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文檔簡介
1、分子印跡整體柱技術(shù)融合了分子印跡技術(shù)的高選擇性和整體柱的高效分離能力的優(yōu)勢,是近年來快速發(fā)展的一種新穎的分離技術(shù)。但是將這種技術(shù)應(yīng)用于蛋白質(zhì)的富集和分離尚在起步階段。
本論文將蛋白質(zhì)分子印跡技術(shù)與有機(jī)整體柱結(jié)合在一起,研究了以多巴胺(dopamine)為功能單體的溶菌酶(Lyz)蛋白質(zhì)分子印跡整體柱的制備,本論文的工作主要分為以下三個部分:
第一部分,概述了蛋白質(zhì)印跡技術(shù),整體柱技術(shù),以及分子印跡整體柱技術(shù)的
2、基本理論及發(fā)展應(yīng)用。
第二部分,合成甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA)-二乙烯苯(DVB)的有機(jī)整體柱骨架,并對其制孔劑選擇、單體和交聯(lián)劑比例及合成條件進(jìn)行了優(yōu)化。經(jīng)電鏡掃描、流速-背壓關(guān)系及壓汞考察,該整體柱骨架具有良好的孔徑結(jié)構(gòu)。以該骨架為基質(zhì),利用甲基丙烯酸縮水甘油酯富含的環(huán)氧基團(tuán)采用Schiff法固載模板蛋白溶菌酶,以多巴胺為功能單體,二次聚合于基質(zhì)表面,制備共價型溶菌酶蛋白質(zhì)分子印跡整體柱,并對其識別性能進(jìn)行了探索。
3、
第三部分,以甲基丙烯酸縮水甘油酯-二乙烯苯的有機(jī)整體柱骨架為基質(zhì),多巴胺為功能單體,采用表面非共價鍵印跡法制備了多巴胺包覆的溶菌酶印跡整體柱。利用多巴胺含有的苯環(huán)與有機(jī)整體柱骨架上的苯環(huán)的π-π電子配對作用,將模板蛋白溶菌酶包覆在整體柱基質(zhì)表面,形成的2D印跡孔穴在最優(yōu)高效液相色譜條件下,對目標(biāo)蛋白溶菌酶具有良好的識別作用,印跡因子達(dá)到了5.04。并利用該印跡整體柱進(jìn)行了實際樣雞蛋清中溶菌酶的分離分析,取得了滿意的結(jié)果。
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