人外周血與臍帶血內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)特性的比較.pdf

1、目的：比較人外周血與臍帶血來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后生物學(xué)特性的差異。
　　方法：通過密度梯度離心法和6％羥乙基淀粉結(jié)合密度梯度離心法分別分離外周血與臍帶血中的單個核細(xì)胞，并分別計(jì)數(shù)單個核細(xì)胞數(shù)量，按1.0×106/cm2接種于鼠尾膠包被的培養(yǎng)皿中，用內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)7d。①計(jì)數(shù)收獲內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量；②分別進(jìn)行臺盼藍(lán)染液測定內(nèi)皮祖細(xì)胞的活率；③繪制誘導(dǎo)后內(nèi)皮祖細(xì)胞的生長曲線；④流式細(xì)胞儀檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞免疫學(xué)特性CD13

2、3、CD34和VEGFR-2的表達(dá)量；⑤激光共聚焦檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞標(biāo)記物Dil標(biāo)記乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC標(biāo)記荊豆凝集素I。
　　結(jié)果：外周血與臍帶血體外培養(yǎng)分離出內(nèi)皮祖細(xì)胞具有類似的形態(tài)學(xué)特征，顯微鏡下觀察，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，大多數(shù)細(xì)胞由早期的貼壁圓形轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮?，培養(yǎng)第7天，外周血源組內(nèi)皮祖細(xì)胞有細(xì)胞集落形成，臍帶血源組可見梭形細(xì)胞自行排列生長為典型的線樣結(jié)構(gòu)。計(jì)數(shù)剛分離外周血源和臍帶血源收獲單個核細(xì)胞數(shù)，分別為（1.0±0

3、.39）×106 L-1和（2±0.66）×106 L-1（P＜0.05）。以相同密度接種，培養(yǎng)誘導(dǎo)7天收獲外周血源和臍帶血源內(nèi)皮祖細(xì)胞分別為（107.63±8.22）×104個和（423.5±34.91）×104個，（P＜0.05）。將培養(yǎng)7天的外周血或臍帶血內(nèi)皮祖細(xì)胞，行臺盼藍(lán)染色測定顯示，外周血源和臍帶血源內(nèi)皮祖細(xì)胞活率分別為(97.6±0.86)%和(99.3±0.33)%，(P<0.05)。繪制誘導(dǎo)后內(nèi)皮祖細(xì)胞的生長曲線顯示,

4、臍帶血源內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖能力明顯高于外周血（P<0.05）,外周血源和臍帶血源內(nèi)皮祖細(xì)胞在接種后第三天增殖速度達(dá)到峰值,在隨后的培養(yǎng)中細(xì)胞增殖呈衰減態(tài)。培養(yǎng)7天行流式細(xì)胞檢測顯示，外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞核臍帶血內(nèi)皮祖細(xì)胞均表達(dá)具有內(nèi)皮祖細(xì)胞表型的CD133、CD34和VEGFR-2表面標(biāo)志。免疫熒光檢測顯示外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞和臍帶血內(nèi)皮祖細(xì)胞既攝取Dil標(biāo)記乙?；兔芏戎鞍?也結(jié)合FITC標(biāo)記荊豆凝集素I，為體外內(nèi)皮祖細(xì)胞的標(biāo)志。