pig7基因在急性白血病的表達及對白血病細(xì)胞增殖活性影響的研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文pig7基因在急性白血病的表達及對白血病細(xì)胞增殖活性影響的研究姓名：王東海申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）指導(dǎo)教師：王建祥20070501中周醫(yī)學(xué)科學(xué)院中圖協(xié)和仄科凡學(xué)博I’學(xué)位論文中文摘要研究目的：檢測pi97基因在急性白血病(AL)的表達水平及其臨床意義，在基因甲基化調(diào)控方面探討白血病細(xì)胞pi97表達異常的可能機制，并通過功能性實驗闡釋pi97對白血病細(xì)胞增殖活性的影響。研究方法：應(yīng)用實時定量逆

2、轉(zhuǎn)錄PCR(RTPCR)，對138例AL患者、2l例正常人骨髓標(biāo)本以及9株白血病細(xì)胞系進行pi97轉(zhuǎn)錄本的檢測。限制性內(nèi)切酶分析以鑒定白血病細(xì)胞中存在的pi97轉(zhuǎn)錄剪接體。通過甲基化特異性PCR(MSP)明確白血病細(xì)胞系pi97基因啟動子區(qū)域是否存在過度甲基化。觀察依托泊甙(yPl6)誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡以及全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化過程中pi97表達水平的變化。構(gòu)建含有pi97開放讀碼框(ORF)的腺病毒表達載體pAd

3、5／F35一pi97，并導(dǎo)入白血病細(xì)胞使之瞬時表達pi97基因，研究該基因的生物學(xué)功能。結(jié)果：與正常對照相比，AL進展期(包括初治、復(fù)發(fā)／難治)pi97mRNA水平明顯降低(_PO叭)，其中急性髓系白血病(AML)與急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)無明顯差異，而初治組與復(fù)發(fā)／難治組pi97mRNA水平差異顯著，前者明顯高于后者(P005)。pi97低表達患者完全緩解率也較低(P005)。BslI限制性酶切結(jié)果提示白血病細(xì)胞中僅存在simpl