表面增強(qiáng)拉曼光譜結(jié)合膠體金免疫層析技術(shù)(SERS-ICA)的研究和應(yīng)用.pdf

1、借助于粗糙貴金屬表面數(shù)百萬(wàn)倍的信號(hào)增強(qiáng)效應(yīng)，表面增強(qiáng)拉曼光譜（Surface-Enhanced Raman Spectroscopy，SERS）技術(shù)可檢測(cè)低至單分子水平的目標(biāo)物，已經(jīng)成為目前最靈敏的分析方法之一。表面增強(qiáng)拉曼光譜免疫分析（SERS Immunoassay，SERSIA）技術(shù)是一種結(jié)合了表面增強(qiáng)拉曼光譜的高靈敏度和免疫分析（Immunoassay，IA）的高特異性的超靈敏分析技術(shù)，并在近些年受到了持續(xù)的關(guān)注。然而目前該方法

2、卻也存在如下幾個(gè)方面的問題：
　?、俨僮鲝?fù)雜：材料的制備和預(yù)處理、孵育、洗滌、封閉等步驟不僅耗時(shí)而且繁瑣；
　　②重現(xiàn)性低：雖然SERSIA靈敏度高，但現(xiàn)有大部分方法都難以采集到均勻的拉曼信號(hào)；
　?、勰Ｊ絾我唬篠ERSIA的分析對(duì)象多以大分子物質(zhì)如蛋白質(zhì)或者細(xì)胞為主，亟需拓展到其他領(lǐng)域比如檢測(cè)小分子物質(zhì)；
　?、艹杀靖撸耗壳癝ERSIA活性基底多為貴金屬材料，拉曼儀器和設(shè)備不僅采購(gòu)、維護(hù)成本高昂，而且上機(jī)操作復(fù)

3、雜，這些問題都在一定程度上限制了SERSIA技術(shù)的應(yīng)用。
　　針對(duì)上述問題，本論文首先以拉曼信號(hào)的均勻度為依據(jù)，初步考察了幾種SERSIA基底材料；其次以硝酸纖維素膜（Nitrocellulose membrane,NC）為SERSIA基底，并基于膠體金免疫層析法（Immunochromatographic Assay，ICA）提出了一種使用便攜式表面增強(qiáng)拉曼光譜儀的簡(jiǎn)便、快速、低成本而又超靈敏的表面增強(qiáng)拉曼光譜免疫層析技術(shù)（SE

4、RS-ICA）；最后運(yùn)用該方法檢測(cè)了兩種不同分子量的目標(biāo)物，通過(guò)一些條件的優(yōu)化，均得到優(yōu)異的檢測(cè)結(jié)果。論文的主要工作有以下三個(gè)方面：
　?、俪晒χ苽淞死鼧?biāo)記免疫膠體金，并結(jié)合便攜式表面增強(qiáng)拉曼光譜儀和課題組制備的鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CL）多克隆抗體和包被抗原，初步考察了SERSIA中的幾種基底材料，并發(fā)現(xiàn)：磁珠@Au工藝復(fù)雜，檢測(cè)難度大且重現(xiàn)性低；貴金屬基底雖然性能較好，但是價(jià)格昂貴；功能化玻片雖然成本低，但探

5、針分布過(guò)于分散、過(guò)程繁瑣且耗時(shí)；而基于新型SERS-ICA法的NC膜不僅成本低、易操作、簡(jiǎn)便、快捷，而且拉曼標(biāo)記免疫探針高度集中在約150μm寬的檢測(cè)線（T線），可采集到更為均勻的信號(hào)。
　?、谕ㄟ^(guò)在膠體金表面分別標(biāo)記拉曼標(biāo)記分子和抗體，將SERS和ICA有機(jī)結(jié)合，建立了新型的SERS-ICA法用于檢測(cè)鹽酸克倫特羅，并優(yōu)化了一些實(shí)驗(yàn)條件，獲得優(yōu)異的檢出效果，靈敏度為0.01ngmL-1，檢出限為0.06pgmL-1，還評(píng)價(jià)了方法的