基于三丙胺氧化的電化學(xué)-電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器的構(gòu)建及其在蛋白質(zhì)分析中的應(yīng)用.pdf

1、本論文共分為三個章節(jié)，分別為緒論、低電位電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器的研究及應(yīng)用、TPA氧化適配體傳感器在蛋白分析中的研究及應(yīng)用。
　　 緒論部分對適配體的定義、特性、發(fā)展現(xiàn)狀進行了歸納總結(jié)；詳細論述了適配體傳感器的發(fā)展、基本知識及在生物化學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用；重點介紹了電化學(xué)傳感器的原理、發(fā)展現(xiàn)狀及在實際研究中的應(yīng)用。
　　 第二章為低電位電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器的研究及應(yīng)用?；陔娀瘜W(xué)發(fā)光(ECL)的生物傳感器經(jīng)常應(yīng)用于DNA及蛋

2、白質(zhì)分析領(lǐng)域。雖然釕復(fù)合物的電化學(xué)發(fā)光具有高靈敏度，但是其高激發(fā)電位可能導(dǎo)致生物分子的氧化損傷。本工作制備了一種以溶菌酶作為分析樣本的無破壞，低電位電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器。單鏈溶菌酶適配體首先固定在金電極表面，繼而與其互補DNA鏈結(jié)合形成雙鏈DNA。Ru(phen)32+作為電化學(xué)發(fā)光探針插入雙鏈DNA結(jié)構(gòu)。溶菌酶與其適配體高穩(wěn)定性結(jié)合導(dǎo)致雙鏈DNA解離，并釋放出Ru(phn)32+。在雙鏈DNA修飾電極上可以觀察到低電位電化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象

3、，這是由于雙鏈DNA能夠預(yù)富集三丙胺(TPA)并且接受質(zhì)子化的TPAH+所釋放的質(zhì)子。在溶菌酶適配體用作溶菌酶的特殊識別成分的同時，雙鏈DNA為低電位電化學(xué)發(fā)光提供了微環(huán)境。低電位電化學(xué)發(fā)光傳感器獲得了0.45pM的溶菌酶檢測限。日間精確度(RSDs，n=5)小于5％，顯示了適配體傳感器的可靠性。本適配體傳感器的再生性能證實低電位電化學(xué)發(fā)光可以降低生物分子的氧化損傷。本方法成功用于稀釋蛋清樣品的直接分析。本工作提出了一種前景可觀的高靈敏

4、生物分析平臺，并可以應(yīng)用于其他低電位電化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)的開發(fā)。
　　 第三章為TPA氧化適配體傳感器在蛋白分析中的研究及應(yīng)用。三丙胺(TPA)在雙鏈DNA和單鏈DNA修飾電極上有著不同的氧化效率。利用這一性質(zhì)，本工作以溶菌酶為例，利用TPA氧化探測分子內(nèi)置換構(gòu)筑了電化學(xué)生物傳感器。與溶菌酶適配體互補的單鏈DNA通過金硫鍵固定在金電極表面，繼而在電極表面與溶菌酶適配體結(jié)合形成雙鏈結(jié)構(gòu)。10μL溶菌酶樣品與其適配體反應(yīng)，由于溶菌酶與

5、其適配體的高親合力，溶菌酶置換互補鏈，導(dǎo)致雙鏈DNA解鏈。修飾電極在20mM TPA溶液中掃描，電壓0.2-0.95V。氧化電流的變化用來定量溶菌酶的含量，線性范圍為1.0pM到1.1nM，即6.0×106個溶菌酶分子可以被檢測到。由于信號來自電極表面預(yù)富集的TPA，本方法在獲得高靈敏度的同時，還具有簡單、穩(wěn)定、特異、節(jié)省時間等優(yōu)點，并且避免了復(fù)雜樣品的預(yù)處理及DNA鏈的標記。蛋清樣品的直接分析驗證本生物傳感器可行性，其回收率及重現(xiàn)性分