簡介：第二軍醫(yī)大學碩士學位論文糖原磷酸化酶腦型PYGB在肝細胞癌中的生物學功能及機制研究THEFUNCTIONANDMECHANISMOFGLYCOGENPHOSPHORYLASEBRAINTYPEPYGBINHEPATOCEUULARCARCINOMA研究生姓名李敏虹導師胡和平教授專業(yè)內科學消化內科學位類型臨床醫(yī)學專業(yè)學位目錄英文縮略詞表1中文摘要2英文摘要6研究內容糖原磷酸化酶腦型PYGB在肝細胞癌中的生物學功能及機制研究8前言。8日盯青””””””””5實驗材料與實驗方法方法10實驗結果231PYGB在肝細胞癌中的生物學功能232PYGB在肝細胞癌中作用機制的研究34討論37參考文獻39附錄文獻綜述4L致謝51

簡介：脂肪間充質干細胞ADIPOSEDERIVEDSTEMCELLS，S能夠自發(fā)遷移至組織損傷或炎癥部位，通過細胞因子對免疫細胞的調控，發(fā)揮免疫調節(jié)作用而且與研究最廣泛的骨髓間充質干細胞相比，S具備來源豐富、提取方便等優(yōu)勢。因此，S已經成為組織損傷修復、自身免疫性疾病等疾病治療的研究熱點。而如何進一步提升S的遷移能力、免疫調節(jié)能力和其抗炎能力，是干細胞治療領域的一個重要研究方向。通過聚肌苷酸聚胞苷酸POLYI∶C對STOLL樣受體3TLR3的激活，本論文構建了一種全新的脂肪干細胞表型（定義為2）。本論文通過研究2集落形成單位、成骨成脂分化能力、細胞表面抗原標志的表達、免疫調節(jié)因子的表達以及遷移能力等，檢測TLR3的活化對S生物學功能的影響。本論文首先利用酶消化法，從健康小鼠供體的腹部脂肪組織中提取S，通過體外培養(yǎng)擴增、誘導分化、集落形成及細胞表面抗原標志的分析，確定分離出的細胞為S。然后，將TLR3激活劑POLYI∶C加入S培養(yǎng)液中，誘導出2。通過流式細胞儀測試、REALTIMEPCR、染色鑒定等多種檢測方法，將S和2在表面抗原標志表達、細胞因子的分泌、集落形成單位、成骨成脂分化及遷移能力等方面進行了對比。實驗結果顯示S與2茜素紅、油紅O染色結果均呈陽性，染色結果沒有明顯差距流式分析結果顯示S和2均陽性表達SCA1和CD106，陰性表達CD11B、CD45、CD34和CD31S和2集落形成單位測試沒有顯著性差異，說明TLR3的活化對S的成骨成脂分化能力、細胞表面標志表達及體外增殖能力沒有造成顯著性影響。但是，REALTIMEPCR的結果表明TLR3的活化增強了IL6、TGFΒ、RANTES和VEGF的表達，抑制了KC、MCP1和EOTAXIN1的表達趨化性實驗則證實了TLR3的活化增強了S的遷移能力。本論文證實了TLR3的活化并沒有改變S的干細胞特性，2仍然保持了體外自我更新增殖、分化潛能以及表達特定抗原標志的特性。但是，TLR3的活化改變了S細胞因子的表達和遷移能力，從而改變了其免疫調節(jié)作用，提高了其抗炎能力，使得2更好的應用到自身免疫性疾病，比如1型糖尿病等治療中。

簡介：上海交通大學醫(yī)學院上海交通大學醫(yī)學院2010級碩士學位論文級碩士學位論文論文題目自噬抑制與論文題目自噬抑制與S腺苷蛋氨酸聯合應用對肝癌細胞急性缺血缺氧過程中生物學特性的作用及可能機制腺苷蛋氨酸聯合應用對肝癌細胞急性缺血缺氧過程中生物學特性的作用及可能機制研究生姓名研究生姓名佟輝學號號1107209181學科專業(yè)學科專業(yè)外科學（普外）指導老師指導老師邱偉華副教授培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位瑞金醫(yī)院答辯日期答辯日期2013年5月I

簡介：目的進一步研究不同濃度SPIO標記大鼠骨髓間充質干細胞對其生物學活性及分化能力及體外MRI成像效應的影響，為SPIO成功應用臨床提供實驗基礎。方法采用全骨髓貼壁篩選法，分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞RMSCS，待細胞傳至第4代時，用075ΜGML多聚賴氨酸PLL包裹25ΜGML50ΜGML100ΜGMLSPIO，并用PLLSPIO孵育細胞24H、48H、72H。孵育結束后進行普魯士染色、鐵含量測定、透射電鏡等實驗，來檢測細胞SPIO標記率；采用30TMRIT1WI、T2WI、T2WI掃描25ΜGML50ΜGML100ΜGMLSPIO標記細胞，并運用MRI自動測量系統(tǒng)，測量每種掃描序列圖像信號強度，來檢測不同濃度SPIO標記細胞具體成像的差異；細胞周期、凋亡等實驗，來檢測SPIO對細胞活性的影響；細胞分化誘導實驗（成脂、成骨、成軟骨、成內皮）來檢測SPIO對細胞分化能力的影響。