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1、作為一種原位可視化觀測(cè)技術(shù)的熒光成像在小分子檢測(cè)方面得到了廣泛應(yīng)用,其中有機(jī)小分子近紅外熒光探針具有背景干擾低、光穿透性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高、對(duì)生物體損傷小等優(yōu)點(diǎn),表現(xiàn)出非常好的應(yīng)用前景。本論文的工作主要基于基于花菁近紅外熒光探針分別實(shí)現(xiàn)了對(duì)含巰基氨基酸(GSH、Cys和 Hcy)、肼、超氧自由基陰離子的定量檢測(cè)。主要工作如下:
(1)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GSH近紅外熒光探針技術(shù)是一個(gè)理解疾病機(jī)制的有效手段,本文第二章描述了設(shè)計(jì)合成花菁近紅
2、外熒光探針CyDNS,基于生物巰基特異性斷裂O-S鍵,繼而發(fā)生分子內(nèi)1,6-消除,釋放出熒光團(tuán),熒光得以恢復(fù)。并且我們將探針成功用于細(xì)胞、活體及各種組織器官的成像。
此處為圖片
(2)合成了一個(gè)髙選擇性、高靈敏度檢測(cè)Cys的近紅外熒光探針CyA,該探針具有裸眼可視顏色變化,大的紫外吸收波長(zhǎng)變化,熒光增強(qiáng)的性質(zhì),在HEPES緩沖溶液中或在稀釋的血清中都表現(xiàn)出優(yōu)異的性能。該探針在Cys存在下發(fā)生共軛加成并環(huán)化消除,具有較
3、低的檢測(cè)限(熒光:0.16μM,紫外:0.13μM),最終低毒性的探針成功用于細(xì)胞成像。
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(3)在前面工作的基礎(chǔ)上,我們?cè)O(shè)計(jì)合成了基于乙?;鳛樽R(shí)別基團(tuán)的近紅外熒光探針CyJ,利用肼的親核性實(shí)現(xiàn)熒光的增強(qiáng)變化。探針不僅容易合成,而且表現(xiàn)出非常好的識(shí)別性質(zhì),探針對(duì)肼具有高度選擇性,較低的檢測(cè)限(5.4 ppb)和快速檢測(cè)肼,同時(shí)探針對(duì)肼蒸氣的檢測(cè)也有非常高的靈敏度。我們也將探針用于細(xì)胞、小鼠及其組織的成像。
4、
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(4)合成設(shè)計(jì)了新型的近紅外熒光探針(CyR),其結(jié)構(gòu)包括作為熒光團(tuán)的變形花菁骨架和作為超氧自由基陰離子O2·-識(shí)別基團(tuán)的二苯基次磷?;?。利用O2·-的親核性對(duì)次磷?;M(jìn)攻并消除,熒光團(tuán)的熒光得以恢復(fù)。探針具有高選擇性、高靈敏度、低檢測(cè)限(9.9 nM)和快速響應(yīng)(10 min)的能力,此外,探針細(xì)胞滲透性好,可以在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在并具有非常低的細(xì)胞毒性。這些性質(zhì)使得探針很好的運(yùn)用于斑馬魚和小鼠的活體成像
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