乙?；鞍椎蔫b定研究.pdf

1、乙酰化是一種可逆且高度調控的蛋白質翻譯后修飾,主要發(fā)生于蛋白質賴氨酸殘基的ε-NH2位,它調控細胞凋亡、亞細胞的定位、DNA和蛋白質相互作用、DNA復制和修復、DNA轉錄的活性及蛋白質的穩(wěn)定性等蛋白質相關過程。賴氨酸的乙酰化修飾和調控其發(fā)生的酶與生命的老化過程及一些重大的疾病如癌癥,心血管疾病存在著密切的聯(lián)系,由此蛋白質乙?；g后修飾的鑒定具有重要的生物學意義。傳統(tǒng)乙?；鞍阻b定的方法有放射性檢測和免疫親和檢測,但是這些方法都僅能檢測

2、到乙?；鞍椎拇嬖?不能得到具體的乙?；揎椢稽c信息。軟電離生物質譜技術ESI-MS和MALDI-MS能很好地應用于翻譯后修飾的鑒定研究,不僅能檢測到翻譯后修飾蛋白,且能得到具體的修飾位點信息。
　　 本研究工作旨在考察兩類生物質譜技術ESI-MS和MALDI-MS在乙?；鞍踪|翻譯后修飾鑒定中的應用及其應用于小鼠肝乙?；揎椬V的鑒定研究。本論文的第一章主要對蛋白質組學中翻譯后修飾的研究發(fā)展,各種翻譯后修飾的鑒定研究策略,乙?；?/p>

3、翻譯后修飾研究進展進行了概述。本文的研究工作主要分為兩個部分,分別在第二章和第三章中作了詳細介紹。第二章的研究中,利用兩類生物質譜技術ESI-MS(LC-IT-TOF質譜儀,LTQ-Orbitrap質譜儀)和MALDI-MS(4700 Proteomics Analyzer質譜儀,QIT質譜儀),對乙?；瘶藴实鞍滓阴；疊SA進行質譜鑒定研究,為小鼠肝乙?；鞍踪|修飾譜的鑒定研究提供方法學的參考。實驗表明,LC-ESI-MS(LTQ-Or

4、bitrap)和MALDI-TOF-TOF(4700 proteomic analyzer)兩種方法鑒定乙?；鞍纵^另外兩種質譜方法優(yōu)越,且這兩種方法在乙酰化后修飾鑒定上具有互補的特性。在第三章的研究中,我們根據(jù)第二章的研究設計了兩條小鼠肝乙?；鞍椎蔫b定研究路線,其一為利用成熟的蛋白質分離技術二維凝膠電泳(2DE)分離鼠肝全蛋白,采用生物醫(yī)學研究院趙世明老師提供的賴氨酸乙?；贵w進行2D Western-Blotting驗證,將Wes

5、tern-Blotting免疫印跡分析中呈陽性反應的點比對到2DE凝膠,并將篩選到的蛋白點切膠酶解,用4700 Proteomics Analyzer質譜儀鑒定分析,鑒定到6個賴氨酸乙?；鞍?8個賴氨酸乙酰化修飾位點。其二為利用免疫沉淀技術富集小鼠肝全蛋白中的乙?；鞍?用LTQ-Orbitrap質譜儀分析鑒定,鑒定到91個賴氨酸乙?；鞍?216個賴氨酸乙酰化修飾位點。在鑒定到的97個乙?；鞍字?大部分未有被文獻報道過。我們對鑒定

6、到的蛋白進行了生物功能、生理過程、亞細胞定位的分類。此外,我們用Q-Star飛行時間質譜儀(ESI源)進行了小鼠肝中蘇氨酸和絲氨酸上的乙?；鞍追g后修飾鑒定,鑒定了18個蘇氨酸乙?；g后修飾蛋白,21個蘇氨酸乙?；揎椢稽c,25個絲氨酸乙酰化修飾蛋白,30個絲氨酸乙?；揎椢稽c,極大地補充了數(shù)據(jù)。本論文的第四章對乙?；g后修飾的發(fā)展做了總結,對本研究工作進行了展望。本研究為首次結合兩類生物質譜技術對小鼠鼠肝樣品進行大規(guī)模的乙酰化蛋