黃酮化合物的化學(xué)發(fā)光分析研究.pdf

1、黃酮類化合物是一類在自然界廣泛分布的多酚類物質(zhì),具有廣泛的生物活性和藥理活性。大量的研究表明,黃酮類化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫、防治血管硬化、降血糖等功能。隨著食品工業(yè)的發(fā)展與消費(fèi)觀念的改變,天然活性成分的保健食品成為現(xiàn)代人追求的目標(biāo),其中黃酮類化合物以純天然、高活性、見效快和作用廣泛等特點逐漸受到人們的關(guān)注。本文研究的主要內(nèi)容如下:
　　 1.高錳酸鉀-乙二醛-硫酸化學(xué)發(fā)光體系測定黃酮

2、類化合物
　　 黃酮類化合物常見的測定方法有:分光光度法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、超臨界流體色譜法、薄層掃描法等。這些方法分析速度慢、且儀器昂貴?；瘜W(xué)發(fā)光不需要任何光源,避免了雜散光的干擾,具有線性范圍寬、靈敏度高、儀器設(shè)備簡單、易實現(xiàn)自動化和分析速度快等優(yōu)點。
　　 通過實驗條件的優(yōu)化,建立了高錳酸鉀-乙二醛-硫酸化學(xué)發(fā)光體系。研究發(fā)現(xiàn),黃酮類化合物在酸性條件下對該體系具有較強(qiáng)的增敏作用,據(jù)此,建立了高錳酸鉀-乙

3、二醛-硫酸化學(xué)發(fā)光體系測定黃酮類化合物的新方法。利用此方法,對柚皮素、柚皮苷、黃芩苷、槲皮素、葛根素、蘆丁、木犀草素-7-O-半乳糖苷、淫羊藿甙、染料木素,以上九種黃酮化合物進(jìn)行了定量分析測定。
　　 2.三種化學(xué)發(fā)光體系測定黃酮化合物的抗氧化能力
　　 抗氧化活性是黃酮類化合物最主要的生物學(xué)功能。目前測定黃酮類化合物抗氧化能力常用的方法是可見光吸收光譜法,用流動注射化學(xué)發(fā)光的很少,本文利用流動注射化學(xué)發(fā)光研究黃酮化合物

4、的抗氧化機(jī)理,并比較它們的活性,探索了黃酮化合物的結(jié)構(gòu)與抗氧化活性之間關(guān)系。
　　 (1)過氧化氫的清除
　　 通過實驗條件的優(yōu)化,建立了魯米諾-過氧化氫-碳酸鹽緩沖液化學(xué)發(fā)光體系。研究發(fā)現(xiàn),黃酮類化合物及蒽醌類化合物在堿性條件下對該體系具有較強(qiáng)的抑制作用,據(jù)此,建立了測定黃酮類化合物及蒽醌化合物抗過氧化氫的方法。本法已用于十八種黃酮化合物及蒽醌類化合物的抗氧化能力測定,并計算出它們的IC50。實驗結(jié)果表明,木犀草素、蘆

5、丁、木犀草素-7-O-半乳糖苷、槲皮素的抗過氧化氫能力較強(qiáng)。
　　 (2)羥基自由基的清除
　　 通過實驗條件的優(yōu)化,建立了魯米諾-過氧化氫-硫酸銅-碳酸鹽緩沖液化學(xué)發(fā)光體系。研究發(fā)現(xiàn),黃酮類化合物及蒽醌類化合物在堿性條件下對該體系具有較強(qiáng)的抑制作用,據(jù)此,建立了測定黃酮類化合物及蒽醌化合物抗羥基自由基的方法。本法已用于十八種黃酮化合物及蒽醌類化合物的抗氧化能力測定,并計算出它們的IC50。實驗結(jié)果表明,蘆丁、葛根素、染

6、料木素、黃芩苷、大豆甙元、山奈酚、木犀草素、木犀草素-7-O-半乳糖苷、槲皮素的抗羥基自由基能力較強(qiáng)。
　　 (3)超氧陰離子的清除
　　 通過實驗條件的優(yōu)化,建立了魯米諾-鄰苯三酚-氫氧化鈉化學(xué)發(fā)光體系。研究發(fā)現(xiàn),黃酮類化合物及蒽醌類化合物在堿性條件下對該體系具有較強(qiáng)的抑制作用,據(jù)此,建立了測定黃酮類化合物及蒽醌化合物抗超氧陰離子的方法。本法已用于十八種黃酮化合物及蒽醌類化合物的抗氧化能力測定,并計算出它們的IC50。

7、實驗結(jié)果表明,木犀草素、蘆丁、染料木素、木犀草素-7-O-半乳糖苷、槲皮素對超氧陰離子的清除能力最強(qiáng)。
　　 以上結(jié)果表明:(1)黃酮化合物B環(huán)上的羥基越多,抗氧化能力越強(qiáng),當(dāng)3',4'存在鄰二羥基時,抗氧化活性就被大大提高了。(2)黃酮化合物C環(huán)上3位羥基的改變會影響其抗氧化效果。(3)黃酮化合物5位羥基可以增強(qiáng)其抗氧化活性。(4)在金屬離子誘導(dǎo)產(chǎn)生自由基的試驗體系中,黃酮化合物C環(huán)上的3位羥基能有效地提高其抗氧化能力,而在非

8、金屬離子誘導(dǎo)產(chǎn)生自由基的體系中C環(huán)上的3位羥基卻貢獻(xiàn)很小。(5)黃酮化合物C環(huán)上2,3位存在雙鍵并和4位羰基存在著共軛作用對抗氧化活性沒有什么影響。(6)在不同的抗氧化體系中,黃酮化合物的抗氧化能力是不一樣的,它們在不同的體系中遵循不同的作用機(jī)制。
　　 3.三種化學(xué)發(fā)光體系測定人們?nèi)粘ｏ嬘貌璧目寡趸芰?br>　　 在上述優(yōu)化好的三種抗氧化體系的基礎(chǔ)上研究保健茶的抗氧化能力。通過提取及提取工藝的確定,測定四十六種保健茶的抗過