乙?;鞍椎蔫b定研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩50頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、乙酰化是一種可逆且高度調控的蛋白質翻譯后修飾,主要發(fā)生于蛋白質賴氨酸殘基的ε-NH2位,它調控細胞凋亡、亞細胞的定位、DNA和蛋白質相互作用、DNA復制和修復、DNA轉錄的活性及蛋白質的穩(wěn)定性等蛋白質相關過程。賴氨酸的乙酰化修飾和調控其發(fā)生的酶與生命的老化過程及一些重大的疾病如癌癥,心血管疾病存在著密切的聯(lián)系,由此蛋白質乙?;g后修飾的鑒定具有重要的生物學意義。傳統(tǒng)乙?;鞍阻b定的方法有放射性檢測和免疫親和檢測,但是這些方法都僅能檢測

2、到乙?;鞍椎拇嬖?不能得到具體的乙?;揎椢稽c信息。軟電離生物質譜技術ESI-MS和MALDI-MS能很好地應用于翻譯后修飾的鑒定研究,不僅能檢測到翻譯后修飾蛋白,且能得到具體的修飾位點信息。
   本研究工作旨在考察兩類生物質譜技術ESI-MS和MALDI-MS在乙?;鞍踪|翻譯后修飾鑒定中的應用及其應用于小鼠肝乙?;揎椬V的鑒定研究。本論文的第一章主要對蛋白質組學中翻譯后修飾的研究發(fā)展,各種翻譯后修飾的鑒定研究策略,乙?;?/p>

3、翻譯后修飾研究進展進行了概述。本文的研究工作主要分為兩個部分,分別在第二章和第三章中作了詳細介紹。第二章的研究中,利用兩類生物質譜技術ESI-MS(LC-IT-TOF質譜儀,LTQ-Orbitrap質譜儀)和MALDI-MS(4700 Proteomics Analyzer質譜儀,QIT質譜儀),對乙?;瘶藴实鞍滓阴;疊SA進行質譜鑒定研究,為小鼠肝乙?;鞍踪|修飾譜的鑒定研究提供方法學的參考。實驗表明,LC-ESI-MS(LTQ-Or

4、bitrap)和MALDI-TOF-TOF(4700 proteomic analyzer)兩種方法鑒定乙?;鞍纵^另外兩種質譜方法優(yōu)越,且這兩種方法在乙酰化后修飾鑒定上具有互補的特性。在第三章的研究中,我們根據(jù)第二章的研究設計了兩條小鼠肝乙?;鞍椎蔫b定研究路線,其一為利用成熟的蛋白質分離技術二維凝膠電泳(2DE)分離鼠肝全蛋白,采用生物醫(yī)學研究院趙世明老師提供的賴氨酸乙?;贵w進行2D Western-Blotting驗證,將Wes

5、tern-Blotting免疫印跡分析中呈陽性反應的點比對到2DE凝膠,并將篩選到的蛋白點切膠酶解,用4700 Proteomics Analyzer質譜儀鑒定分析,鑒定到6個賴氨酸乙?;鞍?8個賴氨酸乙酰化修飾位點。其二為利用免疫沉淀技術富集小鼠肝全蛋白中的乙?;鞍?用LTQ-Orbitrap質譜儀分析鑒定,鑒定到91個賴氨酸乙?;鞍?216個賴氨酸乙酰化修飾位點。在鑒定到的97個乙?;鞍字?大部分未有被文獻報道過。我們對鑒定

6、到的蛋白進行了生物功能、生理過程、亞細胞定位的分類。此外,我們用Q-Star飛行時間質譜儀(ESI源)進行了小鼠肝中蘇氨酸和絲氨酸上的乙?;鞍追g后修飾鑒定,鑒定了18個蘇氨酸乙?;g后修飾蛋白,21個蘇氨酸乙?;揎椢稽c,25個絲氨酸乙酰化修飾蛋白,30個絲氨酸乙?;揎椢稽c,極大地補充了數(shù)據(jù)。本論文的第四章對乙?;g后修飾的發(fā)展做了總結,對本研究工作進行了展望。本研究為首次結合兩類生物質譜技術對小鼠鼠肝樣品進行大規(guī)模的乙酰化蛋

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論