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    • 簡(jiǎn)介:目的艾滋病病毒HIV和乙型肝炎病毒HBV有著共同的傳染途徑,而肝臟疾病也成為HIV感染患者重要的死亡原因。目前對(duì)于HIVHBV共感染中針對(duì)HBV的治療并沒有很多研究比較不同治療方案的療效以及對(duì)應(yīng)的HBV病毒學(xué)、免疫學(xué)反應(yīng)以及肝酶、腎毒性的評(píng)估。方法本研究利用已建立的全國(guó)多中心隊(duì)列以及北京協(xié)和醫(yī)院門診數(shù)據(jù)庫(kù)和標(biāo)本庫(kù),對(duì)HIVHBV共感染病人的臨床信息進(jìn)行提取,同時(shí)針對(duì)治療基線、治療半年(24周)和治療一年(48周)的血漿樣本進(jìn)行HBVDNA、HBSAG和HBEAG抗原定量的測(cè)定。根據(jù)患者接受的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療,本研究分為兩個(gè)治療組抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療中僅有拉米夫定單藥對(duì)HBV有活性的方案(3TC組)和抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療方案中有替諾福韋和拉米夫定兩種對(duì)HBV有活性的方案(TDF組)。結(jié)果研究共納入151人,其中60人使用拉米夫定(3TC組)單藥方案,91人使用替諾福韋拉米夫定方案(TDF組)?;€有457%的患者基線HBVDNA>20000IUML且兩治療組基線HBV病毒學(xué)指標(biāo)無(wú)顯著差異。在治療后一年,基線HBVDNA<20000IUML的病人3TC組和TDF組HBV病毒抑制率分別為968%和980%P>0999而基線HBVDNA>20000IUML的病人3TC組和TDF組HBV病毒抑制率為345%和725%P0002。兩組在HBSAG抗原定量下降方面無(wú)顯著差別,但TDF組HBEAG定量下降顯著強(qiáng)于3TC組。治療一年共有10人出現(xiàn)HBEAG抗原轉(zhuǎn)換286%,1035,5人出現(xiàn)HBSAG抗原丟失36%,5137。在多因素回歸中,HBV病毒抑制是HBEAG抗原轉(zhuǎn)換的決定因素。肝酶變化及腎毒性方面,兩治療組無(wú)顯著差異。在HBV病毒抑制的病人中,TDF組IL18水平顯著下降,但3TC組的水平無(wú)顯著改變。結(jié)論本研究提出了針對(duì)HBV基線DNA分層治療的概念,即在基線HBVDNA<20000IUML的情況下,可使用基于3TC或者TDF3TC的方案而在基線HBVDNA>20000IUML的情況下,仍然推薦使用基于TDF3TC的方案以提高病毒抑制率和HBEAG抗原轉(zhuǎn)換率。這一結(jié)果對(duì)于今后HIVHBV共感染中針對(duì)HBV的治療有一定指導(dǎo)意義。
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      上傳時(shí)間:2024-03-10
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    • 簡(jiǎn)介:漢灘病毒(HTNV)主要引起腎綜合征出血熱(HFRS),迄今尚無(wú)特異、有效的治療藥物。抗HTNV鼠源性單克隆抗體(MAB),雖然有較好的抗病毒作用,但應(yīng)用于人體可能產(chǎn)生抗鼠抗體。而人源性MAB制備困難、產(chǎn)量低,目前也難以應(yīng)用?;蚬こ炭贵w在原核系統(tǒng)中表達(dá)雖然產(chǎn)量較高,但由于其受加工修飾功能的限制,會(huì)影響表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)特性;而真核表達(dá)又存在表達(dá)量低的難題。運(yùn)用合適的植物表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)抗體不僅表達(dá)產(chǎn)量高,而且由于植物表達(dá)系統(tǒng)有良好的加工修飾功能,其表達(dá)產(chǎn)物能保持良好的生物學(xué)特性。本研究用基因工程技術(shù)構(gòu)建了鼠人嵌合抗體基因,并將其導(dǎo)入擬南芥內(nèi),嘗試在植物體內(nèi)表達(dá),主要方法和結(jié)果如下1將抗HTNV鼠源性MAB3G1的可變區(qū)基因及人抗體恒定區(qū)基因進(jìn)行拼接,構(gòu)建了植物嵌合表達(dá)載體3G1MHPCAMBIA2301,轉(zhuǎn)化入根瘤農(nóng)桿菌中,利用根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的抽真空轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)化野生型擬南芥,獲得轉(zhuǎn)基因植株。提取T0代轉(zhuǎn)基因植株基因組DNA,應(yīng)用針對(duì)輕、重鏈序列的特異性引物進(jìn)行PCR檢測(cè),篩選出整合有目的基因的陽(yáng)性植株。