貝加因、恩替卡韋和三苯氧胺與蛋白質(zhì)、DNA相互作用的電化學(xué)研究.pdf

1、藥物分子與生物大分子的相互作用的研究，是生命科學(xué)研究的熱門課題。在諸多用于研究藥物分子與生物大分子相互作用的方法中，電化學(xué)方法具有快速靈敏、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，能獲取其相互作用機(jī)理的相關(guān)信息。本文以伏安法和零流電位法為研究手段，分別以天貝加因、恩替卡韋和三苯氧胺為藥物小分子物質(zhì)研究對(duì)象，研究了它們與DNA或蛋白質(zhì)的相互作用，具體研究結(jié)果分述如下： 1、對(duì)類黃酮化合物貝加因(BA)的氧化機(jī)理及其與人血清白蛋白(HSA)的相互作用做了研

2、究。研究表明，在pH3.3的BR緩沖溶液中，貝加因A環(huán)上6，7—OH首先在較低電位0.35V下經(jīng)過一個(gè)兩電子轉(zhuǎn)移過程，形成鄰二苯醌衍生物。此氧化過程中還伴隨有一個(gè)中間態(tài)自由基生成的過程。所形成鄰二苯醌衍生物一部分在較高電位0.71V下經(jīng)過一個(gè)兩電子轉(zhuǎn)移過程形成醌的衍生物，另一部分在電位0.32V下發(fā)生還原反應(yīng)生成BA。當(dāng)有HSA存在時(shí)，HSA會(huì)很快與BA結(jié)合形成一種穩(wěn)定的非電活性的配合物HSA·BAm。實(shí)驗(yàn)測(cè)得HSA與BA的結(jié)合比m為2

3、，表觀結(jié)合常數(shù)β為(3.26±0.15)×109(mol·L-1)-2(P=0.90)。 2、采用循環(huán)伏安法和示差脈沖伏安法在碳糊電極(CPE)和DNA修飾碳糊電極(DNA/CPE)上考察了BA和小牛胸腺dsDNA的相互作用。在BR(pH3.3)緩沖溶液中，當(dāng)BA與溶液中或電極表面的DNA反應(yīng)后，BA的氧化峰電位均正移，峰電流都減小。研究表明，BA與DNA的堿基對(duì)以嵌插方式結(jié)合，形成結(jié)合比為1：1的配合物DNA·BA，表觀結(jié)合常

4、數(shù)β為6.07×107(mol·L-1)-1。另外，DNA/CPE上鳥嘌呤和腺嘌呤的氧化峰電流隨BA．濃度的增大而增大，由于BA分子的嵌入和BA中間態(tài)氧化產(chǎn)物BA半醌自由基的產(chǎn)生破壞了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)。而且，DNA/CPE上鳥嘌呤的氧化峰電流與BA的濃度呈現(xiàn)一條BA滴定DNA的滴定曲線，可以提供所修飾在CPE表面DNA量的信息。 3、用單掃描伏安法研究了恩替卡韋(ETV)與牛血清白蛋白(BSA)之間的相互作用。在HAc—N

5、aAc(pH4.4)緩沖溶液中，ETV在碳糊電極上于1.1V(vs．SCE)處出現(xiàn)一氧化峰。加入BSA之后，其峰電流明顯下降，峰電位基本不發(fā)生移動(dòng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ETV與BSA形成了非電活性的配合物。根據(jù)加入BSA前后，ETV氧化峰電流的降低值計(jì)算得出，BSA與ETV的結(jié)合比為1：2，表觀結(jié)合常數(shù)β為2.37×104(mol±L-1)-2。 4、提出了一種研究DNA與小分子物質(zhì)相互作用的新方法—零流電位法，并推導(dǎo)了相關(guān)公式。在B

6、R(pH3.3)緩沖液中，在DNA修飾碳糊(DNA/CP)上用零流電位法研究了DNA與天然抗氧化劑貝加因(BA)的相互作用，測(cè)得了結(jié)合反應(yīng)的熱力學(xué)及反應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)。根據(jù)DNA與BA結(jié)合反應(yīng)所引起的DNA/CP在BRt(pH3.3)緩沖液中的零流電位移動(dòng)，求得的DNA與BA的結(jié)合比為1：1和表觀結(jié)合常數(shù)β為7.58×107L·mol-1、結(jié)合反應(yīng)的表觀結(jié)合速率常數(shù)ka為2.33×103(mol·L-1)—1·s-1。這些熱力學(xué)常數(shù)值與用前

7、文伏安法測(cè)得的相符。另外，用相同方法，研究了電化學(xué)損傷的DNA(DNAox)與BA的相互作用，求得受損DNAox與BA的結(jié)合比m為1：1和表觀結(jié)合常數(shù)β為4.92×1010L·mol-1、結(jié)合反應(yīng)的表觀結(jié)合速率常數(shù)ka為4.29×103(mol·L-1)—1·s-1。 5、在PBS(pH7.0)緩沖溶液中，考察了三苯氧胺(TAM)和DNA的伏安行為，結(jié)果表明，TAM與DNA的氧化峰互相重疊，用伏安法難以研究TAM與DNA的相互作