微囊藻毒素microcystin-LR對斑馬魚組織病理損傷和免疫調(diào)節(jié)的影響.pdf

1、隨著人類社會的發(fā)展，大量生活污水以及在農(nóng)業(yè)上施用的化肥等營養(yǎng)物質(zhì)不斷排入江河湖泊等水體，造成水體富營養(yǎng)化問題日益嚴重，導(dǎo)致藍藻水華頻繁暴發(fā)。藍藻水華大面積暴發(fā)的重要危害之一是產(chǎn)生多種類型的藻毒素。微囊藻毒素(microcystins，MCs)是眾多藍藻毒素種類中最為常見的一類，而且LR型微囊藻毒素(microcystin-LR，MC-LR)的毒性最大，分布最廣，危害也最為嚴重。魚類可以通過皮膚和鰓的呼吸作用以及攝食吸收水中的微囊藻毒素。

2、MC-LR在魚體內(nèi)的主要靶器官是肝臟，可對肝臟造成嚴重損傷。近年來，研究發(fā)現(xiàn)MC-LR還可以造成魚類腎臟、脾臟等組織器官發(fā)生病理損傷，以及對魚類的免疫調(diào)節(jié)產(chǎn)生影響。
　　本研究從斑馬魚的組織病理損傷和免疫調(diào)節(jié)兩個方面，探究MC-LR對斑馬魚的致毒效應(yīng)。以3月齡的性成熟斑馬魚為實驗材料，對其進行為期30 d的MC-LR的體外暴露，處理濃度分別為0、1、5、20μg/L;通過使用光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察斑馬魚脾臟、腸道和鰓的組織

3、病理變化;使用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測斑馬魚脾臟、腸道和鰓3個組織中五個免疫相關(guān)基因Ⅰ型干擾素（IFN-1）、白介素-1β(IL-1β)、白介素-8（IL-8、轉(zhuǎn)化生長因子β（TG Fβ）、腫瘤壞死因子α(TNFα)轉(zhuǎn)錄水平的變化。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1.MC-LR對斑馬魚脾臟、腸道和鰓的組織病理影響
　　通過光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)MC-LR暴露導(dǎo)致斑馬魚脾臟、腸道和鰓均出現(xiàn)不同程度損傷。在5和

4、20μg/L MC-LR處理組中，斑馬魚脾臟出現(xiàn)組織壞死，淋巴細胞線粒體水腫，細胞核變形和細胞質(zhì)濃縮;光鏡觀察結(jié)果顯示斑馬魚腸道絨毛頂端細胞溶解，腸道上皮細胞脫落，絨毛出現(xiàn)破損，通過電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)斑馬魚腸道微絨毛斷裂并出現(xiàn)嚴重脫落;鰓組織光鏡切片觀察發(fā)現(xiàn)，鰓組織上皮水腫、隆起，鰓絲出血和鰓小片充血、融合。對斑馬魚前腸和后腸絨毛高度檢測結(jié)果顯示，MC-LR暴露導(dǎo)致腸道絨毛損傷，處理組斑馬魚腸道絨毛高度顯著性低于對照組。結(jié)果表明，MC-

5、LR處理能夠引起斑馬魚脾臟、腸道和鰓發(fā)生嚴重組織損傷，且具有劑量依賴效應(yīng)。
　　2.MC-LR對斑馬魚免疫相關(guān)基因表達的影響
　　經(jīng)過MC-LR暴露后，本研究檢測IFN-1、IL-1β、IL-8、TGFβ和TNFα等五個免疫相關(guān)基因在斑馬魚脾臟、腸道和鰓中的表達。結(jié)果表明不同的基因在不同的組織中隨著MC-LR處理濃度的不同呈現(xiàn)出不同程度的上升表達趨勢。在脾臟中，20μg/L MC-LR處理時IFN-1和IL-8的表達量與對照