簡(jiǎn)介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文LRRC4負(fù)性調(diào)控SDF1ΑCXCR4生物學(xué)軸介導(dǎo)的ERK12和AKT通路抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲姓名陳瓊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師李桂源20070501陳瓊碩士學(xué)位論文摘要125NM誘導(dǎo)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞與基質(zhì)粘附無影響，卻抑制瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞ECV304的粘附。因此，LRRC4通過下調(diào)SDF一1Q／CXCR4生物學(xué)軸抑制腦膠質(zhì)瘤的運(yùn)動(dòng)和侵襲。LRRC4負(fù)性調(diào)控SDF1Ⅱ／CXCR4生物學(xué)軸介導(dǎo)的ERKL／2和AKT信號(hào)通路，并通過這兩條通路調(diào)節(jié)MMP一2活性】用外源性SDF1Q125NM處理U251細(xì)胞，分別作用0MIN，5MIN，10MIN，15MIN，30MIN，發(fā)現(xiàn)SDF一1Q可以使U251細(xì)胞中ERKL／2以及AKT磷酸化水平明顯增高，且呈時(shí)間依賴性，15MIN表達(dá)達(dá)高峰。LRRC4可以有效抑制ERKL／2以及AKT的磷酸化。ERK通路抑制劑PD98059以及AKT通路抑制劑LY294002能明顯抑制ERKL／2以及AKT的活化陽性對(duì)照。因此，LRRC4能負(fù)性調(diào)控SDF1A／CXCR4生物學(xué)軸介導(dǎo)的ERKL／2，AKT信號(hào)通路?；|(zhì)金屬蛋白酶MMPS在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移和血管形成過程中起了很重要的作用。研究表明，一些信號(hào)通路如，P38MAPK，NFLCB，PKC，PI一3K激酶及RAF／ERK，JAK／STATS通過調(diào)節(jié)MMP一2、MMP～9的分泌來影響腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移特性。本研究發(fā)現(xiàn)SDF一1Q可以增強(qiáng)U251細(xì)胞MMP2酶活性，LRRC4明顯的抑制了SDF一1Q誘導(dǎo)的MMP2的酶活性增加。ERK通路抑制劑PD98059和AKT通路抑制劑LY294002處理均可抑制SDF一1Ⅱ誘導(dǎo)的MMP2的酶活性增加陽性對(duì)照。因此，LRRC4能夠通過SDF_1Q／CXCR4生物學(xué)軸介導(dǎo)的ERKL／2和AKT通路抑制MMP一2的酶活性。但對(duì)刪P一9的酶活性無影響。LRRC4誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞向星形膠質(zhì)樣細(xì)胞分化】與對(duì)照組細(xì)胞相比細(xì)胞呈梭形，基本無突起，LRRC4轉(zhuǎn)染后的U251細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，細(xì)胞胞體縮小，呈圓形，突起明顯延長(zhǎng)，呈星形膠質(zhì)樣細(xì)胞特點(diǎn)。GFAP一直被視為星形細(xì)胞特異性標(biāo)記物，與腦膠質(zhì)瘤分化程度呈正相關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)LRRC4轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞后，6FAP表達(dá)明顯IL

簡(jiǎn)介：正常細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)生命期是有限的，細(xì)胞增殖一段時(shí)間后會(huì)出現(xiàn)群體生長(zhǎng)緩慢，有絲分裂停滯，進(jìn)而衰老死亡，這種現(xiàn)象叫做復(fù)制衰亡REPLICATIVESENESCENCE。細(xì)胞的這種生物學(xué)現(xiàn)象導(dǎo)致一些體外培養(yǎng)的細(xì)胞因生長(zhǎng)增殖能力衰竭、數(shù)量不足而不能充分滿足實(shí)驗(yàn)研究和臨床運(yùn)用的要求。后來人們觀察到一些腫瘤細(xì)胞具有持續(xù)生長(zhǎng)和增殖的能力，可長(zhǎng)期傳代，即細(xì)胞的永生化IMMTALIZATION。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)部分永生化的腫瘤細(xì)胞中含有病毒基因VIRUSGENE，因此通過轉(zhuǎn)染技術(shù)將病毒基因?qū)氩⒄显隗w外培養(yǎng)的正常細(xì)胞基因組上，使其出現(xiàn)永生化就成為了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究的熱門。猿猴病毒40SIMIANVIRUS40，SV40是60年代初發(fā)現(xiàn)和分離的猴腎細(xì)胞病毒，人是其自然宿主。SV40的基因組能編碼TLARGET和TSMALLT抗原。T抗原具有ATP酶和DNA解旋酶活性，使蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸殘基磷酸化、ADP核糖基化和己?