簡介：東南大學碩士學位論文蛋白酶體抑制劑DCI對胃癌細胞生物學效應的體外實驗姓名費正華申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學（腫瘤學）指導教師姜藻20070606東南大學碩士學位論文的降解，而DCI可以抑制IKB蛋白泛素化降解，增強其表達。結論1DCI可抑制人胃癌BGC823細胞增殖并促進其凋亡，在此過程中P38MAPK通路激活發(fā)揮重要作用。2低濃度的DCI對胃癌細胞增殖無影響，但可以增強順鉑對BGC823細胞的敏感性，可能與DCI可以抑制I．KB蛋白泛素化降解相關。關鍵詞胃癌；蛋白酶體抑制劑；順鉑；P38MA_PK；IZBⅡ

簡介：學位論文獨創(chuàng)性聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外。論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得壺昌太堂或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名掏茗F如簽字同期2爿5年√月么日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解直墾太堂有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權直昌太堂可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編本學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所和中國學術期刊光盤版電子雜志社將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務。保密的學位論文在解密后適用本授權書學位論文作者簽名手寫聊期艫Ⅲ日導師簽，‘手寫_乏獺搟R鞭山FJ每支具壚。摘要驗組分別加入蛋白質(zhì)合成抑制劑放線菌酮后，WESTERNBLOT方法檢測PUMA蛋白的表達變化情況；RTPCR方法檢測PUMA及凋亡相關基因BAX、BCL．2的MRNA的表達變化；分光光度法檢測細胞的CASPASE．3活性變化。結果經(jīng)PCR及測序結果表明，正確構建野生型、突變型PUMA重組質(zhì)粒，PUMA基因第10位氨基酸的第28～30位堿基由TCC突變?yōu)镚CC，其他堿基均無突變。野生型、突變型PUMA重組質(zhì)粒轉染HELA細胞熒光顯微鏡觀察到綠色熒光表達。WESTERNBLOT和RTPCR均檢測出目的基因的高表達。提示PUMA基因及其定點突變載體均構建成功。在相同轉染效率的情況下，通過WESTERNBLOT分析野生型PUMA組和突變型PUMA組的表達水平，結果表明突變型PUMA蛋白比野生型PUMA蛋白有一個更高的穩(wěn)定狀態(tài)。在表達野生型和突變的PUMA細胞中我們通過實時定量PCR測量出同等量的PUMAMRNA，表明并不是由于轉染效率或不同的轉錄率導致的這種差異；接下來在轉染24H后誘導表達野生型和突變型的PUMA細胞中均加入蛋白質(zhì)合成抑制劑放線菌酮，然后對PUMA蛋白的降解進行檢測，結果表明，由于我們改變了PUMA蛋白的磷酸化位點，導致突變型PUMA蛋白降解延遲、半衰期延長，提示10號位絲氨酸磷酸化在決定PUMA降解率上具有重要的作用；野生型PUMA質(zhì)粒、突變型PUMA質(zhì)粒分別轉染HELA細胞，在24、48小時后測定光密度值，結果發(fā)現(xiàn)細胞轉染兩種質(zhì)粒后，細胞存活率隨著時間的延長逐漸下降，且轉染突變型PUMA質(zhì)粒在24、48小時的存活率均比野生型PUMA質(zhì)粒組低，差異有統(tǒng)計學意義PO．05，這表明突變型PUMA對HELA細胞抑制增殖作用優(yōu)于野生型PUMA；通過PI及HOECHST33342染色后評價細胞核型，計算被轉染細胞中的早期和晚期凋亡細胞數(shù)。轉染24H后，轉染突變型PUMA組在GFP陽性細胞中有22．5％的細胞出現(xiàn)凋亡，空載體組只有11．8％，相比轉染野生型PUMA組細胞中增加了約9．2％的細胞凋亡，差異有統(tǒng)計學意義PO．05。而隨著轉染PUMA在細胞中表達時間的延長，48H后突變型PUMA組比轉染野生型PUMA組細胞凋亡增加了約9．5％，差異有統(tǒng)計學意義PO．05。流式細胞術結果發(fā)現(xiàn)，隨著PUMA轉染時間的增加，野生型和突變型兩組腫瘤細胞的凋亡率均逐漸升高，并且突變型組細胞比野生型組細胞的凋亡率增加更加明顯，這與核染色結果相似。轉染突變型PUMA質(zhì)粒作用HELA細胞，在0、6、12、24、36、48小時，