結果普魯士染色25ΜGML組標記率％分別為701±94、755±86、763±79，與50ΜGML組、100ΜGML組相比不具有有統(tǒng)計學差異P005。鐵含量測定25ΜGML組細胞含鐵量PGCELL為144±105、149±07、169±008，與50ΜGML組、100ΜGML組相比不具有有統(tǒng)計學差異P005。透射電鏡標記胞質內可見許多囊泡樣包涵體，囊泡內有濃聚細小的鐵顆粒。MRI掃描T1WI、T2WI和T2WI序列信號均呈低信號。其中，掃描106細胞，25ΜGML組、25ΜGML組、25ΜGML組信號平均降低656±79、702±08、727±103，25ΜGML組與50ΜGML組、100ΜGML組不具有統(tǒng)計學差異（P005）。100ΜGML組RMSCS增殖指數分別為199±14、101±03、95±02，與未標記細胞間有統(tǒng)計學差異P結論075ΜGML多聚賴氨酸PLL包裹25ΜGMLSPIO，孵育RMSCS24H即可有效標記RMSCS。其中，100ΜGMLSPIO孵育RMSCS24H即可明顯影響細胞生物學活性和分化能力。臨床MRIT1WI、T2WI、T2WI掃描SPIO標記細胞，信號改變明顯，圖像清晰。其中，T2WI序列最敏感，25ΜGML組就可以引起明顯的信號改變。

簡介：研究背景皮膚SKIN是人體最大的器官，作為人體第一道天然屏障，由表皮、真皮、皮下組織及其附屬器組成。表皮干細胞EPIDERMALSTEMCELLS，ESCS作為皮膚及其附屬器發(fā)生的源泉，具有維持皮膚新陳代謝和正常生理功能的作用12。瘢痕SCAR是皮膚創(chuàng)傷愈合過程中必然的和必需的產物。當皮膚出現創(chuàng)傷時，ESCS具有促進創(chuàng)面再上皮化的能力，主動參與創(chuàng)面修復從而加速創(chuàng)面愈合。其促進創(chuàng)面愈合的機制可能為①當皮膚組織受到損傷時，伴隨著修復信號的啟動，ESCS增殖能力增強，并加速分化為相應的細胞并向表皮上層遷移，主動地參與損傷修復，促進創(chuàng)面愈合②當損傷創(chuàng)緣毛囊內的毛囊干細胞接到損傷修復的指令，能夠立即啟動毛囊隆突部的毛囊干細胞，主動的參與修復3。近些年來，隨著對表皮干細胞特有的生物學特性研究的深入，人們開始考慮從細胞生物學角度考慮運用表皮干細胞為臨床治療提供新的策略。但其研究的表皮干細胞ESCS主要來源于正常皮膚NMALSKIN，NS，而有關成熟期增生性瘢痕HYPERTROPHICSCARHS表皮干細胞的生物學特性的研究尚無報道。且在整形手術中，經常有大量的瘢痕皮膚被切除丟棄，這就造成了本可再利用的寶貴資源的浪費。因此，本實驗就成熟期增生性瘢痕（瘢痕組）表皮干細胞HSESCS的生物學特性進行研究，并與正常皮膚（對照組）表皮干細胞NSESCS進行對比研究，為HSESCS的應用提供研究基礎。目的1對HSESCS與NSESCS的生物特性進行對比研究，明確HSESCS的生物學特性。2通過明確HSESCS的生物學特性，為增生性瘢痕的治療找到一個全新的預防和治療的方向3為HSESCS的科學研究和臨床應用研究提供前期的研究基礎。材料與方法1取人成熟期HS和NS，通過HE染色，對比成熟期增生性瘢痕和正常皮膚的組織結構。2取人成熟期HS和NS，通過免疫組織化學檢測角蛋白19、整合素Β1在成熟期HS和NS中的表達情況，確定成熟期HS中是否存在ESCS。3取人成熟期HS和NS，采用兩步酶消化法分離表皮細胞，Ⅳ膠原快速粘附分選純化ESCS，貼壁培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)結構。4取原代培養(yǎng)的ESCS，應用CCK8檢測HSESCS和NSESCS的生長特點，確定HSESCS是否具有NSESCS的生長特點。5取原代培養(yǎng)的ESCS，利用免疫細胞化學技術，檢測角蛋白19、整合素Β1及核蛋白P63在HSESCS和NSESCS的表達情況，確定HSESCS是否具有NSESCS的生物學特性。6取原代培養(yǎng)的ESCS，利用流式細胞技術，檢測角蛋白19、整合素Β1及CD49F在HSESCS和NSESCS的表達情況，并確定原代培養(yǎng)的成熟性HSESCS的細胞比例。