；抗原還有活化宿主細(xì)胞核糖體基因、誘導(dǎo)DNA合成、修飾蛋白質(zhì)合成起始因子等作用。T抗原能反式激活RNA多聚酶基因的啟動(dòng)子，以及CMYC和CFOS癌基因轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白缺失和細(xì)胞粘附性下降。T抗原為細(xì)胞轉(zhuǎn)化啟動(dòng)所必需的，對(duì)轉(zhuǎn)化起決定作用，而且轉(zhuǎn)化細(xì)胞表型的維持必須要T抗原的連續(xù)表達(dá)。T抗原對(duì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是非必需的，但可起加強(qiáng)作用，兩者共同維持轉(zhuǎn)化表型。因此SV40T抗原基因被廣泛運(yùn)用于誘導(dǎo)人類和動(dòng)物細(xì)胞的永生化。SV40T抗原引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化是一個(gè)復(fù)雜的過程，目前仍不完全清楚其機(jī)制。一些研究發(fā)現(xiàn)SV40T抗原能與腫瘤抑制因子PRB和P53相互作用，影響它們調(diào)控正常細(xì)胞生長(zhǎng)周期和細(xì)胞凋亡的功能，也有研究認(rèn)為SV40T抗原基因可通過調(diào)節(jié)端粒酶的活性使細(xì)胞的端粒長(zhǎng)度得到維持。細(xì)胞的永生化被認(rèn)為可能是向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化的必經(jīng)階段，因其安全性受到質(zhì)疑制約了轉(zhuǎn)化細(xì)胞運(yùn)用于臨床的前景。我科前期實(shí)驗(yàn)利用位點(diǎn)特異性重組酶CRELOXP系統(tǒng)聯(lián)合SV40T抗原基因成功構(gòu)建了可逆性永生化黑素細(xì)胞REVERSIBLEIMMTALIZEDMELANOCYTES，RIMC。其基本原理是利用基因打靶技術(shù)，引入CRELOXP系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有高度保守性和特異性，可準(zhǔn)確的根據(jù)LOXP位置切除整合在細(xì)胞基因組的外源性SV40T抗原基因。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞S100、HMB45等細(xì)胞表型未發(fā)生改變，而且軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)和裸鼠移植實(shí)驗(yàn)也未觀察到致瘤性。為進(jìn)一步了解SV40T抗原基因?qū)φT導(dǎo)的RIMC生物學(xué)性狀和功能，特別是潛在致瘤性的影響，我們對(duì)培養(yǎng)至第15代的IMCIMMTALIZEDMELANOCYTES，IMC進(jìn)行染色體分析，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HLADR和HTERT蛋白的表達(dá)，RTIPCR檢測(cè)HTERTMRNA表達(dá)；對(duì)第20代細(xì)胞進(jìn)行MTT比色法分析細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和DNA倍體；RTPCR半定量分析細(xì)胞HMLH1、HMSH2錯(cuò)配修復(fù)基因表達(dá)；并提取細(xì)胞基因組，對(duì)1P22D1S187、5Q14D5S107、18Q122123D18S34三個(gè)位點(diǎn)PCR產(chǎn)物進(jìn)行變性聚丙烯酰胺電泳分析微衛(wèi)星不穩(wěn)定性MICROSATELLITEINSTABILITYMI；同時(shí)對(duì)細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素含量與正常MC進(jìn)行對(duì)比，分析細(xì)胞的生物學(xué)功能變化。結(jié)果表明永生化和去永生化的黑素細(xì)胞均保持正常核型、HLADR的表達(dá)不受體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)和SV40T抗原的影響；SV40T抗原不通過上調(diào)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶活性途徑介導(dǎo)細(xì)胞永生化；細(xì)胞周期分析和MTT比色法分析細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明IMC的生長(zhǎng)增殖較正常MC明顯，長(zhǎng)期培養(yǎng)未見復(fù)制衰亡現(xiàn)象。而切除SV40T抗原基因后的去永生化黑素細(xì)胞可出現(xiàn)部分凋亡，生長(zhǎng)變緩；錯(cuò)配修復(fù)基因HMLH1、HMSH2在IMC中較正常細(xì)胞表達(dá)上調(diào)；D1S187、D5S107、D18S34三個(gè)位點(diǎn)上均未出現(xiàn)條帶的增加和缺失，無微衛(wèi)星不穩(wěn)定性發(fā)生，保持了細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性。細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素含量與體外培養(yǎng)的正常MC無明顯差別。