簡介：中山大學博士后出站報告一、利用SIRNA抑制HEPG2和K562細胞CYCLINDL表達對其生物學特性的影響二、甲異靛抗腫瘤作用及機理的研究博士后王一專業(yè)腫瘤學合作導師劉宗潮教授姜文奇教授中山大學腫瘤防治中心廣州510060二零零六年三月廣州博士后出站報告王一摘要【背景L細胞周期素D1CDL是調(diào)控細胞周期的重要分子。CDL在多數(shù)惡性腫瘤細胞中高表達，是影響腫瘤預后的獨立因素，因此CDL可能成為抗腫瘤治療的靶點。RNA干擾因為對目的基因抑制作用的高效性和特異性，而受到人們的高度關注。本研究采用SIRNA方法沉默腫瘤細胞中CDL的表達，并觀察其相關生物學特性的改變?！痉椒↙按照RNAI靶點原則，設計出可能對CDL有干擾作用的序列，體外合成發(fā)夾結構，并將其連接到含U6啟動子的質(zhì)粒PGE1上。將質(zhì)粒分別轉染到HEPG2和K562細胞中，利用RTPCR篩選出對HEPG2和K562細胞的CDL有抑制作用的重組質(zhì)粒。觀察HEPG2和K562細胞中CDL表達抑制后，細胞周期的變化。篩選穩(wěn)定轉染質(zhì)粒的細胞，并觀察穩(wěn)定轉染PGESIRNACDL可抑制HEPG2和K562細胞中CDL表達的重組質(zhì)粒后，HEPG2和K562細胞中CDL在MRNA和蛋白水平上的表達。觀察HEPG2和K562細胞穩(wěn)定轉染PGESIRNACDL后細胞生長情況的改變，對VPL6敏感性和VPL6誘導細胞凋亡情況的變化?！窘Y果】設計出4個可能干擾序列，按照PGE一1質(zhì)粒的要求將其連接到PGE一1，轉染細胞后發(fā)現(xiàn)，含片段1命名為PGESIRNACDL重組質(zhì)?？擅黠@抑制HEPG2和K562細胞表達CDL，可增加G1期細胞的比例。HEPG2和K562細胞穩(wěn)定轉染PGESIRNACDL后，CDLMRNA和蛋白水平表達均明顯降低，HEPG2和K562細胞CDL表達降低后，其細胞增殖速度亦明顯減慢；PGESIRNACDL的穩(wěn)定轉染提高HEPG21

簡介：Y998188分類號嬰Z坐單位代碼10159學號200316118中回鏨升夫零博士學位論文題目蛋白激酶A對膀胱移行細胞癌的生物學調(diào)控THEMECHANISMOFREGULATIONOFCELLCYCLEANDPROLIFERATIONOFTRANSITIONALCELLCARCINOMAOFBLADDERBYPROTEINKINASEA學科專業(yè)叢盤堂論文課題起止時間2堂主2基二蘭塑壘堡旦論文完成時間2堂主蘭旦蛋白激酶A對膀胱移行細胞癌的生物學調(diào)控前言膀胱癌是泌尿外科最常見的惡性腫瘤，通常采用經(jīng)尿道電切術或膀胱部分切除術進行治療，具有較高的復發(fā)率，術后常規(guī)進行膀胱灌注和膀胱鏡隨訪是膀胱癌治療過程中不可分割的一部分。目前，膀胱癌的發(fā)生機制尚不明確。真核細胞的分裂和增殖依賴于細胞周期的精確調(diào)控，腫瘤細胞參與調(diào)控細胞周期的基因發(fā)生突變，使細胞分裂失去正常的調(diào)控。生長因子及其受體參與調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖，是研究最多的膀胱腫瘤標記物，其中包括表皮生長因子及其受體，胰島素樣生長因子及其受體，血管內(nèi)皮生長因子及其受體。轉化生長因子及其受體等。上述標記物在膀胱移行細胞癌中高表達，參與調(diào)節(jié)腫瘤的新陳代謝和增殖，并與分期、分級和預后相關。目前對于生長因子及其受體的信號傳導通路的下游研究較少，而位于其下游的蛋白激酶對于信號的傳導起著至關重要的作用，是信號傳導鏈條中的軸心部分，通過蛋白激酶激活其它具有生物學活性的酶，發(fā)揮調(diào)節(jié)細胞新陳代謝和增殖的作用。細胞因子及其受體對細胞新陳代謝和增殖的調(diào)節(jié)歸根結底要靠蛋白激酶的激活來完成。因此，研究蛋白激酶對于了解生長因子及其受體的作用機制具有重要意義。目前認為外界因素對細胞分裂主要有兩個調(diào)控點RESTRICTIONPOINT一是處于G1／S轉折點，控制細胞從靜止狀態(tài)G。期進入DNA合成期S期；另一調(diào)控點處于CVM轉折點，是決定細胞一分為二的控制點。非增殖狀態(tài)的細胞處于GO期，在某些刺激因素如生長因子的誘導下，細胞由GO期進入S期。PICA是第二信使CAMP依賴的蛋白激酶，是細胞內(nèi)參與信號轉導通路上重要的激酶，參與調(diào)節(jié)細胞的分化和增殖、離子轉運、新陳代謝的調(diào)節(jié)、基因轉錄等過程。PKA信號轉導系統(tǒng)是由受體、GTP結合蛋白GTPBINDING

簡介：目的胎兒是同種異基因產(chǎn)物，它攜帶被母體認為是外源的父系MHC分子，但卻能抵御母體免疫細胞的攻擊并在妊娠中存活，這其中的機制至今仍不十分清楚。八十年代末，STARKEY和KING發(fā)現(xiàn)妊娠子宮中有大量CD56BRIGHTNK細胞，其特殊的分布狀態(tài)和功能使人們認識到子宮NK細胞可能參與了胚胎的植入和母胎界面免疫平衡的維持。盡管目前對這個過程中的許多環(huán)節(jié)尚不清楚，但已初步證實，子宮NK細胞UNK細胞的數(shù)量或功能失調(diào)與病理性妊娠如流產(chǎn)和先兆子癇等密切相關。研究UNK細胞在妊娠中的分布與機能，探討妊娠期外周血NK細胞PNK細胞和UNK細胞生物學特性的差異，揭示UNK細胞在子宮微環(huán)境中的生理功能及其對母胎界面免疫平衡網(wǎng)絡的影響，有利于人們進一步認識妊娠這一生理過程，并為臨床最終治療病理性妊娠提供了新的思路。本實驗以妊娠早期PNK細胞、UNK細胞、蛻膜組織與滋養(yǎng)層組織作為主要的研究對象，達到以下研究目的1研究妊娠子宮微環(huán)境中UNK細胞表面NKG2A和NKG2D及其相應配體的表達，探討NKG2A與NKG2D的不平衡表達在母胎界面免疫耐受形成中的作用。2研究妊娠期子宮微環(huán)境中子宮NK細胞的生物學特性，探討UNK細胞與周圍的蛻膜組織及滋養(yǎng)層組織的生理功能及相互作用，比較妊娠子宮NK細胞與外周血NK細胞在生理學功能上的差異。