7取原代培養(yǎng)的ESCS，利用WESTERNBLOT技術，檢測角蛋白19、整合素Β1及P63蛋白在HSESCS和NSESCS的表達情況，確定HSESCS是否具有NSESCS的生物學特性。8取原代培養(yǎng)的ESCS，利用REALTIMEPCR技術檢測OCT4基因和NANOG基因在HSESCS和NSESCS的表達情況，確定HSESCS是否具有NSESCS的生物學特性。結果1通過HE染色，成熟期HS與NS的表皮層細胞排列整齊，層次分明。通過免疫組織化學檢測CK19、整合素Β1在成熟期HS和NS中均呈陽性表達，且兩者間表達情況沒有統(tǒng)計學差異P＞005，可以推斷成熟期HS存在ESCS。2原代培養(yǎng)細胞觀察其形態(tài)，HSESCS和NSESCS均呈水滴狀，橢圓形，呈鋪路石樣排列。CCK8檢測原代培養(yǎng)的ESCS的增殖能力，第12天細胞增殖較慢，35天呈對數增殖，67天趨于平緩，兩組間增殖能力沒有統(tǒng)計學差異（P＞005）。3免疫細胞化學技術檢測角蛋白19、整合素Β1及P63的表達情況，兩組間沒有統(tǒng)計學差異P＞005利用流式細胞技術檢測角蛋白19、整合素Β1及CD49F的表達情況，兩組間陽性細胞百分比見存在統(tǒng)計學差異P＜005WESTERNBLOT檢測CK19、整合素Β1及P63蛋白的表達情況，兩組間沒有統(tǒng)計學差異P＞005REALTIMERTPCR技術檢測NANOG基因和OCT4基因的表達情況，兩組間沒有統(tǒng)計學差異P＞005。結論1在成熟期的增生性瘢痕中存在著ESCS2通過兩步酶消化法，Ⅳ膠原快速分選能夠從成熟期的增生性瘢痕得到ESCS，且其具有與正常皮膚的ESCS相同的生物學特性，但是成熟期的增生性瘢痕中ESCS數量較正常皮膚的ESCS少。3成熟期增生性瘢痕來源的ESCS具有正常皮膚來源的ESCS相同的生物學特性，完全可以替代正常皮膚來源的ESCS應用于科學研究中，如組織工程研究人工皮膚等提供皮膚細胞種子等應用于臨床應用研究中，如作為皮膚細胞的種子和皮膚更新的源泉，應用于臨床修復難愈性創(chuàng)面或者大面積皮膚缺損的治療等，不僅避免了含有大量寶貴ESCS的資源浪費，也減輕了從正常皮膚提取ESCS帶給患者的傷害。

簡介：復旦大學博士學位論文PROXL基因在腎癌中的表達及其對腎癌細胞生物學行為影響的實驗研究EXPIRICALSTUDYOFTHEEXPRESSIONOFPROXLINRENALCARCINOMAANDITSEFFECTSONBIOLOGICALBEHAVIOROFRENALCARCL。NOMACELLS院系中山醫(yī)院專業(yè)姓名導師導師組成員外科學泌外呂濤林宗明教授謝幼華研究員張建平主治醫(yī)師縮略詞表

簡介：研究生個人簡介張瑩瑩，女，1986年2月出生，山東省德州市人。本人2005年統(tǒng)招入山東省濱州醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)，在校期間多次獲院系獎學金及“優(yōu)秀團員”稱號，且通過國家計算機2級考試，20072008獲國家勵志獎學金，2010獲山東省“優(yōu)秀畢業(yè)生”稱號。2010年統(tǒng)招成為徐州醫(yī)學院腫瘤學專業(yè)科研型研究生，在校期間修滿學分335分。后于徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院腫瘤科臨床實踐8個月、徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院實驗室實驗11個月，期間通過國家執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格考試和國家英語六級考試，并且于山東醫(yī)藥、中國醫(yī)藥科學各發(fā)表論文一篇，中華腫瘤防治雜志審稿中論文一篇，畢業(yè)論文答辯題目是“RNAI沉默NRP1基因對乳腺癌細胞生物學行為影響的實驗研究”。