上述結(jié)果說明轉(zhuǎn)化細(xì)胞不易向惡性轉(zhuǎn)化，并能保持MC正常的黑素代謝的生物學(xué)功能，可以為自體MC移植治療白癜風(fēng)和MC的實(shí)驗(yàn)研究提供有用的種子細(xì)胞。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文CD40分子在人宮頸癌組織中表達(dá)的臨床意義及CD40信號(hào)對(duì)宮頸癌細(xì)胞株SIHA體外的生物學(xué)效應(yīng)姓名黃沁申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)普外科學(xué)指導(dǎo)教師錢海鑫張學(xué)光20080501CIM0分子在人宮頸癌組織中表達(dá)的臨床意義及CIMO信號(hào)對(duì)宮頸癌細(xì)胞株SIHA體外的生物學(xué)效應(yīng)中文摘要相關(guān)性。宮頸癌組織中HPVL6／18E6、P16嗍8、VEGF分子表達(dá)均較正常組織高786％、8036％、8750％。CD34MVD在宮頸癌組織上表達(dá)為27。02士1068，明顯較其它各組增高P0001。HPVL6／18E6陽性表達(dá)的宮頸CINIIHI組織中，P16玳K48表達(dá)陽性者占9047％，HPVL6／18一E6陽性表達(dá)的宮頸癌組織中，P16ⅨK43表達(dá)陽性達(dá)9772％，因此P16礬K44在宮頸CINIIILL及宮頸癌中的表達(dá)和HPVL6／18E6的陽性表達(dá)有明顯的相關(guān)性R0362，P005；R0837，P001。CD40分子的表達(dá)和P16帳4的表達(dá)呈正相關(guān)RO52，PO01；和HPVL6／18E6、VEGF以及CD34MVD的表達(dá)亦有一定的正相關(guān)性，057，POOL；RO32，PO05；RO37，PO05。結(jié)論CD40可作為宮頸癌診斷、預(yù)后和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移評(píng)估的客觀指標(biāo)。CD40分子表達(dá)與抑癌基因P16礬“8、HPVL6／18E6以及VEGF和CD34MVD的表達(dá)有一定的正相關(guān)性，由此提示CD40分子在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能起著非常重要的作用。二、激發(fā)型CD40單抗對(duì)宮頸癌細(xì)胞株體外增殖和化學(xué)藥物敏感性的作用目的研究CD40分子激發(fā)對(duì)宮頸癌細(xì)胞SIHA化療敏感性的影響及其機(jī)制。方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞SIHA上CD40分子的表達(dá)，MTT法檢測(cè)CD40單抗5C11聯(lián)合化療藥物對(duì)SIHA細(xì)胞的作用，PI染色檢測(cè)SIHA細(xì)胞周期的變化，ANNEXINV二PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡、REALTIMEPCR方法分析單抗5CLL作用SIHA細(xì)胞后凋亡基因表達(dá)水平變化。結(jié)果宮頸癌SIHA細(xì)胞表面CD40表達(dá)率為960％，SIHA細(xì)胞經(jīng)5CLL作用后出現(xiàn)G2／M期阻滯，5CLL和化療藥物鹽酸吉西他濱GEMCITABIN各自抑制細(xì)胞生長(zhǎng)作用不明顯，但兩者聯(lián)合能顯著抑制SIHA的生長(zhǎng)和促進(jìn)凋亡。SIHA細(xì)胞在和5CLL作用24小時(shí)后，抗調(diào)亡基因BCLXL的表達(dá)明顯下調(diào)，促調(diào)亡基因BAX的上調(diào)作用不明顯。結(jié)論CD40分子通過介導(dǎo)G2／M期阻滯和調(diào)節(jié)凋亡基因表達(dá)水平增加SIHA細(xì)胞對(duì)腫瘤化療藥物鹽酸吉西他濱敏感性?！娟P(guān)鍵詞】CD40宮頸癌；免疫組織化學(xué)單克隆抗體；化療敏感性Ⅱ作者黃沁指導(dǎo)教師錢海鑫張學(xué)光

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文影響肝細(xì)胞性肝癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的相關(guān)分子生物學(xué)研究姓名滕木儉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師李兆亭2002429●■山爾大學(xué)博七論文異倍體腫瘤1L例324％；異倍體腫瘤伴轉(zhuǎn)移和門靜脈侵犯為634％7／11，而二倍體瘤為174％4／23，兩者差異顯著PO01腫瘤DNA二倍體或異倍體與腫瘤大小、HBV感染、AFP定量無明顯相關(guān)，但低分化癌中異倍體所占比例較高。KI一67抗原在HCC中呈現(xiàn)高表達(dá)，KI～67在HCC中呈1423658表達(dá)，在肝硬化組織中較低，為452231，在HCC中表達(dá)明顯增加，與肝硬化組織相比差異顯著P001；KI一67抗原，在HCC伴門靜脈癌栓、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移者陽性與不伴有者陰性相比差異顯著P‘O05，在低分化腫瘤中也表達(dá)較高，但KI一67抗原表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤大小、AFP水平等因素?zé)o明顯相關(guān)性與HCC肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和門靜脈癌栓明顯相關(guān)P005；KI一67表達(dá)和端粒酶活性及肝癌異倍體腫瘤與肝細(xì)胞肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓等因素的關(guān)系極為相似。