方法1選擇30例孕6～9周的正常妊娠婦女，分離其新鮮蛻膜組織，除去絨毛，分離蛻膜和外周血淋巴細胞，采用流式細胞儀測定NK細胞在蛻膜淋巴細胞和外周血淋巴細胞的分布及其表面NKG2A與NKG2D的表達，比較30例早孕婦女與30例未孕婦女外周血NK細胞表面NKG2A與NKG2D表達的差異；RTPCR技術檢測早孕婦女滋養(yǎng)層組織中HLAEMRNA和MICAMRNA的表達。2無菌取早孕婦女新鮮蛻膜組織及外周血標本，除去蛻膜組織中的絨毛，分離蛻膜淋巴細胞，同時分離外周血淋巴細胞，免疫磁珠技術純化UNK細胞與PNK細胞，流式細胞儀檢測其純度，MTT法檢測UNK細胞與PNK細胞對K562的殺傷，效靶比分別為51，251，1251，06251。MTT法檢測UNK細胞與PNK細胞在4H，24H，48H，72H和96H的增殖情況。RTPCR技術檢測UNK細胞與PNK細胞趨化、侵襲、促血管形成等生物學活性相關基因的轉錄水平，同時檢測其相應配體在蛻膜組織和滋養(yǎng)層組織的表達狀況。結果1妊娠子宮蛻膜淋巴細胞中NK細胞約占70％，流式細胞分析的結果顯示，UNK細胞NKG2A的表達水平顯著高于PNK細胞，分別為9786％±175％與3335％±1092％X±S，二者差異有顯著性P＜005，在滋養(yǎng)層細胞中檢測到其配體HLAE的表達；而與PNK細胞相比，UNK細胞表面NKG2D的表達與之較為相近，分別為9321％±452％與9780％±172％，但二者仍有顯著性差異P＜005，在滋養(yǎng)層組織未檢測到其相應配體MICAMRNA的表達。未孕婦女PNK細胞表面NKG2A和NKG2D的表達分別為3350％±845％與9860％±118％，與早孕婦女相比無顯著性差異P＜005。2經(jīng)CD56免疫磁珠處理后所獲得的UNK細胞CD56BRIGHTCD3與PNK細胞CD56DIMCD3純度95％。21MTT法檢測UNK細胞與PNK細胞對K562細胞的殺傷活性，發(fā)現(xiàn)在效靶比為51，251，1251，06251的條件下，UNK細胞的殺傷活性遠低于PNK細胞。22MTT法檢測UNK細胞與PNK細胞在4H，24H，48H，72H和96H的增殖情況，發(fā)現(xiàn)UNK細胞的增殖活性略高于PNK細胞。23UNK細胞與PNK細胞均表達趨化因子受體CCR1，CCR5，CCR7，CXCR2，CXCR4和CX3CR1MRNA，且表達強度相近，其中CXCR4和CX3CR1MRNA的表達水平較高。24UNK細胞與PNK細胞均檢測到VEGFA、VEGFB、VEGFC和VEGFEMRNA的表達，UNK細胞還表達PIGF和ANG2MRNA，同時蛻膜組織可表達VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3，TIE1和TIE2MRNA，但在滋養(yǎng)層組織中僅檢測出VEGFR2和TIE2MRNA的表達。25一些與血管形成相關的因子如HOMEOBOXB3，COX2，HIFΑ1，TGFΒ1和TGFΒ3MRNA也在UNK細胞與PNK細胞表達，INOSMRNA僅在UNK細胞中檢出。26UNK細胞還檢測到TIMP1，TIMP2和TIMP3MRNA的表達。此外，發(fā)現(xiàn)UNK細胞中還表達OPN，PERFIN，GRANZYME，TNFΑ和FASLIGMRNA。結論1蛻膜中的淋巴細胞主要為NK細胞，其免疫學表型與PNK細胞有較大的區(qū)別，妊娠期UNK細胞表面高表達抑制性受體NKG2A，同時滋養(yǎng)層組織表達相應的配體HLAE，這可能是維持母胎界面免疫耐受的重要因素。早孕婦女PNK細胞NKG2A和NKG2D的表達水平與未妊娠者相似，可見妊娠期PNK細胞NKG2A和NKG2D的表達較未妊娠時并無明顯變化。此外，UNK細胞NKG2A的表達水平較PNK細胞顯著升高，NKG2D的表達水平與之較為接近，提示UNK細胞與PNK細胞可能源于相同的前體細胞，由于二者的發(fā)育分化環(huán)境不同導致了表型和功能的差異。2妊娠期UNK細胞與PNK細胞的表型、增殖和殺傷活性有較大不同，其某些細胞因子及其受體的表達狀況與妊娠早期UNK細胞在蛻膜中的募集和生理學功能有關。妊娠期外周血NK細胞在生理功能上與UNK細胞有較大相似性，它能產(chǎn)生多種生物活性因子，參予正常妊娠的維持，但與PNK細胞相比，UNK細胞有更強的促血管形成能力，因此被認為在母胎界面的血管重建中發(fā)揮重要功能。由此可見，UNK細胞是一群具有較強調(diào)節(jié)功能的NK細胞亞群，它通過表面受體或配體與蛻膜組織或滋養(yǎng)層組織表達的配體或受體相互作用，直接或通過分泌一系列細胞因子調(diào)控母胎界面的血管重建及胎盤與滋養(yǎng)層組織的生長和發(fā)育，并同時參與母胎界面的免疫耐受的維持，使胚胎得以順利植入，它是維持胚胎正常發(fā)育的物質(zhì)基礎。