徐州醫(yī)學院碩士學位論文縮略詞APCCK8CDNADEPCDMSOEDTAEPIDSRNAFBSFCMFITCGFPIC50MRNAODPAGEPBSPCRPIPMSFRNAI英文全稱ALKALINEPHOSPHATASECELLCOUNTINGKIT一8COMPLEMENTARYDNADIETHYLPYROCARBONATEDIMETHYLSULFOXIDE縮略詞表ABBREVIATIONETHYLENEDIAMINETETRAACETICACIDEPIMBICINDOUBLESTRANDEDRNAFETALBOVINESERUMFLOWCYTOMETRYFLUORESCEINISOTHIOCYANATEGREENFLUORESCENTPROTEINHALFINHIBITINGCONCENTRATIONMESSENGERRNAOPTICALDENSITYPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPOLYMERASECHAINREACTIONPROPIDIUMIODIDEPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDE中文全稱堿性磷酸酶細胞增殖檢測試劑盒互補脫氧核糖核酸焦碳酸二乙酯二甲基亞砜乙二胺四乙酸表柔比星雙鏈RNA胎牛血清流式細胞術異硫氰酸熒光素綠色熒光蛋白半數抑制濃度信使RNA光密度聚丙烯酰胺凝膠電泳磷酸鹽緩沖液聚合酶鏈式反應碘化丙啶苯甲基磺酰氟RNA干擾

簡介：目的高危型人乳頭瘤病毒HIGHRISKHUMANPAPILLOMAVIRUS，HRHPV的E6E7是引起宮頸癌的主要致癌基因，在宮頸癌篩查與HPV治療中具有重大的臨床意義，目前E6E7在宮頸癌致癌中機制尚不十分明確。本研究目的在于通過觀察E6E7基因沉默對于宮頸癌細胞株生物學行為的影響，包括體外的增殖、凋亡、侵襲和裸鼠體內成瘤能力，同時觀察E6E7沉默后宮頸癌細胞對抗腫瘤藥物順鉑耐受性的改變以及細胞內HTERC基因表達的變化，探討HPVE6E7在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，并推測其發(fā)揮作用可能的分子機制，初步評價SHRNA干擾對于HPV感染和抗腫瘤治療領域的應用價值。方法1SHRNA質粒構建針對HPV16與HPV18E6E7MRNA序列，分別設計3對SHRNA特異性序列，構建SHRNA載體共6對，利用電擊轉染法轉染HPV16整合的SIHA細胞株與HPV18整合的HELA細胞株，篩選出穩(wěn)定轉染的單細胞克隆細胞株（PSI16NCPSI161PSI162PSI163與PSI18NCPSI181PSI182PSI183）。2體外研究①應用RTPCR檢測轉染后24H、48H、72H，HPV16與HPV18E6與E7MRNA表達；②應用實時定量RTPCR檢測穩(wěn)定轉染細胞株中HPV16與HPV18E6與E7MRNA表達；③應用WESTERNBLOT檢測轉染后SIHA細胞和HELA細胞中P53、PRB和P16抑癌蛋白的表達；④應用MTT測定轉染后SIHA細胞和HELA細胞的生長增殖能力；TRANSWELL實驗檢測細胞遷移能力；流式細胞技術檢測SHRNA轉染后SIHA細胞和HELA細胞的周期分布；⑤順鉑作用48H后流式細胞技術檢測細胞總凋亡與早、晚期凋亡；⑥應用FISH檢測SHRNA穩(wěn)定轉染后細胞內HTERC基因表達變化。3體內研究應用SIHA細胞和HELA細胞穩(wěn)定轉染細胞株分別建立裸鼠人宮頸癌模型（2106個細胞只）。①通過比較腫瘤體積和重量，觀察E6E7沉默對裸鼠腫瘤生長的抑制作用；②應用FISH檢測SHRNA轉染后癌組織中HTERC基因表達變化。結果1SHRNA質粒的干擾作用針對E6E7設計的6組PSISHRNA載體能夠有效地抑制HPV16E6E7MRNA與HPV18E6E7MRNA的表達。抑制效果因選擇的靶點位置不同而存在差異。在SIHA細胞中，PSI161PSI162PSI163對E6和E7的抑制率分別為854％與549；919與632；847與711。在HELA細胞中，PSI181PSI182PSI183對E6和E7的抑制率分別為913與558；904與78；872與810。