結(jié)論大多數(shù)HCC肝組織端粒酶活性呈現(xiàn)陽性表達(dá)，僅個(gè)別肝硬化組織端粒酶活性呈現(xiàn)弱陽性，HCC肝組織端粒酶活性呈現(xiàn)陽性表達(dá)者侵襲性明顯增強(qiáng)；KI一67在HCC中呈現(xiàn)高表達(dá)，與肝癌細(xì)胞增生活躍程度和侵襲力呈幣相關(guān)HCC異倍體腫瘤較二倍體浸潤(rùn)能力為強(qiáng)；肝癌細(xì)胞端粒酶活性呈現(xiàn)陽性、KI67基因陽性表達(dá)和DNA異倍體腫瘤與肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓密切相關(guān)，其在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中起著重要作用，尤其端粒酶可做為臨床滲斷、惡性程度及預(yù)后判斷67基因和DNA倍體等檢測(cè)臨床價(jià)值更加突出。關(guān)鍵詞肝細(xì)胞性羅端弋歲DNA含量KI吵I。、；鏊

簡(jiǎn)介：目的觀察、比較兔不同部位脂肪干細(xì)胞ADIPOSEDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，ADSCS在體外培養(yǎng)時(shí)的生長(zhǎng)特性，評(píng)價(jià)不同來源部位是否與其生物學(xué)性能存在聯(lián)系，以便選取優(yōu)良的種子細(xì)胞用于下一步尿路組織工程研究，同時(shí)為深入研究ADSCS生長(zhǎng)特性具體的影響因素提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法應(yīng)用酶解法I型膠原酶分離出附睪附近、腹膜后、頸背部三個(gè)部位脂肪中的間充質(zhì)干細(xì)胞，進(jìn)行體外傳代后差速貼壁培養(yǎng)純化，比較不同培養(yǎng)方案的細(xì)胞狀態(tài)，觀察四代以后三個(gè)不同部位ADSCS的形態(tài)特征和生長(zhǎng)狀態(tài)，用鼠源性兔CD44分子的單克隆抗體做免疫細(xì)胞化學(xué)染色給予干細(xì)胞鑒定，對(duì)純化后的三部位第五代間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成脂、成骨、成肌多向誘導(dǎo)分化，采用“油紅O”染色法對(duì)成脂誘導(dǎo)后細(xì)胞性質(zhì)進(jìn)行鑒定，VONKOSSA鈣染色法對(duì)成骨誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行鑒定，RTPCR法對(duì)成平滑肌誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行肌肉早期標(biāo)志物ΑACTIN基因的檢測(cè)，MTT法檢測(cè)差速貼壁培養(yǎng)后不同部位細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線和倍增時(shí)間并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和比較。結(jié)果⑴兔三個(gè)部位脂肪組織顏色均為淡黃色；附睪附近脂肪較多且存有明顯脂肪外包膜，其它細(xì)胞成分污染機(jī)率較小。⑵等量脂肪情況下，附睪附近和頸背部脂肪的原代ADSCS產(chǎn)量較多。⑶三個(gè)部位ADSCS原代及傳代細(xì)胞形態(tài)原代細(xì)胞形態(tài)較小，呈長(zhǎng)梭形或多邊性貼壁生長(zhǎng)；傳代后差速貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)增大，呈鋪路石樣分布，生長(zhǎng)、遷移活躍。⑷兔ADSCS標(biāo)志CD44分子免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽性，分布處呈棕黃色顆粒沉淀。⑸兔三個(gè)不同部位來源ADSCS多向誘導(dǎo)分化誘脂分化后油紅染色可見紅色脂滴；誘骨分化后VONKOSSA鈣染色可見細(xì)胞外基質(zhì)物狀黑色鈣沉積；誘平滑肌六周后對(duì)照組ΑACTIN標(biāo)志物經(jīng)RTPCR檢測(cè)顯示弱條帶，實(shí)驗(yàn)組則呈強(qiáng)條帶。⑹兔三個(gè)部位ADSCS生長(zhǎng)曲線及倍增時(shí)間頸背部和附睪附近來源ADSCS間的倍增時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005，而生長(zhǎng)速度較快的頸背部和附睪附近來源ADSCS分別與腹膜后來源的ADSCS的倍增時(shí)間有明顯差異P結(jié)論不同部位來源的ADSCS在體外培養(yǎng)時(shí)其生物學(xué)特性存在差異，部位來源成為影響其增殖、分化能力的另一重要因素，這提示在后續(xù)的尿路組織工程基礎(chǔ)研究中，對(duì)ADSCS的來源部位要有所擇取，頸背部和附睪附近來源ADSCS成為較佳種子細(xì)胞。