簡介：目的研究臍帶血中CD34／CDL33／VEGFR3淋巴管內(nèi)皮祖細胞經(jīng)VEGFC誘導向淋巴管內(nèi)皮細胞分化過程中細胞表面形態(tài)、內(nèi)部結構和特征性抗原標志物等生物學特征的變化，探討淋巴管內(nèi)皮祖細胞向內(nèi)皮細胞分化的機制。方法從臍靜脈中采取臍帶血，用PERCOLL密度梯度離心法分離單形核細胞，再用抗VEGFR3抗體標記，然后用流式細胞儀分選VEGFR3內(nèi)皮祖細胞。用含有15％FBS、100IU／ML青霉素和100MGL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液對分選后的VEGFR3內(nèi)皮祖細胞進行培養(yǎng)。通過VEGFC誘導，使VEGFR3內(nèi)皮祖細胞向內(nèi)皮細胞分化。在倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化。在掃描電鏡和透射電鏡下觀察細胞表面和細胞內(nèi)超微結構的變化。在共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察特征性標志物的表達變化。結果從臍帶血中分選出的VEGFR3內(nèi)皮祖細胞同時表達CD34和CDL33。剛分選出的CD34／CDL33／VEGFR3淋巴管內(nèi)皮祖細胞呈圓形或橢圓形，胞質(zhì)中含有較多的線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。這兩種細胞器的斷面面積和與細胞質(zhì)的面積比約為3％。經(jīng)VEGFC誘導后2D，細胞呈梭形，出現(xiàn)頭部和尾部。頭部較寬，從頭部伸出板狀偽足和數(shù)個絲狀偽足。絲狀偽足呈錐狀，長短不一。誘導后7D，多數(shù)細胞更加伸展。從細胞頭部伸出寬大、扁薄的板狀偽足，從板狀偽足伸出許多絲狀偽足。絲狀偽足長約為3～5GM，排列密集而規(guī)則。板狀偽足表面可觀察到散在的微絨毛，長約15～2GM。與剛分選出的淋巴管內(nèi)皮祖細胞比較，誘導后7D的細胞細胞質(zhì)中含有更豐富的線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。這兩種細胞器的斷面面積和與細胞質(zhì)的面積比約為9％。胞質(zhì)中出現(xiàn)許多吞飲小泡。祖細胞標志物CDL33表達減弱。經(jīng)VEGFC誘導后14D，細胞體積變大，呈梭形或多邊形，呈現(xiàn)內(nèi)皮細胞的形態(tài)特征，細胞和細胞之間相互連接，呈單層排列。細胞偽足減少，表面可見許多散在分布的細胞小凹和微絨毛。胞質(zhì)中可觀察到有膜包被的WEIBELPALADE小體。細胞表達淋巴管內(nèi)皮細胞特異性標志物LYVE1和5核苷酸酶，CDL33表達消失。結論臍帶血中存在CD34／CDL33／VEGFR3淋巴管內(nèi)皮祖細胞，這些細胞在VEGFC誘導作用下可能通過VEGFC／VEGFR3信號途徑分化為淋巴管內(nèi)皮細胞。在淋巴管內(nèi)皮祖細胞向淋巴管內(nèi)皮細胞分化過程中，細胞的表面形態(tài)、內(nèi)部結構和抗原標志物發(fā)生了一系列特征性的變化。

簡介：781318碩士學位論文2005屆CD40配體在B細胞起源的惡性腫瘤中的異位表。達及其生輛學意義THEECTOPICEXPRESSIONOFCD40LIGANDINBCELLLORIGINATEDMALIGNANCIESANDITSBIOLOGICALCHARACTERISTICS研究生姓名指導教師姓名申請學位級別專業(yè)名稱研究方向論文提交日期陶怡張學光醫(yī)學碩士免疫學腫瘤免疫2005年5月￡旦Q酲奎查旦鲴照起涯轂蔞世艘擅生的是僮垂藍厘甚生翅生重豎蟲塞埕鏨1EBV感染對多發(fā)性骨髓瘤㈣細胞表型和生物學的影響通過流式細胞術檢測LO例刪新鮮標本，顯示2、5、9、10號標本有CD40和CD401。共表達現(xiàn)象。其中5、10號標本呈CD40和CD40L高度共表達。運用EBV體外感染刪細胞株1_PML8266，通過檢測EBV的病毒抗原LMPJ和EBNA～2，首次發(fā)現(xiàn)EBV體外能感染瀾細胞。感染后細胞在MRNA和蛋白水平上調(diào)CD40L表達，并且這種上調(diào)可能參與感染后細胞抗凋亡效應。而且，共聚焦顯微鏡定位檢測表明CD40、CD40L和LMPL分子兩兩能在感染細胞表面共聚集。此外，EBV感染能上調(diào)RPML8226細胞趨化因子受體CXCR4表達，并且在趨化因子SDFIA存在情況下，感染后細胞遷移率提高。眾所周知，細胞的抗凋亡能力和遷移擴散能力是腫瘤惡性特征的重要表現(xiàn)，由此推測，EBV作為砌起源的一種高危因素，有可能通過體內(nèi)感染生發(fā)中心B細胞使其轉化產(chǎn)生抗凋亡的效應和提高細胞離外周血的遷移能力，從雨參與洲的發(fā)生和發(fā)展。2B淋巴瘤細胞CD40和CD40L共表達的生物學意義選取兩株B淋巴瘤細胞株DAUDI、RAJI作進一步研究。流式細胞術檢測顯示兩株細胞表面都有CD40和CD40L高度共表達。激光共聚集顯微鏡定位顯示CD40和CB40L可以在BAUDI和RAJI細胞表面共聚集。用科室自行研制的阻斷經(jīng)抗體CD40MAB3G3J或CD40LMAB4FI分別阻斷CD40CD40L信號傳導，結果表明在不同細胞株上，抗體以劑量依賴性的方式抑制細胞生長、增殖和誘導細胞凋亡。由此得出結論，DAUDI和RAJI細胞上CD40和CD40L共表達和共聚集有利于腫瘤細胞的存活、生長和增殖，并產(chǎn)生抗凋亡的效應，為臨床應用腫瘤免疫治療提供了新靶點。關鍵詞CD40CD40配體多發(fā)性骨髓瘤；EBVLMPLCXCR；信號傳導B淋巴瘤作者陶怡指導教師張學光教授IL

