Jurkat、K562、K562/ADM三種細胞，取對數(shù)期且生長良好的細胞用L-asp進行干預。Jurkat細胞用不同濃度L-asp（0.02U/ml、0.1 U/ml、0.5 U/ml、2.5 U/ml、12.5 U

2、/ml），K562和K562/ADM細胞用不同濃度L-asp（0.1 U/ml、1 U/ml、10 U/ml、100 U/ml、1000 U/ml）分別處理24h、48h、72h，細胞增殖抑制率采用CCK-8法檢測，細胞周期采用流式細胞儀檢測。
　　結(jié)果：1．（1）相同時間下不同濃度L-asp作用于Jurkat、K562細胞和K562/ADM細胞，隨著濃度的增加細胞增殖抑制率增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；相同濃度L-as

3、p作用于Jurkat細胞、K562細胞和K562/ADM細胞不同時間，隨著時間的延長細胞增殖抑制率增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（2）相同濃度L-asp作用相同時間時，K562細胞與K562/ADM細胞抑制率相比，除0.1U/mlL-asp作用24h、48h抑制率無明顯差別（P＞0.05），在其他濃度時間作用下，L-asp對K562/ADM細胞的抑制率大于K562細胞，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（3）相同時間下L-as

4、p對不同白血病細胞增值抑制率的作用，Jurkat>K562/ADM>K562。
　　2.24h時Jurkat、K562、K562/ADM細胞的IC50分別為0.62ug/ml，766.34ug/ml，16.10ug/ml；48h時 Jurkat、K562、K562/ADM細胞的 IC50分別為0.11ug/ml，399.55ug/ml，6.17ug/ml；72h時 Jurkat、K562、K562/ADM細胞的 IC50分別為0.

5、03ug/ml，308.19ug/ml，1.50ug/ml。
　　3.（1）與對照組比較，不同濃度的L-asp作用Jurkat、K562、K562/ADM的G0/G1期均明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05）。（2）相同時間下不同濃度L-asp作用于Jurkat細胞、K562細胞和K562/ADM細胞，隨著濃度的增加G0/G1期細胞所占比例增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；相同濃度L-asp作用于Jurkat細胞、K562

6、細胞和K562/ADM細胞不同時間，隨著時間的延長G0/G1期細胞所占比例增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（3）相同濃度L-asp作用相同時間時，K562細胞與K562/ADM細胞G0/G1期所占比例均有不同，K562/ADM細胞G0/G1期所占比例大于K562細胞，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（4）相同時間下L-asp對不同細胞G0/G1期細胞所占比例的影響，Jurkat>K562/ADM>K562。
　　結(jié)論：

7、L-asp對Jurkat、K562、K562/ADM細胞的增殖均有抑制作用，但不同白血病細胞對L-asp敏感性不同；L-asp可以將細胞阻滯在G0/G1期，對不同白血病細胞的阻滯作用也不同。
　　第二部分兒童急性淋巴細胞性白血病融合基因動態(tài)檢測及其意義
　　目的：探討在兒童急性淋巴細胞白血病治療過程中融合基因動態(tài)檢測的臨床意義，為臨床治療提供幫助。
　　方法： ALL患兒168例，融合基因陰性84例，融合基因陽性84例

8、，其中包括TEL-AML1、EVI1、其他融合基因（BCR-ABL、E2A-PBX1、SIL-TAL1、MLL重排）、雙融合基因陽性（EVI1，E2A-PBX1雙表達；EVI1，TEL-AML1雙表達；EVI1，SIL-TAL1雙表達；TEL-AML1，MLL重排雙表達），在發(fā)病初期及治療過程中通過基因擴增技術(shù)檢測融合基因的變化和臨床多因素來分析臨床療效，根據(jù)卡方檢驗、Kaplan-Meier及COX比例風險回歸模型進行分析。
　

9、　結(jié)果：1.融合基因陽性ALL患兒對OS無顯著影響（χ2=3.36，P＞0.05），對EFS有顯著影響（χ2=14.61，P＜0.05）；TEL-AML1患兒比基因陰性患兒、其他融合基因患兒EFS率顯著升高（χ2=6.88、3.93，P＜0.05）。
　　2.TEL-AML1、其他組融合基因持續(xù)轉(zhuǎn)陰患兒比融合基因未持續(xù)轉(zhuǎn)陰患兒3年EFS率顯著升高（χ2=8.93、6.09，P＜0.05），EVI1、雙融合基因陽性患兒兩者之間無明顯

10、差異（χ2=1.53、0.67，P＞0.05）。
　　3.融合基因1年內(nèi)是否轉(zhuǎn)陰對患兒3年EFS率無明顯意義（χ2=0.82,2.75,＜0.01,0.67，P＞0.05）。
　　4.初發(fā)ALL融合基因陽性且基因未持續(xù)轉(zhuǎn)陰患兒年齡>10歲，免疫分型為T型，臨床危險度為高危，誘導緩解治療第15天、第33天MRD≥10-2患兒3年EFS率顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.54～7.97，P＜0.05）。
　　5.初發(fā)A