簡(jiǎn)介：大面積深度燒、創(chuàng)傷會(huì)造成皮膚的正常結(jié)構(gòu)和功能嚴(yán)重受損其中皮膚附屬器如汗腺等結(jié)構(gòu)的破壞及功能喪失將嚴(yán)重影響燒、創(chuàng)傷患者的生存質(zhì)量。目前已有研究證明間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLSMSCS能有效參與促進(jìn)皮膚與汗腺損傷的修復(fù)與再生有望促進(jìn)燒、創(chuàng)傷后患者的修復(fù)效果并改善其生存質(zhì)量。MSCS是一類具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞目前在研究和臨床上的應(yīng)用也越來越廣泛。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)骨髓來源的MSCSBONEMARROWDERIVEDMSCSBMMSCS在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下能夠成功地向汗腺樣細(xì)胞分化并修復(fù)受損的汗腺組織。然而受到細(xì)胞培養(yǎng)周期的限制無法在燒、創(chuàng)傷治療的早期得以應(yīng)用同時(shí)BMMSCS的獲取須行骨髓穿刺術(shù)給供者造成一定痛苦且BMMSCS的增殖及分化潛能隨供者年齡的增大而下降。因此尋找新的MSCS來源是目前國(guó)內(nèi)外干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)。臍帶作為MSCS的一種可靠來源較骨髓容易獲得具有操作簡(jiǎn)便來源豐富分化能力強(qiáng)對(duì)供者無傷害移植物抗宿主病GVHD發(fā)生率低干細(xì)胞所占比例大以及避免倫理爭(zhēng)議等諸多優(yōu)點(diǎn)更有望應(yīng)用于臨床治療。目前其多向分化潛能已得到證實(shí)因此臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞UMBILICALCDDERIVEDMSCSUCMSCS可以作為一種嶄新的細(xì)胞治療策略應(yīng)用于燒傷后汗腺損傷修復(fù)再生研究。我們?cè)谇捌谘芯恐幸殉醪桨l(fā)現(xiàn)UCMSCS在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下具有向汗腺樣細(xì)胞分化的潛能。然而因培養(yǎng)條件以及血清使用、添加細(xì)胞因子種類等不同造成不同批次的細(xì)胞表型、增殖能力、長(zhǎng)期培養(yǎng)后的細(xì)胞功能以及向汗腺細(xì)胞的分化能力等存在較大差異直接影響了UCMSCS在汗腺再生研究中的應(yīng)用。因此亟待建立一種符合臨床使用的非動(dòng)物源性培養(yǎng)條件下UCMSCS分離、培養(yǎng)和鑒定方法以及向汗腺細(xì)胞分化的標(biāo)準(zhǔn)化體系為開展進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究和深入的臨床前實(shí)驗(yàn)研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本研究分為以下兩部分1首先建立非動(dòng)物源性培養(yǎng)條件下UCMSCS分離、培養(yǎng)與鑒定體系采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的表面抗原的表達(dá)、分析細(xì)胞的增殖活性。2建立非動(dòng)物源性培養(yǎng)條件下UCMSCS向汗腺細(xì)胞分化體系采用流式細(xì)胞術(shù)、RTPCR、WESTERNBLOT以及染色體核型分析等鑒定分化后汗腺樣細(xì)胞的標(biāo)志物以及臨床前應(yīng)用的安全性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示UCMSCS在無動(dòng)物血清的安全培養(yǎng)條件下依然能保持MSCS特有的生物學(xué)表型和增殖能力且各組間無明顯差異經(jīng)無動(dòng)物血清汗腺分化培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下UCMSCS可以成功地向汗腺樣細(xì)胞分化誘導(dǎo)后細(xì)胞的汗腺標(biāo)記物CEACK14CK19以及汗腺發(fā)育基因EDA以及EDAR均為陽性表達(dá)且分化能力與本組之前的汗腺誘導(dǎo)方法添加動(dòng)物血清無顯著差異誘導(dǎo)后細(xì)胞經(jīng)長(zhǎng)期培養(yǎng)后檢測(cè)染色體無畸變。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果為建立標(biāo)準(zhǔn)化的UCMSCS培養(yǎng)鑒定體系以及UCMSCS用于修復(fù)汗腺損傷的臨床治療和誘導(dǎo)后汗腺庫的建立提供了可靠的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目錄中文摘要1英文摘要2引言4正文6第一部分骨肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與大量增殖61實(shí)驗(yàn)材料與方法611實(shí)驗(yàn)對(duì)象612實(shí)驗(yàn)試劑613實(shí)驗(yàn)器械714試劑配制715實(shí)驗(yàn)方法92實(shí)驗(yàn)結(jié)果103討論12第二部分骨肉瘤干細(xì)胞的分離與鑒定181實(shí)驗(yàn)材料與方法1811實(shí)驗(yàn)對(duì)象1812實(shí)驗(yàn)試劑1813實(shí)驗(yàn)器械1914試劑配制1915實(shí)驗(yàn)方法212實(shí)驗(yàn)結(jié)果243討論274問題與展望37結(jié)論39參考文獻(xiàn)40中文摘要目的本研究針對(duì)骨肉瘤的高復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移特性，從普通骨肉瘤細(xì)胞株中分離、培養(yǎng)骨肉瘤干細(xì)胞，檢測(cè)骨肉瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性，為進(jìn)一步研究骨肉瘤發(fā)病機(jī)制、早期診斷及靶向治療提供依據(jù)。