2體外研究QRT①PCR結果顯示，PSISHRNA質粒能夠有效沉默HPV1618E6與E7MRNA的表達，見結果一；②轉染前后SIHA細胞和HELA細胞中P53、PRB和P16抑癌蛋白的表達均有上調；MTT③試驗結果顯示，E6E7沉默使SIHA細胞和HELA細胞的增殖活性降低，部分組（PSI162PSI163PSI183）與對照組比較有顯著性差異（P＜005）；TRANSWELL④實驗結果顯示，E6E7沉默使腫瘤細胞遷移能力下降部分組（PSI162PSI163PSI181PSI182PSI183）與對照組比較有顯著性差異（P＜005）；⑤細胞周期檢測結果表明E6E7基因沉默后，G0G1期細胞比例增加，S期細胞比例降低；⑥檢測順鉑作用48小時后細胞凋亡情況顯示，轉染后細胞總調亡率增加，表明E6E7沉默使細胞對順鉑的敏感性增加；HTERC⑦基因檢測發(fā)現E6E7基因沉默使HTERC表達下調，正常細胞比例增加。3體內研究E6E7①沉默能抑制宮頸癌細胞的在裸鼠體內的生長，抑制裸鼠腫瘤的體積，與對照組比較有顯著性差異（P＜001）；E6E7②抑制降低了裸鼠體內腫瘤細胞HTERC基因的表達，使HTERC基因正常表達的細胞比例增加。結論重組質粒PSISHRNA能夠使E6E7在宮頸癌細胞株SIHA與HELA細胞中的表達下調，其抑制率可達到6090。E6E7基因轉錄水平的沉默使宮頸癌細胞SIHA與HELA細胞中抑癌蛋白P53、PRB、P16的表達增加，細胞生長受抑制，遷移能力降低，同時使處于G0G1期細胞比例增加，S期細胞比例減少。綜上表明E6E7基因在宮頸癌細胞生長、增殖、遷移以及細胞周期調控等方面起著重要的作用，與腫瘤細胞的惡性生物學行為密切相關。順鉑藥物實驗表明E6E7的抑制使宮頸癌細胞對順鉑敏感性增加，促進了細胞的凋亡。FISH技術檢測E6E7穩(wěn)定抑制的細胞中HTERC基因的表達，發(fā)現E6E7表達與HTERC基因擴增具有相關性。

簡介：分類號分類號R7351密級公開密級公開單位代碼單位代碼10760學號學號107602093849新疆醫(yī)科大學XINJIANGMEDICALUNIVERSITY碩士學位論文碩士學位論文THESISOFMASTERDEGREE學術性學位學術性學位學歷教育學歷教育論文題目論文題目食管癌細胞株高侵襲力亞系的建立及其食管癌細胞株高侵襲力亞系的建立及其生物學特性研究生物學特性研究研究生研究生夏宇指導教師指導教師謝會忠謝會忠教授教授學科專業(yè)名稱學科專業(yè)名稱內科學（消化系病學）內科學（消化系病學）研究方向研究方向消化道腫瘤的基礎研究化道腫瘤的基礎研究研究起止時間研究起止時間2010年10月2012年4月所在學院所在學院第一臨床醫(yī)學院第一臨床醫(yī)學院2012年04月ESTABLISHMENTACTERIZATIONSTUDYOFANESOPHAGEALSQUAMOUSCELLCARCINOMACELLLINESUBPOPULATIONWITHHIGHERINVASIVEABILITYADISSERTATIONSUBMITTEDTOXINJIANGMEDICALUNIVERSITYINPARTIALFULLFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFMASTEROFMEDICINEBYXIAYUINTERNALMEDICINEGASTROENTEROLOGYDISSERTATIONSUPERVISPROFXIEHUIZHONGAPRIL2012

簡介：目的比較人外周血與臍帶血來源的內皮祖細胞經體外培養(yǎng)后生物學特性的差異。方法通過密度梯度離心法和6％羥乙基淀粉結合密度梯度離心法分別分離外周血與臍帶血中的單個核細胞，并分別計數單個核細胞數量，按10106CM2接種于鼠尾膠包被的培養(yǎng)皿中，用內皮細胞培養(yǎng)基進行誘導培養(yǎng)7D。①計數收獲內皮祖細胞的數量；②分別進行臺盼藍染液測定內皮祖細胞的活率；③繪制誘導后內皮祖細胞的生長曲線；④流式細胞儀檢測內皮祖細胞免疫學特性CD133、CD34和VEGFR2的表達量；⑤激光共聚焦檢測內皮祖細胞標記物DIL標記乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC標記荊豆凝集素I。結果外周血與臍帶血體外培養(yǎng)分離出內皮祖細胞具有類似的形態(tài)學特征，顯微鏡下觀察，隨著培養(yǎng)天數的增加，大多數細胞由早期的貼壁圓形轉變?yōu)樗笮?，培養(yǎng)第7天，外周血源組內皮祖細胞有細胞集落形成，臍帶血源組可見梭形細胞自行排列生長為典型的線樣結構。計數剛分離外周血源和臍帶血源收獲單個核細胞數，分別為（10±039）106L1和（2±066）106L1（P＜005）。以相同密度接種，培養(yǎng)誘導7天收獲外周血源和臍帶血源內皮祖細胞分別為（10763±822）104個和（4235±3491）104個，（P＜005）。將培養(yǎng)7天的外周血或臍帶血內皮祖細胞，行臺盼藍染色測定顯示，外周血源和臍帶血源內皮祖細胞活率分別為976±086和993±033，P結論臍帶血來源的內皮祖細胞與外周血來源的內皮祖細胞生物學特性相近，但增殖能力更高。