簡介：蘭州大學碩士學位論文鹽酸小檗堿對人牙周膜細胞生物學活性及大鼠牙周組織IL1Β、TNFΑ表達的影響姓名張小恒申請學位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學指導教師余占海20070601蘭州大學碩士學位論文4、鹽酸小檗堿對牙周膜細胞ALP活性的影響鹽酸小檗堿組B，C組細胞培養(yǎng)液中ALP活性均明顯高于對照組P005，而鹽酸小檗堿組扎D，E組與對照組比較無統(tǒng)計學意義，5、牙周炎組牙周組織中IL113、TNFQ表達明顯高于正常組PO05；各時間段牙周炎治療組牙周組織中ILLS、TNFA表達明顯低于牙周炎組PO05，但牙周炎治療組各時間段之間IL113、TNFQ表達無明顯差異。結論玻片覆蓋法可顯著提高人牙周膜細胞原代培養(yǎng)的成功率。鹽酸小檗堿在一定濃度范圍內(nèi)1020MG／L能提高牙周膜細胞的增殖活性、蛋白合成及ALP活性。大鼠實驗性牙周炎模型牙周組織中TNFA、IL一113含量較正常對照組明顯升高，應用鹽酸小檗堿能抑制實驗性牙周炎模型牙周組織中TNFQ、IL一1B的表達。根據(jù)上述結果證實鹽酸小檗堿可促進創(chuàng)傷愈合和組織再生，從而為牙周病臨床的合理用藥提供科學依據(jù)。關鍵詞鹽酸小檗堿，人牙周膜細胞，堿性磷酸酶，TNFQ，牙周炎模型

簡介：南京醫(yī)科大學碩士學位論文體外培養(yǎng)人臍血單個核細胞生物學活性的初步研究姓名王宏申請學位級別碩士專業(yè)臨床檢驗診斷學指導教師潘世揚20050418南京醫(yī)科大學碩學位論文GVTGVLGVHDHSCNCSNSNSTPBPBSCTPHA靛光實時定量聚合酶鏈式反應GRAFTVEFSUSTUMOR移植耱撬_|L申籀GRAFTVERSUSLEUKEMIA移植物抗白血病GRAFTVERSUSHOSTDISEASE移植物抗宿主病HEMATOPOIETICPROGENIFOREELL造血祖細胞HEMATOPOIETICSTEMCELL遣血于細胞MIXEDCHIMERISILL混合嵌合體MONONUCLEARCELL單個核細胞NEWBORNCALFSERUM麓生牛血清NORMLSODIUM生理鹽水NONMYELOABLATIVEALLOGENEICSTEMEELLTRANSPLANTATION非清靜掛異基躅造血于紐，瞧移植PERIPHERALBLOOD外周血PERIPHERALBLOODSTEMEELLTRANSPLANTATION外周血干細胞移植PHYTOHEMAGGLUTININ棱妨血凝素M2

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學學位論文大鼠肝干細胞和肝癌干細胞間生物學特性差異分析及相關分子調(diào)控機制研究（題名和副題名）劉衛(wèi)輝（作者姓名）指導教師姓名竇科峰教授（主任醫(yī)師）指導教師單位第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院肝膽胰脾外科申請學位級別博士專業(yè)名稱外科學（普外）論文提交日期201204答辯日期201205論文起止時間2009年09月至2012年05月學位授予單位第四軍醫(yī)大學大鼠肝干細胞和肝癌干細胞間生物學特性差異分析及相關分子調(diào)控機制研究大鼠肝干細胞和肝癌干細胞間生物學特性差異分析及相關分子調(diào)控機制研究研究生劉衛(wèi)輝學科專業(yè)外科學（普外）所在單位第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院肝膽胰脾外科導師竇科峰教授（主任醫(yī)師）輔導教師陶開山教授（主任醫(yī)師）資助基金項目國家自然科學基金重點項目（81030010）國家自然科學基金面上項目（81170419）國家自然科學基金面上項目（81172061）國家自然科學基金面上項目（30772102）國家自然科學基金面上項目（30772094）關鍵詞肝干細胞；肝癌干細胞；生物學特性；正常分化；分化受阻；惡性轉化；小分子RNAS。中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學二O一二年四月

簡介：≥話爻魚太普博士學位論文DOCTORALDISSERTATLON丑U論叉題目量巨塑墮墮堡、塑塑坌塑量基笙塑堂焦些擔羨墮坌塹學科專業(yè)墅堡墮堂皇墮墮堂作者姓名工墮墼指導教師墮塞塑塑堡答辯日期呈旦蛆生生旦一上海交通大學學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權上海交通大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密口，在年解密后適用本授權書。本學位論文屬于，不保密留。請在以上方框內(nèi)打“4”學位論文作者簽名丁擴圣勇乞指導教師簽名學位論文作者簽名J，I芝鍛，指導教師簽名日期嚷，年}月E日7日期O孕年畢月甲日