方法從中科院上海細(xì)胞庫購買骨肉瘤MG63細(xì)胞株，進(jìn)行大量的增殖培養(yǎng)，采用添加低濃度甲氨蝶呤的無血清培養(yǎng)技術(shù)誘導(dǎo)骨肉瘤球體細(xì)胞；從細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，成骨與成脂誘導(dǎo)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞表面標(biāo)志物來檢測(cè)其生物學(xué)特性。結(jié)果1骨肉瘤MG63細(xì)胞株傳代并大量增殖。2成功從第三代骨肉瘤細(xì)胞誘導(dǎo)出干細(xì)胞樣骨肉瘤球以下簡(jiǎn)稱M細(xì)胞。3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M細(xì)胞中CD29、90、45的表達(dá)，CD29陽性率為990％，CD90陽性率為996％，CD45FEI生率為119％。4細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)M細(xì)胞具有較強(qiáng)的侵襲性、增殖能力。結(jié)論骨肉瘤MG63細(xì)胞在添加細(xì)胞因子EGF、BFGF及低濃度甲氨蝶呤的無血清培養(yǎng)基中可誘導(dǎo)M細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)M細(xì)胞具有干細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD45；該M細(xì)胞可向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞分化；細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞具有較強(qiáng)的侵襲性、增殖能力。上述結(jié)果表明本次試驗(yàn)所分離培養(yǎng)的骨肉瘤細(xì)胞具有干細(xì)胞特性。關(guān)鍵詞骨肉瘤MG63細(xì)胞；骨肉瘤干細(xì)胞；分選；生物學(xué)特性

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)R5513密級(jí)一般密級(jí)一般UDC616155編號(hào)編號(hào)2010212545廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文以載體介導(dǎo)的以載體介導(dǎo)的RNA干擾沉默干擾沉默F(xiàn)OXP3對(duì)JURKAT細(xì)胞細(xì)胞NOTCH通路的生物學(xué)影響通路的生物學(xué)影響碩士研究生碩士研究生黃海彬黃海彬?qū)煄熥T獲譚獲教授教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士年級(jí)二零一零級(jí)級(jí)二零一零級(jí)學(xué)科專業(yè)業(yè)血液血液內(nèi)科學(xué)內(nèi)科學(xué)研究方向向白血病的治療白血病的治療論文提交時(shí)間論文提交時(shí)間2013年5月論文答辯日期論文答辯日期2013年5月學(xué)位類型醫(yī)型醫(yī)學(xué)科學(xué)學(xué)位學(xué)科學(xué)學(xué)位學(xué)位授予單位廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)位授予單位廣州醫(yī)學(xué)院答辨委員會(huì)主席答辨委員會(huì)主席評(píng)議人人2013年5月廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文以載體介導(dǎo)的RNA干擾沉默F(xiàn)OXP3對(duì)JUKAT細(xì)胞NOTCH通路的生物學(xué)影響1中文摘要中文摘要1ABSTRACT6前言11技術(shù)路線技術(shù)路線16本課題的理論依據(jù)本課題的理論依據(jù)17第一部分第一部分FOXP3SIRNA真核表達(dá)重組載體的構(gòu)建、真核表達(dá)重組載體的構(gòu)建、鑒定及轉(zhuǎn)染細(xì)胞的條件篩鑒定及轉(zhuǎn)染細(xì)胞的條件篩查18主要材料和試劑18（二）結(jié)果29討論30結(jié)論32第二部分經(jīng)質(zhì)粒介導(dǎo)的第二部分經(jīng)質(zhì)粒介導(dǎo)的SIRNA對(duì)JRUKAT細(xì)胞中細(xì)胞中FOXP3表達(dá)和細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用表達(dá)和細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用33主要材料33（二）結(jié)果49討論52全文小結(jié)全文小結(jié)54參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)55綜述74中英文對(duì)照詞匯中英文對(duì)照詞匯84碩士期間發(fā)表論文碩士期間發(fā)表論文86致謝87學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明88學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明88關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明88