簡介：安徽醫(yī)科大學ANHUIMEDICALUNIVERSITY碩士學位論文不同HER2水平的人乳腺癌MCF7細胞內MIRNAS表達譜及相關MIRNAS對癌細胞生物學行為的影響MICRORNASEXPRESSIONPROFILEINHUMANBREASTCANCERMCF7CELLSOFDIFFERENTHER2LEVELSANDEFFECTOFMICRORNASONTUMORCELLBIOLOGICALBEHAVIOR作者姓名作者姓名許成辰許成辰指導教師指導教師秦蓉副教授副教授吳強教授學科專業(yè)學科專業(yè)病理學與病理生理學病理學與病理生理學研究方向研究方向乳腺腫瘤病理乳腺腫瘤病理論文工作時間論文工作時間2013年03月至月至2015年05月2015年05月

簡介：美國臨床內分泌醫(yī)師學會AACE在2011年公布的糖尿病綜合治療方案指南中首次提出臨床醫(yī)生應該重視糖尿病患者睡眠呼吸暫停的診斷和治療。阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征OSAHS是一種全身性疾病在肥胖2型糖尿病患者中的發(fā)生率很高其引起的低氧血癥可造成全身多器官損害其中最重要的是心腦血管損害。為此本實驗以小鼠胰島Β細胞株MIN6和人臍靜脈內皮細胞HUVEC為研究對象觀察缺氧環(huán)境及高濃度葡萄糖對胰島Β細胞增殖、自噬及胰島素分泌的影響以及對血管內皮細胞增殖的影響為進一步研究缺氧環(huán)境和高濃度葡萄糖對阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征合并糖尿病OWD以及合并大血管病變的發(fā)生發(fā)展提供理論基礎。本文從以下幾部分進行了論述。一、高糖及缺氧對小鼠胰島Β細胞株MIN6增殖、自噬及生物學功能的影響目的探討高糖及缺氧環(huán)境對小鼠胰島Β細胞株MIN6增殖、自噬及胰島素分泌的影響。方法1分別以正常濃度55MMOLL和高濃度333MMOLL葡萄糖作用于MIN6再將正糖組和高糖組細胞分別按缺氧時間0D1D2D3D4D缺氧1D后復氧1D各分為六個亞組應用細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒CCK8檢測細胞增殖2分別以正常濃度55MMOLL和高濃度333MMOLL葡萄糖作用于MIN6再將正糖組和高糖組各分為常氧和缺氧兩個亞組應用REALTIMEPCR法檢測HIF1Α和BECLIN1表達量3分別以正常濃度55MMOLL和高濃度333MMOLL葡萄糖作用于MIN6再將正糖組和高糖組按缺氧時間0D1D2D3D4D各分為五個亞組ELISA法檢測各組上清中胰島素濃度。結果1常氧環(huán)境下正糖組和高糖組細胞增殖無顯著差異P005缺氧環(huán)境下各組細胞增殖呈時間依賴性抑制正糖組R0966P005但高糖組細胞缺氧后1D復氧1D與常氧培養(yǎng)相比細胞增殖仍明顯受抑制P2缺氧環(huán)境下HIF1Α和BECLIN1表達上調二者表達呈相關性R0965P3缺氧環(huán)境下各時間點高糖組細胞培養(yǎng)上清中胰島素濃度較正糖組降低P結論單純高糖對胰島Β細胞株增殖無明顯影響單純缺氧可抑制細胞增殖缺氧合并高糖時抑制作用更明顯提示二者具有協(xié)同作用抑制細胞增殖。這種抑制作用在正糖組可被復氧逆轉但在高糖組不被復氧所逆轉。缺氧經HIF1Α介導細胞自噬。細胞增殖減弱和自噬增強共同導致胰島Β細胞數量減少并加重胰島Β細胞損傷最終導致胰島素分泌減少。二、高糖及缺氧對人臍靜脈內皮細胞HUVEC增殖的影響目的觀察缺氧環(huán)境和高濃度葡萄糖對人臍靜脈內皮細胞增殖的影響探討高糖及缺氧在糖尿病性大血管病變的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用。方法分別以正常濃度55MMOLL和高濃度333MMOLL葡萄糖作用于HUVEC再將正糖組和高糖組細胞分別按缺氧時間0H12H24H48H缺氧24H后復氧24H各分為五個亞組。培養(yǎng)結束后應用細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒CCK8檢測細胞增殖。結果缺氧環(huán)境下正糖組和高糖組細胞增殖均呈時間依賴性抑制正糖組R1000P005。結論缺氧環(huán)境和高濃度葡萄糖可抑制人血管內皮細胞增殖二者有協(xié)同作用且復氧不可逆轉這種抑制作用提示高糖及缺氧使血管內皮細胞數量減少這可能是導致血管內皮損傷從而啟動糖尿病性血管并發(fā)癥的機制之一。

