微小殘留白血病監(jiān)測的研究——FQ-PCR檢測白血病融合基因：細胞水平的研究及初步臨床觀察.pdf

1、廣州醫(yī)學院碩士學位論文微小殘留白血病監(jiān)測的研究——FQPCR檢測白血病融合基因：細胞水平的研究及初步臨床觀察姓名：梁潔芳申請學位級別：碩士專業(yè)：兒科學指導教師：葉鐵真20090522微小殘留白m病監(jiān)測的研究一一FQPCR檢測白血病融合基W：細胞水平的研究及初步臨床觀察中文摘要chainreaction，PCR)等，不同方法各有利弊。核型分析、FISH和FCM等的敏感性分別為lo1～10～、10。210。3和lO一～104，難以滿足對MR

2、D診斷的需要，且都存在或操作費時，或費用較高，或?qū)颖疽筝^高等不足之處。FQPCR(fluorescentquantitativePCR，F(xiàn)Q—PCR)足在PCR基礎上發(fā)展的核酸分子定量技術(shù)，該技術(shù)以Ig／TCR重排、染色體易位斷裂融合區(qū)為標志，結(jié)合探針和引物的合理搭配，利用熒光信號的變化，實時檢鋇iJPCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化，通過循環(huán)閡值(cyclethreshold，Ct)和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析，

3、具有敏感度高、準確定量、簡便快速，污染較少等優(yōu)點，是目前最為理想的MRD定量檢測方法。檢測白血病MRD的靶標志之一融合基因足由于染色體結(jié)構(gòu)改變導致的分子水平的異常，目前已發(fā)現(xiàn)超過50種與白血病有關(guān)的融合基因異常，這些異常已成為不同類型自血病的分子牛物學特異性標志，可作為臨床上對自血病進行分型、頇后判斷和殘留病追蹤的依據(jù)。由歐洲10個國家26個實驗室共同參與研究制定的“歐洲防癌計劃”(EuropeAgainstCancerprogram，

4、EAC)，通過以FQ—PCR方法檢測9種主要的白血病特異融合基因，建立了一套標準化的MRD定量檢測方法，并初步評價該方法的敏感度、特異性和重復性，為大規(guī)模的臨床實驗研究建立了方法學基礎。該標準化方法在兒童及成人ALL及AML中的檢出率達30％40％，在CML中超過95％。盡管以FQPCR檢測白血病融合基因已應用于臨床，但仍存在下列問題：①對一項檢測方法的評價，應在嚴格的質(zhì)量控制的前提下，對實驗結(jié)果進行真實性(包括敏感性、特異性和約登指數(shù)

5、)和可靠性(主要以變異系數(shù)表示)等方面的評價，而目前的文獻中，僅見對FQ—PCR檢測自血病融合基因的檢測方法進行敏感性、特異性和可靠性的評價，而未見質(zhì)量控制等方面的報道；②在引物、探針、內(nèi)參基因的選擇等技術(shù)問題上尚未達成一致；③目前國際上尚未統(tǒng)一各種白血病融合基因的表達水平與臨床分級和預后的關(guān)系。我們通過前期研究，已分別構(gòu)建了含BCRABLMbcr、BCRABLm—bcr、BCRABL∥一bcr、PML—RARa、AMLl一ETO、TE