簡(jiǎn)介：縮略詞表1中文摘要3英文摘要51￡一L刖舌7第一部分?jǐn)y帶小鼠CD28基因干擾序列慢病毒干擾質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定”9第二部分慢病毒顆粒的制各與高效CD28／SHRNA干擾序列的篩選18第三部分CD28分子對(duì)EL4細(xì)胞生物學(xué)行為影響的探討33討論38結(jié)論42論文圖表43參考文獻(xiàn)50綜述56攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文題目66臨床培訓(xùn)小結(jié)67致謝69論文聲明70論文審閱認(rèn)定書7L≯氛舒‰?！?、O_妒”～’時(shí)一㈡◆滯一卜P■H∥O、√。勢(shì)。豫≯L●●RTPCRSHRNASIRNA2

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多低氧對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及增殖的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文胃癌耐藥細(xì)胞的生物學(xué)特性及凋亡相關(guān)分子的表達(dá)姓名王少東申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化專業(yè)）指導(dǎo)教師周殿元張振書200261MDRPGPVCRADMMULTIDRUGRESISTANC多藥耐藥性PGLYCOPROTEINVINCRISTIRLEADRIAMYCINP一糖蛋白長(zhǎng)春新堿阿霉素I墼壁塑墮4

簡(jiǎn)介：目的研究糖尿病是否會(huì)導(dǎo)致在體外培養(yǎng)條件下自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖、分泌和抗凋亡能力的改變。方法利用鏈脲佐菌素STZ誘導(dǎo)制作成年大鼠糖尿病模型N15，正常大鼠作為對(duì)照組N15，分別體外利用用全骨髓貼壁法來擴(kuò)增和純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，取生長(zhǎng)良好的第2代細(xì)胞作為本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象。采用CELLCOUNTKIT8CCK8分別繪制兩組細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線來評(píng)價(jià)增殖能力，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF和胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF1）的分泌量和應(yīng)用HOECHST33342染色和膜聯(lián)蛋白ⅤPI雙染流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞在缺氧無血清條件下的抗凋亡能力。結(jié)果來源于糖尿病大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖較正常的大鼠顯著性減慢（P＜001），在形態(tài)學(xué)上則表現(xiàn)為較正常的細(xì)胞更扁平，并且VEGF和IGF1的分泌量較正常大鼠來源的明顯的降低，其中VEGF的分泌量為807±131PGML和679±123PGMLP002，IGF1的分泌量分別為3748±412PGML和2818±268PGMLP＜001。在缺氧無血清條件下，糖尿病來源的干細(xì)胞抗凋亡能力顯著性降低，兩組早期細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為287±34和371±242P＜001。結(jié)論糖尿病大鼠來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以成功的在體外進(jìn)行增殖培養(yǎng)，但是其在增殖能力、分泌、抗凋亡能力等一系列生物性狀上有不同程度的損害。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多微小RNA-10b沉默對(duì)人三陰性乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)學(xué)號(hào)學(xué)號(hào)D201178229學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級(jí)密級(jí)博士學(xué)位論文CCR8在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響學(xué)位申請(qǐng)人學(xué)位申請(qǐng)人曹陽曹陽學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)外科學(xué)外科學(xué)|（普外）（普外）指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師王國(guó)斌王國(guó)斌教授教授答辯日期答辯日期20142014年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果的總結(jié)。