以輕、重鏈探針對(duì)RNA進(jìn)行NTHERNBLOT檢測(cè),檢測(cè)出完整的輕、重鏈RNA,證明轉(zhuǎn)基因植株構(gòu)建成功。2針對(duì)抗體輕、重鏈核苷酸序列設(shè)計(jì)特異性引物,對(duì)轉(zhuǎn)基因植物的CDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè),結(jié)果顯示不同轉(zhuǎn)基因植株間的RNA轉(zhuǎn)錄量存在差異,挑選出輕、重鏈轉(zhuǎn)錄量較高的5株表達(dá)株系,通過(guò)以抗人KAPPA鏈及抗人FC段抗體分別做WESTERNBLOT檢測(cè),結(jié)果顯示有目的蛋白的表達(dá),但表達(dá)的蛋白分子量小于預(yù)期大小,實(shí)驗(yàn)提示抗體的FC段可能存在一定程度的降解。3以HTNV感染細(xì)胞為抗原,植物蛋白提取物為待測(cè)抗體,羊抗人KAPPA鏈抗體為一抗,F(xiàn)ITC標(biāo)記的兔抗羊抗體為二抗做間接免疫熒光檢測(cè),結(jié)果證明目的蛋白具有與HTNV抗原的結(jié)合活性。本研究對(duì)基因工程抗體在植物體系中的表達(dá)進(jìn)行了有益的探索,提供了有用的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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      上傳時(shí)間:2024-03-12
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    • 簡(jiǎn)介:呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUSRSV簡(jiǎn)稱合胞病毒是重要的嬰幼兒急性呼吸道感染病原體可引起間質(zhì)性肺炎及毛細(xì)支氣管炎等疾病。RSV感染非常普遍超過(guò)90%的兒童在2歲以前感染過(guò)RSV而且都經(jīng)歷過(guò)1次或多次感染。在發(fā)展中國(guó)家5歲以下兒童因RSV感染住院病人的死亡率為7%發(fā)達(dá)國(guó)家為05%20%。我國(guó)RSV感染研究缺乏全國(guó)資料部分地區(qū)資料顯示北京市兒童醫(yī)院研究顯示在19961999年期間住院的病人中有呼吸道感染癥狀病例1183例RSV陽(yáng)性者標(biāo)本255例占送檢標(biāo)本總數(shù)的215%沈陽(yáng)地區(qū)19992000年調(diào)查顯示小兒急性呼吸道感染病例的4462%由RSV引起。我省尚未開展RSV感染的病原學(xué)研究?jī)H僅開展了RSVIGM抗體的檢測(cè)工作也沒有對(duì)于嬰幼兒急性呼吸道感染病例的病原學(xué)流行趨勢(shì)的研究。為了了解河南省嬰幼兒急性呼吸道感染病例病原學(xué)分布狀況探討呼吸道合胞病毒在我省的流行規(guī)律積累呼吸道合胞病毒毒株了解呼吸道合胞病毒黏附蛋白G基因的分子生物學(xué)特征確定我省呼吸道合胞病毒分離株的型別從而填補(bǔ)我省呼吸道合胞病毒病原學(xué)研究的空白我們?cè)O(shè)立并開展了此項(xiàng)研究工作。另外通過(guò)對(duì)呼吸道合胞病毒各種檢測(cè)、鑒定方法的對(duì)比比較各種檢測(cè)方法檢測(cè)效果的差異在尋找呼吸道合胞病毒快速檢測(cè)方法、建立應(yīng)急檢驗(yàn)平臺(tái)等突發(fā)公共衛(wèi)生事件的預(yù)防控制工作方面提供可靠的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)支持。材料與方法研究對(duì)象來(lái)源于2006年10月2007年5月期間河南省人民醫(yī)院兒科門診和住院病例以及河南省流感樣病例監(jiān)測(cè)系統(tǒng)中的病例對(duì)診斷為急性支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、肺炎符合篩選條件的病例確定為研究對(duì)象。對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行調(diào)查并采集咽拭液標(biāo)本選擇HEP2、VERO細(xì)胞系采用組織培養(yǎng)的方法在咽拭液標(biāo)本中分離培養(yǎng)呼吸道合胞病毒株運(yùn)用相關(guān)試劑盒提取咽拭液標(biāo)本RNA模板采用AGELISA、REALTIMEPCR等方法鑒定呼吸道合胞病毒。設(shè)計(jì)并合成針對(duì)RSV黏附蛋白G基因的上下游引物對(duì)鑒定陽(yáng)性病例運(yùn)用RTPCR方法擴(kuò)增該基因陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物運(yùn)用核苷酸測(cè)序方法獲得G基因全長(zhǎng)核苷酸序列將所獲得的序列與已知參考毒株G基因序列一同導(dǎo)入DNASTAR軟件進(jìn)行同源性分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。