簡介：復旦大學博士學位論文PI3KAKTMT信號傳導通路對DLBCL細胞生物學行為影響及其對BCL6表達的調(diào)控姓名張鐵成申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師施達仁20070406復旦大學博士研究生畢業(yè)論文中文摘要中文摘要P13呲／IT孤信號傳導通路對DLBCL細胞生物學行為影響及其對BCL6表達的調(diào)控目的觀察三株彌漫大B細胞性淋巴瘤DIFFUSELARGEBCELLLYMPHOMADLBCL細胞株中AKT及磷酸卅CAKTPAKT，PHOSPHAAKT表達狀態(tài)及其對DLBCL細胞生物學行為的影響；探討DLBCL細胞中AKT調(diào)控細胞周期的可能機制；觀察P13K抑制劑LY294002對DLBCL化療增敏作用；觀察AKT激活狀態(tài)與BCL6表達的關系及可能的調(diào)控機制方法分別采用P13K抑制劑LY294002、MTORMAMMALIANTARGETOFRAPAMYCIN抑制劑RAPAMYCIN抑制P13K／AKT信號傳導通路，采用胰島素刺激P13K／L【T信號傳導通路；采用WESTERNBLOTTING檢測DL8CL細胞株LYL、LYS、LYLO在不同狀態(tài)下AKT、PAKT、PS6K1、PCSK3、CYCLINDL、P27M1、P21”、PEIF46、PEIF4E和BCL6的表達；應用阿霉素DOXORUBICIN與LY294002聯(lián)用探討LY294002在DLBCL中的化療增敏效果；采用流式細胞術結合PI單染分析細胞周期、結合ANNEXINVFITC染色檢測細胞凋亡、結合BRDU法觀察細胞增殖狀態(tài)的改變。結果1三株DLBCL細胞株在不同的培養(yǎng)條件下均顯示有PAKT，即AKT呈活化狀態(tài)，LY8和LYLO在IO％FBS培養(yǎng)下PBKT水平高于無血清培養(yǎng)，而LYL相反，在無血清培養(yǎng)下PAKT略高于有血清培養(yǎng)；2在有血清培養(yǎng)下，LY294002可明顯降低三株細胞PAKT水平，并顯示S期細胞明顯減少PM鯽L，6061期細胞增加，增殖細胞比例顯著降低PM嘲I，以細胞株LY8、LYL0尤為明顯，但凋亡細胞無明顯增加砂髓瑚；3在有血清培養(yǎng)下，胰島素都可以提高AKT磷酸化水平，但并不能引起DLSCL細胞株細胞周期、細胞凋亡、細胞增殖等細胞生物學行為變化夥口05；4RAPAMYCIN可以明顯降低S6K1磷酸化水平，但提高了AKT磷酸化水平刑I嘲I，亦未引起DLBCL細胞株細胞周期、細胞凋亡、細胞增殖等的細胞生物學行為改變乃N05；5三株DLBCL細胞株在LY294002作用后PGSK3，P27表達顯著增高PMOH3、CYCLINDL表達顯著降低PM嘲L，P2L”表達不受LY294002作用的影響，LY294002作用前后三株細胞中均無表達6LY294002預處理序貫使用DOXO組中細胞凋亡的發(fā)生率比單獨使用LY294002、DOXO或同時聯(lián)合使用LY294002、DOXO均明顯提高，在24H、48H、72H1Y1或48H、72H1Y8或24H1YLO差異均呈顯著性P汜鯽；2

簡介：目的1對小鼠精原干細胞SPERMATOGONIALSTEMCELLS，SSCS的體外培養(yǎng)方法進行研究，觀察SSCS體外的增殖能力及生物學特性，并對細胞表面相關標志物進行檢測，以期建立體外培養(yǎng)精原干細胞的培養(yǎng)體系，為精原干細胞深入研究提供實驗模型；2觀察小鼠精原干細胞在成骨培養(yǎng)條件下的生物學特征，初步探討其可能機制，為研究精原干細胞的多向分化能力奠定實驗基礎，同時可為其作為組織工程種子細胞提供初步的實驗依據(jù)。方法1骨髓基質(zhì)細胞飼養(yǎng)層制備用全骨髓法分離小鼠骨髓基質(zhì)細胞。選取生后7～10D昆明系小白鼠雌雄不限，無菌條件下取出脛骨、股骨，分離骨髓基質(zhì)細胞，差速貼壁法進行純化。以含有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)6～7D后細胞鋪開成單層占瓶底達80％，換用含終濃度為10ΜGML絲裂霉素C的IMDM培養(yǎng)基處理，充分清洗后作為飼養(yǎng)層備用。2精原干細胞的純化培養(yǎng)及其鑒定通過兩步酶消化法從新生小鼠睪丸中收集睪丸細胞并培養(yǎng)。無菌取出生后6～8D雄性小鼠雙側睪丸，去白膜，隨后用1MGMLIV型膠原酶37℃消化10MIN，其間不斷搖動，直到生精小管散開，PBS清洗后，然后用025％胰蛋白酶002％EDTA在顯微鏡下控制消化時間，見生精小管段被解離成單細胞或小細胞團時，用含10％胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基終止消化，HANKS液清沈后，收集細胞，制成單細胞懸液，接種在用02％明膠包被的25CM2培養(yǎng)瓶中，置37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在1H、3H、12H經(jīng)差速貼壁法去除非精原干細胞，收集較純的精原干細胞，制備單細胞懸液接種于上述制備好的骨髓基質(zhì)細胞飼養(yǎng)層中進行培養(yǎng)；另外，接種前將少許細胞懸液滴片，進行免疫細胞化學方法檢測精原干細胞的標志物THY1。接種培養(yǎng)后在倒置相差顯微鏡下逐日觀察細胞形態(tài)及增殖特征，且對培養(yǎng)3D的精原干細胞用同法檢測表面標記分子THY1。3精原干細胞在成骨培養(yǎng)條件下培養(yǎng)取培養(yǎng)3D的精原干細胞，用025％的胰酶消化，制成單細胞懸液，將其加入24孔培養(yǎng)板中，每孔加入濃度為5104ML的細胞懸液1ML培養(yǎng)24H后，隨機分組進行培養(yǎng)。對照組用一般培養(yǎng)液IMDM100UML青霉素100UML鏈霉素10％胎牛血清培養(yǎng)精原干細胞，3～4D換液1次。