簡介：南方醫(yī)科大學2012級碩士學位論文伊曲康唑聯合蒽環(huán)類藥物對白血病干細胞樣細胞KGLCT的生物學效應及作用機制的研究課題來源國家自然科學基金30973454；中山市科技計劃重大專項20113A002；廣東省科技計劃項目2011106學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院王靜郭坤元教授許曉軍主任醫(yī)師內科血液病學學術型碩士學位牡臨觚學詆輯菘孑訛月20日廣州中文摘要基因有3種同源基因SONICHEDGEHOGSHH、INDIANHEDGEHOGIHH和DESERTHEDGEHOGDHH，分別編碼SHH、IHH和DHH蛋白【4】。HH信號通路包含PATCHEDPTC、SMOOTHENEDSMO和通路下游的轉錄因子CI／GLI、絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶FUSEDFU、FU抑制劑SUFU、類運動蛋白COSTAL2COS一2、蛋白激酶APKA等多種蛋白。在正常情況下無HH，PTC抑制SMO的活性，同時全長的CI／GLI會被PKA、GSK3及CKI磷酸化，并降解為片段化的CI75，進入細胞核內，抑制下游靶基因的轉錄。而在有HH的情況下，HH與PTC結合后，解除PTC對SMO的抑制，導致SMO被PKA、CKI磷酸化并在膜上聚積，同時SMO分子的C。末端發(fā)生構象改變，由閉合的無活性的狀態(tài)轉變?yōu)殚_放的有活性的狀態(tài)，進而激活下游通路。它是調控胚胎發(fā)育、組織的形成和造血功能的關鍵因素”1。它可影響干細胞，組織細胞的分化、增殖和凋亡。在成人體內，HH信號通路的活躍對于組織修復與再生是必要的【10】。主要是由于HH通路下游GLIL轉錄激活因子可以誘導G1／S細胞周期調節(jié)蛋白的表達而促進細胞的增殖；也可以直接誘導抗凋亡因子BCL2表達以抑制凋亡；還可直接激活可促進上皮組織向間質轉化的因子的轉錄以提高腫瘤的侵襲性。因此，HEDGEHOG信號通路的紊亂與惡性腫瘤的形成、生長和維持有關如黑色素瘤112，131、前列腺癌‘141、胰腺癌‘151、腸癌161、乳腺癌㈣、惡性膠質瘤1181等。一些血液系統(tǒng)腫瘤【89，‘1，19。271如急性白血病AML、ALL、慢性粒細胞性白血病CHRONICMYELOGENOUSLEUKEMIA，CML、CLL、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤MM均是依賴HEDGEHOG信號通路。近年來有許多研究【10，28】顯示HH信號通路對于惡性腫瘤干細胞的維持和擴散起著非常重要的作用。ZHAO掣11J認為SMO的活化對鼠和人CML干細胞數量的維持是必須的，SMO能增加CML干細胞的數量并使病情惡化，而SMO的缺失則可能是干細胞耗盡。這提示針對SMO的抑制劑可能有效的減少白血病干細胞，從而成為一種有效的治療手段。伊曲康唑ITRACONAZOLE，ITC是一種抗真菌藥，伊曲康唑作為惡性血液病IFI一線預防治療藥物，通過抑制真菌的固醇生物合成而起作用，其主要機制也同樣抑制了HEDGEHOG信號通路。研究發(fā)現【291，在鼠髓母細胞瘤同種移植腫瘤和抗真菌治療的患者的血清中，伊曲康唑能顯著抑制HEDGEHOG信號通路的活性，阻止腫瘤的生長。與三II