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本人將承擔(dān)本聲明引起的一切法律后果。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日

簡(jiǎn)介：第一部分目的探討體外擴(kuò)增小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞BMDC的方法并進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和生物學(xué)特性鑒定。方法用重組小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子RMGMCSF和重組小鼠白細(xì)胞介素4RMIL4體外誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞倒置顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察形態(tài)學(xué)變化流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面分子同時(shí)進(jìn)行刺激初始型T淋巴細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)。結(jié)果體外培養(yǎng)9天后小鼠樹突狀細(xì)胞可達(dá)80％以上光鏡下可見典型的樹突狀細(xì)胞形態(tài)。未成熟DC的細(xì)胞表型為CD11CLOW、MHCIILOW、CD86LOW未成熟DC經(jīng)LPS刺激培養(yǎng)后可轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒霥C細(xì)胞表型為CD11CHIGH曲、MHCIIHIGH曲、CD86HIGH可顯著刺激同種異體混合淋巴細(xì)胞增殖。結(jié)論本方法可獲得較高純度的骨髓樹突狀細(xì)胞避免了使用傳統(tǒng)磁珠分離方法所帶來的高成本復(fù)雜操作低產(chǎn)出率的弊端為研究樹突狀細(xì)胞的功能以及運(yùn)用其開展下游實(shí)驗(yàn)提供材料。第二部分目的使用已構(gòu)建成功的小鼠SMAD6基因RNA干擾RNAI慢病毒載體有效沉默骨髓樹突狀細(xì)胞BMDC的SMAD6基因表達(dá)。方法運(yùn)用構(gòu)建好的慢病毒載體根據(jù)前期試驗(yàn)所明確的感染復(fù)數(shù)對(duì)第一部分所培養(yǎng)的小鼠BMDC進(jìn)行感染120H后收集細(xì)胞并經(jīng)倒置熒光顯微鏡、RTPCRWESTERNBLOT檢測(cè)SMAD6基因的表達(dá)狀況。結(jié)果熒光顯微鏡觀察初步推斷病毒感染效率在75％左右PCR和WESTERNBLOT證實(shí)通過病毒途徑在BMDC細(xì)胞中SMAD6基因的沉默效約為85％。結(jié)論通過使用慢病毒載體較成功抑制小鼠BMDC中SMAD6基因表達(dá)。說明運(yùn)用慢病毒做RNAI載體可以實(shí)現(xiàn)對(duì)DC細(xì)胞某一基因的有效沉默。第三部分目的探討在SMAD6基因被抑制并有TGFΒ1刺激的情況下小鼠骨SH髓源樹突細(xì)胞生物學(xué)特性是否存在著變化。方法分別以GMCSF和IL4誘導(dǎo)培養(yǎng)兩批小鼠BMDC其中一批經(jīng)用慢病毒感染對(duì)細(xì)胞進(jìn)行SMAD6基因抑制6D后同時(shí)用TGFΒ1刺激再經(jīng)過48H后分別對(duì)兩批細(xì)胞進(jìn)行電鏡觀察、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表型CD11C、CD80、CD86、CD40、MHCⅡ混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)其抗原提呈功能檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況收集上清液用ELISA檢測(cè)IL6IL12P70。結(jié)果SMAD6未干擾組電鏡下DC成熟樣特征較明顯CD11C、CD80、CD86及MHCⅡ的表達(dá)水平也較高細(xì)胞凋亡指數(shù)較低混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和分泌IL4、IL12P70能力較強(qiáng)SMAD6干擾組DC形態(tài)成熟特征不明顯CD11C、CD80、CD86和MHCⅡ的表達(dá)水平較低細(xì)胞凋亡指數(shù)較高混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和分泌IL4、IL12P70能力較弱。結(jié)論在小鼠BMDC中SMAD6基因被抑制并有TGFΒ1刺激的情況下細(xì)胞多呈未成熟狀態(tài)以未成熟的生物學(xué)特性為主而SMAD6基因未被抑制情況下細(xì)胞更接近于成熟狀態(tài)。