實驗組用成骨條件培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液中添加50MMOLLΒ甘油磷酸鈉，106MOLL地塞米松，50MGL維生素C，50NMOLL胰島素，20NMOLLBFGF誘導培養(yǎng)精原干細胞，3～4D換液1次。4結果檢測在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學變化并照相記錄；特定時間段對細胞進行計數(shù)分析細胞增殖行為；紫外分光光度儀動態(tài)檢測培養(yǎng)上清液的堿性磷酸酶活性ALKALINEPHOPHATASE，ALP；免疫熒光染色檢測細胞內(nèi)I型膠原的表達。5統(tǒng)計學分析采用配對設計的均數(shù)T檢驗對堿性磷酸酶活性檢測所得資料進行統(tǒng)計學分析。結果1小鼠骨髓基質(zhì)細胞呈成纖維細胞樣生長，突起相互交織，6～7D后鋪展開成單層達瓶壁底80％，經(jīng)絲裂霉素C處理后不再分裂增殖但保留了分泌功能；2精原干細胞在骨髓基質(zhì)細胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)3D后開始增殖，增殖的細胞呈鏈狀、簇狀、克隆樣生長，細胞間可見明顯的由于細胞未完全分裂形成的胞質(zhì)間橋。精原干細胞接種培養(yǎng)前滴片及培養(yǎng)3D后，檢測其表面標記分子THV1均呈陽性反應，且陽性率達90％以上。細胞的以上生長特點、形態(tài)學特征及免疫組化檢測均與精原干細胞的特性符合。3形態(tài)學特征變化對照組SSCS從第3D開始分裂增殖，第6D增殖細胞呈簇狀、鏈狀生長，9D后細胞增殖加快，12D后細胞增殖速度明顯增加，SSCS分裂形成的每個細胞團的細胞數(shù)可達20個左右，在這些增殖的細胞中，細胞間橋仍明顯；實驗組SSCS在條件培養(yǎng)液中培養(yǎng)，每時間段的細胞增殖均較對照組快，生長迅速的細胞，呈集落樣生長，12D時細胞增殖達高峰，增殖細胞之間缺乏明顯的連接，未見到明顯的胞質(zhì)間橋；細胞的形態(tài)呈現(xiàn)幼稚性細胞的變化，核質(zhì)比例大。4實驗組細胞進行Ⅰ型膠原免疫熒光染色后，熒光顯微鏡下可見細胞內(nèi)出現(xiàn)綠色熒光，呈陽性反應；對照組呈陰性。5培養(yǎng)上清液中的堿性磷酸酶活性實驗組與對照組開始都很低，以后隨著培養(yǎng)時間的延長而逐漸增強，且實驗組每時間段均高于對照組。應用配對設計的均數(shù)T檢驗對資料進行統(tǒng)計學分析，T3441，P0026005，有統(tǒng)計學差異。結論1以原代培養(yǎng)的小鼠骨髓基質(zhì)細胞飼養(yǎng)層，含10％的胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基37℃、5％CO2、飽和濕度的條件培養(yǎng)精原干細胞，能較好的促進精原干細胞在體外的非分化擴增，這一方法有望成為精原干細胞體外培養(yǎng)的較好的培養(yǎng)體系，為精原干細胞深入研究提供理想的細胞模型；2精原干細胞在成骨培養(yǎng)條件下，能表現(xiàn)出成骨細胞的某些生物學特征，提示精原干細胞在一定的誘導條件下具有向成骨細胞轉化的趨勢，這為進一步研究精原干細胞的多向分化潛能提供實驗依據(jù)。

簡介：間充質(zhì)干細胞（MESENCHYMALSTEMCELLMSC），是存在于成體骨髓中的一種干細胞。它具備干細胞的基本特性在體外條件下，已被成功地誘導為多種間質(zhì)細胞。MSCS還可以從臍血、胎盤、羊水、臍靜脈內(nèi)皮下層、外周血及肌肉等組織中分離得到，由于它們可以作為滋養(yǎng)層支持造血干細胞的生長，并且具有以下特點而日益引起人們的興趣1、在不同的理化環(huán)境和細胞因子的誘導下，MSCS具有可分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、肌肉細胞甚至神經(jīng)元樣細胞等多系分化潛能；2、MSCS是造血支持細胞，作為滋養(yǎng)層支持造血干細胞的生長。由于具有易分離、擴增以及體外操作簡便等特點，間充質(zhì)干細胞在組織工程、細胞移植、基因治療等領域的應用前景十分廣闊。作為成體干細胞中的一種，臍血間質(zhì)干細胞（臍血MSCS）具有良好的多向分化潛能、活躍的增殖特性、對外源基因的高效轉染表達能力以及促進造血、在體外較易分離、培養(yǎng)等特性，日益引起國內(nèi)外研究者的濃厚興趣。許多間質(zhì)組織中既有定型的間質(zhì)前體細胞MESENCHYMALPRECURSCELLSMPCS，又有未定型的間質(zhì)前體細胞。定型的間質(zhì)前體細胞，如骨骼肌中的星形細胞和脂肪組織中的脂肪前體細胞等只能在組織局部修復再生；未定型的間質(zhì)前體細胞，如成體骨骼肌中包含更為原始的星形細胞，體外培養(yǎng)條件下能夠分化為其他類型的間質(zhì)組織，如肌肉、骨、軟骨和脂肪等。在適當?shù)恼T導條件下這些細胞可以多向分化為間質(zhì)譜系內(nèi)的各種細胞，如成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞和骨骼肌細胞；跨系分化為外胚層的神經(jīng)細胞，內(nèi)胚層的肝細胞。臍血MSCS具有如下優(yōu)勢臍血MSCS資源豐富、細胞更加原始、擴增能力更強；細胞采集比較簡單，不會對孕婦和胎兒造成痛苦或產(chǎn)生不良影響，易于接受；臍血比較清潔，傳播細菌、病毒的幾率極低；胎兒的免疫系統(tǒng)較為原始，臍血MSCS移植引發(fā)移植物抗宿主反應GVHR的機會極低。