簡介：間充質干細胞屬于成體干細胞的一種，目前研究的間充質干細胞大多來源于人或動物的成體組織中。近幾年臍帶間充質干細胞以其豐富的來源、方便的取材、對供體無不良影響、無倫理限制等優(yōu)點逐漸成為了研究的熱點。此外，維生素A促進多種細胞體外增殖的作用已有報道。本試驗擬從人臍帶組織分離間充質干細胞，采用免疫組化及RTPCR檢測其相關標志基因、細胞凋亡基因和部分細胞因子生成能力，分析維生素A對體外培養(yǎng)人臍帶間充質干細胞生物學特性的影響。試驗獲得如下結果人臍帶來源間充質干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定通過酶消化法分離臍帶間充質干細胞，結果顯示101％Ⅳ型膠原酶、01％DNASE酶、01％透明質酸酶聯合4℃消化過夜后用025％胰蛋白酶002％EDTA，37℃消化25MIN為獲得人臍帶源間充質干細胞的最適條件。2人臍帶組織經組合酶消化后，呈圓形或橢圓形懸浮于培養(yǎng)液中，培養(yǎng)12天后細胞完全貼壁，成不規(guī)則的成纖維樣細胞生長。3人臍帶源間充質干細胞生長曲線呈S型，2D后進入對數生長期，6D后開始進入平臺期。4凍存前細胞活率為9023％，復蘇后的細胞活率為8761％。5免疫組化結果顯示，細胞表達間充質干細胞標志基因CD29、CD44、CD105，干細胞標記基因OCT4、NANOG、SOX2，不表達上皮細胞標記基因CD31和造血干細胞標記基因CD34。上述結果表明，試驗培養(yǎng)所得細胞可初步鑒定為人臍帶間充質干細胞，并且符合進一步試驗要求。2、維生素A對人臍帶間充質干細胞生長狀況的影響分別在FBSDMEMF12和KSRDMEMF12的培養(yǎng)中添加濃度為1ΜMOLL維生素A，分析維生素A對臍帶間充質干細胞生長的影響。結果如下1MTT檢測結果顯示，添加維生素A培養(yǎng)后，細胞增殖加快。2RTPCR檢測結果顯示，在添加維生素A培養(yǎng)后，細胞中干細胞標記基因NANOG上調表達，細胞增殖基因PCNA、CMYC上調表達，細胞凋亡基因BCLX下調表達。3免疫組化及RTPCR檢測顯示，添加維生素A培養(yǎng)連續(xù)培養(yǎng)細胞20代后，細胞仍表達間充質干細胞標志基因CD29、CD44、CD105，干細胞標記基因OCT4、NANOG、SOX2，不表達上皮細胞標記基因CD31和造血干細胞標記基因CD34。上述結果表明，濃度為1ΜMOLL的維生素A可能通過上調NANOG基因的上調表達激活細胞增殖通路，調節(jié)細胞增殖基因PCNA、CMYC和細胞凋亡基因BCLX的表達，進而促進人臍帶源間充質干細胞增殖。3、維生素A對人臍帶間充質干細胞分泌相關細胞因子的影響分別在FBSDMEMF12和KSRDMEMF12的培養(yǎng)基中添加濃度為1ΜMOLL的維生素A，對4組細胞不同時間點時細胞增殖相關因子的表達量和蛋白的分泌量進行檢測。1RTPCR檢測結果顯示人臍帶源間充質干細胞表達細胞因子基因LIF、SCF、CSF1、EGF和BFGF?；駿GF在KSR組中的表達量顯著高于FBS組，基因SCF在添加維生素A組的表達量上調，其他基因的表達無顯著變化，由此說明KSR促進了EGF在細胞中的表達，維生素A促進SCF在細胞中的表達。2ELISA檢測結果說明人臍帶源間充質干細胞分泌細胞因子SCF、CSF1、EGF，不分泌BFGF、LIF，細胞因子EGF在培養(yǎng)液中的表達量顯著高于細胞內，為胞外分泌型，且五種細胞因子的分泌與維生素A的添加無顯著影響。

簡介：肝臟發(fā)生急性炎癥時伴隨著炎癥細胞因子的升高肝內誘生型一氧化氮合酶表達也異常增高并生成大量的一氧化氮NITRICOXIDENO為闡明在炎癥或感染性肝臟疾病中高NO對肝細胞的生物學影響探索該信號分子的信號轉導途徑以評價NO在肝臟急性炎癥的發(fā)生、發(fā)展與轉歸中的作用及藥物可能作用的新靶點該實驗采用NO供體硝普鈉SODIUMNITROPRUSSIDESNP模擬體內高NO環(huán)境進行如下試驗1NO供體SNP在肝細胞培養(yǎng)液中釋放NO動力學研究2NO供體SNP對原代培養(yǎng)大鼠肝細胞存活率的影響3擬炎癥高NO大鼠原代培養(yǎng)肝細胞的信號轉導4NO供體SNP對原代培養(yǎng)大鼠肝細胞蛋白表達的影響5NO供體SNP及LPS對肝細胞表面ICAM1表達的影響以上實驗研究表明1NO供體SNP在含有巰基GSH和CYS的肝細胞培養(yǎng)液中可持續(xù)釋放NO模擬肝臟急性炎癥期的高NO環(huán)境其致原代培養(yǎng)大鼠肝細胞LC為597532670ΜMOLL2NO供體SNP可通過CGMP依賴性通路和CGMP非依賴性通路GSNO通路進行信號轉導影響下游生物學效應靶點3NO供體SNP呈現劑量依賴性地抑制LPS誘導的原代培養(yǎng)大鼠肝細胞表面ICAM1的表達但不能誘導大鼠肝細胞表達HSP