環(huán)境污染物手性異構(gòu)體的毛細(xì)管電泳分析方法研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳（capillary electrophoresis，CE）是二十世紀(jì)80年代興起的一種分離效率高、樣品消耗少、分離模式多的分離技術(shù)。其分離原理是在毛細(xì)管內(nèi)，不同的分析物在高壓電場(chǎng)的驅(qū)動(dòng)下，其遷移速度具有差異。通過手性選擇劑（手性識(shí)別劑）的介入，毛細(xì)管電泳可以實(shí)現(xiàn)手性化合物的分離。手性選擇劑的種類繁多，分離模式靈活多樣，因此毛細(xì)管電泳在手性分離領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。隨著化學(xué)工業(yè)和環(huán)境科學(xué)的不斷發(fā)展，人們對(duì)環(huán)境污染物、食品及藥品安全的關(guān)

2、注度日益提高。尤其是對(duì)于手性化合物而言，人們十分關(guān)心其對(duì)映體的差異。這迫切需要人們建立強(qiáng)大的手性分離方法，從對(duì)映體層面上獲取更多的信息。 本論文利用毛細(xì)管電泳對(duì)手性污染物（抑霉唑、右旋反式烯丙菊酯）的對(duì)映體進(jìn)行了分離和相關(guān)檢測(cè)，建立了抗帕金森藥物羅替戈汀及其相關(guān)手性雜質(zhì)的分離分析方法，并研究了其對(duì)血清白蛋白的對(duì)映體特異性結(jié)合。主要工作如下： 1、建立了以環(huán)糊精為手性選擇劑分離殺真菌劑抑霉唑?qū)τ丑w的毛細(xì)管電泳方法，并用此方

3、法研究抑霉唑在土壤中降解的對(duì)映體選擇性。最優(yōu)分離緩沖液組成為：5 mmol/Lβ-環(huán)糊精，50 mmol/L NaH2PO4，5 mmol/L（NH4）H2PO4，pH3．0。（-）-和（+）-抑霉唑?qū)τ丑w的檢測(cè)限分別為0．24和0．26μg/mL。抑霉唑在土壤中的降解速度按以下順序依次降低：紫外光照>太陽光照>種植小麥>滅菌土壤>避光。抑霉唑在由市郊采集的弱堿性土壤（pH8．2）中未呈現(xiàn)對(duì)映體選擇性降解； 2、建立并比較了分離

4、右旋反式烯丙菊酯對(duì)映異構(gòu)體的環(huán)糊精-微乳液電動(dòng)色譜（CD-MEEKC）和環(huán)糊精一膠束電動(dòng)色譜（CD-MEKC）兩種方法。對(duì)于兩種方法，我們分別優(yōu)化環(huán)糊精種類和濃度、緩沖液pH和組成、有機(jī)改性劑和溫度。最優(yōu)的CD-MEEKC分離條件是0．8%正庚烷，2．3%十二烷基磺酸鈉，6．6%正丁醇，90．3%10 mM硼酸鈉，3%（w/v，環(huán)糊精質(zhì)量與微乳液體積之比）甲基-β-環(huán)糊精，pH10，25℃。最優(yōu)的CD-MEKC分離條件是3．3%十二烷基

5、磺酸鈉，96．7%10 mM硼酸鈉，5%（w/v）β-環(huán)糊精，pH10，25℃。兩種方法均具有出色的分離能力（Rs≈3），分析時(shí)間約為15分鐘。CD-MEEKC和CD-MEKC兩種方法均具有較高的分離效率、較低的檢測(cè)限以及較好的重現(xiàn)性； 3、建立了由磺化β-環(huán)糊精（S-β-CD）和甲基-β-環(huán)糊精（M-β-CD）組成的雙環(huán)糊精體系分離抗帕金森藥物羅替戈?。≧otigotine）及其相關(guān)手性雜質(zhì)的毛細(xì)管電泳方法。我們優(yōu)化了環(huán)糊精種

6、類及濃度、緩沖液pH和緩沖液離子強(qiáng)度。在最優(yōu)分離條件：2%（w/v）磺化β-環(huán)糊精，2%（w/v）甲基-β-環(huán)糊精，100 mM磷酸鹽，pH2．5，-20 kV，200 nm，20℃，6種分析物可以達(dá)到滿意的分離。遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于0．58%，峰面積比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3．78%。線性范圍在0．005-0．25 mM，回收率在95．9-108．3%。檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ）分別為0．003和0．01 mM。該

7、方法應(yīng)用于測(cè)定5批次羅替戈汀的手性雜質(zhì)； 4、利用毛細(xì)管電動(dòng)色譜（EKC），使用陰離子多聚糖磺化葡聚糖作為手性選擇劑分離兩種抗帕金森病藥物：羅替戈汀和苯海索。手性分離在正向或反向電壓模式下均可實(shí)現(xiàn)，但對(duì)映體遷移順序相反?？疾炝擞绊懯中苑蛛x的因素，如：緩沖液pH，磺化葡聚糖濃度，有機(jī)添加劑，溫度等。反向電壓模式提供較好的分離效果，最優(yōu)分離條件為2．0%（w/v）磺化葡聚糖，10 mM磷酸鹽，pH2．5，分離電壓-30 kV，分離溫

8、度25℃，羅替戈汀、苯海索在40分鐘內(nèi)可實(shí)現(xiàn)分離，分離度分別為2．0和5．8。用分子量為1000000或500000的磺化葡聚糖均可實(shí)現(xiàn)2種藥物的手性分離。手性分離機(jī)制可能牽涉到靜電作用、疏水作用以及空間位阻作用； 5、采用部分填充親和毛細(xì)管電泳在近生理?xiàng)l件（50 mM磷酸鹽，pH7．4，37℃）下研究了抗帕金森藥物羅替戈?。⊿-異構(gòu)體）及其對(duì)映異構(gòu)體（R-異構(gòu)體）與人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）的對(duì)映體特異性結(jié)

9、合行為。首先采用部分填充毛細(xì)管電泳實(shí)現(xiàn)了該藥物對(duì)映體的手性分離，隨后研究了藥物與血清白蛋白的結(jié)合特性。羅替戈汀與2種血清白蛋白的親和力較其對(duì)映體弱；羅替戈汀及其對(duì)映異構(gòu)體與人血清白蛋白的親和力較牛血清白蛋白強(qiáng)。當(dāng)位點(diǎn)標(biāo)記物（華法林或酮基布洛芬）與血清白蛋白的比例達(dá)到一定值時(shí)，其競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合將不利于藥物的手性分離，甚至完全抑制了藥物與血清白蛋白的對(duì)映體特異性結(jié)合。盡管藥物與血清白蛋白之間可能存在協(xié)同結(jié)合，該藥物與人血清白蛋白和牛血清白蛋白的