因此臍血有希望成為繼骨髓后的又一人MSCS的適當來源。近年來，因臍血MSCS的多向分化、免疫調(diào)節(jié)等作用逐步被發(fā)現(xiàn)而引起人們的廣泛關注，使其在細胞治療、基因治療、組織工程等領域展現(xiàn)出廣闊的應用前景。而其免疫調(diào)節(jié)方面的作用則更引起人們的重視。臍血MSCS在移植免疫調(diào)節(jié)中的作用廣泛而復雜，其系具有擴增髓系祖細胞和巨核系祖細胞、抑制淋巴系祖細胞的作用及支持造血的功能。而在對抗移植物抗宿主病（GVHD）方面的與分泌細胞因子IL4、IFNΓ有一定關系；臍血MSCS上清細胞因子檢測提示IFNΓ含量較單獨培養(yǎng)T淋巴細胞低表達被認為在GVHD發(fā)生中可能是臍血MSCS移植GVHD發(fā)生程度減輕的主要原因之一。研究了對于T淋巴細胞亞群的分析及其與某些細胞因子分泌之間是否有關聯(lián)，或是由于細胞因子的分泌影響某些抗體下調(diào)或上調(diào)機制，CD4CD28CD8CD28細胞數(shù)減少介導移植物抗白血病（CVL），卻不引起急性移植物抗宿主?。℅VHD）；臍血MSCS對K562細胞的殺傷效應；以及與細胞外基質(zhì)相關聯(lián)系。這將有助于臨床預測移植物抗宿主?。℅VHD）發(fā)病風險，從而更好的預防和治療異基因造血干細胞移植（ALLHSCT）術后移植物抗宿主病（GVHD）的發(fā)生。減少移植發(fā)病率和死亡率，提高受者生活質(zhì)量和長期存活率。

簡介：目的從氧化損傷和基因甲基化的角度，研究氡暴露對靶細胞的早期生物學效應。尋找氡暴露人群的易感性標記物，從而為氡危害的早期預防提供基礎資料。方法1以染氡大鼠和中國核工業(yè)總公司721礦的91名鈾礦工其中50名井下鈾礦工，24名地表鈾礦工，17名行政辦公工作人員作為研究對象。將雄性WISTAR大鼠隨機分為對照組、低、中和高4個劑量組，每組5只。暴露組大鼠整體暴露于HD3型多功能生態(tài)氡室，保持劑量率相對恒定。各組大鼠均于末次暴露后2～3H內(nèi)采樣檢測。分析10年該鈾礦的氡及其子體監(jiān)測資料，找出最佳監(jiān)測時段，在該時段內(nèi)采用固體核徑跡法對鈾礦工氡累積暴露水平進行估測，再按與染氡大鼠累積暴露劑量相近的劑量分組。2測定各組職業(yè)人群與大鼠超氧化物歧化酶SOD活性和丙二醛MDA含量，觀察比較低、中和高劑量組和對照組SOD活性和MDA含量的差異。3用甲基化特異性PCRMSP檢測大鼠氣管支氣管上皮細胞中P16基因甲基化，探討其與氡子體累積暴露劑量的相互關系；同時研究鈾礦工痰細胞中P16基因和6氧甲基嘌呤DNA甲基轉移酶MGMT的甲基化，觀察比較基因甲基化率的變化趨勢與氡子體累積暴露劑量的關系。4利用片段性長度多態(tài)性聚合酶鏈反應PCRRFLP檢測谷胱甘肽S轉移酶P1GSTPL基因多態(tài)，比較基因型分布與P16和MGMT基因甲基化的關系。結果15月和9月的氡濃度水平接近年平均濃度，平均平衡因子F036。2職業(yè)流行病學調(diào)查結果表明，各組的一般特征如性別、民族、年齡、工齡、工時、居住史、家族遺傳史在各組人群中的分布無統(tǒng)計學差異，表明各組均衡可比。3在對照組、低、中和高劑量職業(yè)氡暴露人群外周血中，SOD活性分別為1165±123UML、896±83UML、636±89U／ML和409±76UML，MDA含量分別為11±04MOL／ML、21±03NMOL／ML、33±05NMOL／ML和53±09MOL／ML，各組間差別有統(tǒng)計學意義P005。隨著氡子體累積暴露劑量的增加，SOD活性逐漸降低，MDA含量逐漸升高。在對照組、低、中和高劑量吸入染氡大鼠外周血中，SOD活性分別為139340±8830UML、119860±13244UML、119860±13244UML和109860±5090UML，MDA含量分別為053±013NMOL／ML、189±O13NMOL／ML、238±012NMOL／ML和288±O18NMOL／ML，各組間差別也有統(tǒng)計學意義P005。隨著氡子體累積暴露劑量的增加，SOD活性逐漸降低，MDA含量逐漸升高。4鏈酶蛋白酶加機械刷洗法提取支氣管上皮細胞在19～76105，大鼠染毒劑量達到111工作水平月WLM時，出現(xiàn)P16基因甲基化。5隨著氡子體累積暴露劑量增加，P16基因甲基化率Z2844，P0005、MGMT基因甲基化率Z3034，P0002，兩個基因總甲基化率Z3859，PO0001均呈上升趨勢，且差別有統(tǒng)計學意義。6在70名鈾礦工中，GSTPL基因A105G位點的純合子ILEI1E42例，雜合子I1EVAL25例和純合子VALVAL3例。MGMT、P16基因甲基化率和總甲基化率分別為142％、86％和186％；與攜帶ILEILE人群相比，攜帶異常等位基因I1E／VAL與VAL／VAL的人群MGMT基因甲基化率和總甲基化率增加PO037，48，95％CI11210；P0016，51，95％CI14196。結論1在本實驗條件下，氡及其子體對大鼠及鈾礦工人靶細胞產(chǎn)生氧化損傷和DNA甲基化，并存在一定的劑量反應關系。2SOD與MDA可作為氡引起氧化損傷的早期生物學效應指標；P16和MGMT基因甲基化有望作為氡暴露的易感分子標記物。3GSTPLA105G基因多態(tài)性與氡暴露引起MGMT基因與總甲基化的易感性有關。