運(yùn)用卡方檢驗(yàn)等相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較各檢測(cè)方法的敏感性差異結(jié)合實(shí)際工作找出快速實(shí)用的檢測(cè)方法。結(jié)果通過(guò)收集和篩選資料共有126例病例符合本研究所規(guī)定的條件對(duì)所有研究對(duì)象進(jìn)行調(diào)查和采集臨床標(biāo)本共采集咽拭液標(biāo)本126份。經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)共有58份標(biāo)本出現(xiàn)CPE其中5份為典型細(xì)胞融合病變53份為其他細(xì)胞病變。經(jīng)過(guò)REALTIMEPCR方法鑒定出12份為呼吸道合胞病毒經(jīng)過(guò)AGELISA鑒定出8份呼吸道合胞病毒通過(guò)針對(duì)黏附蛋白G蛋白基因的引物的RTPCR反應(yīng)共有6份標(biāo)本擴(kuò)增出了陽(yáng)性條帶對(duì)這6份病毒標(biāo)本的RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了核苷酸序列測(cè)定獲得這些病毒的G蛋白基因全長(zhǎng)核苷酸序列分別編號(hào)為HENAN2006A36、HENAN2006A39、HENAN2006207、HENAN2006305、HENAN2006417、HENAN2006589其核苷酸序列長(zhǎng)度均為922BP。將所得到的核苷酸序列導(dǎo)入DNASTAR軟件MEGALIGN模塊中進(jìn)行核苷酸序列同源性分析通過(guò)分離毒株序列兩兩比較其同源性最大99%最小88%將所測(cè)核苷酸序列推導(dǎo)出氨基酸序列進(jìn)行同源性比較同源性在90%95%之間其與RSVA型毒株序列同源性為87%94%與RSVB型毒株序列同源性33%35%。從PUBMED基因數(shù)據(jù)庫(kù)中查找并下載多條RSV毒株G蛋白基因核苷酸參考序列與樣本序列導(dǎo)入DNASTAR軟件MEGALIGN模塊中進(jìn)行比較并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹確定病毒型別。通過(guò)比較不同的RSV鑒定方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明共檢測(cè)12株呼吸道合胞病毒其中組織培養(yǎng)分離出5株病毒REALTIMEPCR檢出12株病毒AGELISA檢出8株病毒對(duì)上述數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理檢出率經(jīng)配對(duì)卡方檢驗(yàn)REALTIMEPCR和AGELISA兩種方法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P010Χ2225檢測(cè)敏感性沒有顯著性差異都可以用來(lái)進(jìn)行快速檢測(cè)。結(jié)論1通過(guò)檢測(cè)結(jié)果的比較REALTIMEPCR實(shí)驗(yàn)與AGELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)于呼吸道合胞病毒的檢測(cè)檢測(cè)敏感性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2在我省部分地區(qū)20062007年度嬰幼兒急性呼吸道感染病例中RSV感染毒株以A型毒株為主。
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    • 簡(jiǎn)介:乙型肝炎病毒分子流行病學(xué)調(diào)查乙型肝炎病毒HBV感染是全球范圍的重大公共衛(wèi)生問題。我國(guó)是乙型肝炎高發(fā)區(qū)。按照1992年全國(guó)乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果普通人群HBV感染陽(yáng)性率為10%推算我國(guó)現(xiàn)有慢性無(wú)癥狀的乙型肝炎病毒攜帶者超過(guò)1億每年約30萬(wàn)名患者死于肝硬化、肝癌等乙肝相關(guān)疾病。HBV基因組變異是突變的隨機(jī)性和選擇的有序性作用的結(jié)果機(jī)體免疫系統(tǒng)和藥物對(duì)HBV的選擇壓力與HBV基因進(jìn)化及突變有關(guān)。根據(jù)HBV全基因序列異質(zhì)性≥8%可將其分為A~H8種基因型每種基因型還可分為亞型和準(zhǔn)種。研究表明各基因型及亞型有一定的地理和人群分布特點(diǎn)且與人類活動(dòng)有關(guān);各基因型的臨床轉(zhuǎn)歸、對(duì)抗病毒治療的應(yīng)答、耐藥突變及其血清學(xué)轉(zhuǎn)換規(guī)律之間具有顯著差異。因此研究HBV基因型及其基因進(jìn)化規(guī)律對(duì)HBV感染的預(yù)防和控制具有十分重要的意義。研究表明我國(guó)的HBV基因型AD型均有分布其中以C、B基因型為主但相關(guān)研究均存在樣本量少區(qū)域局限沒有深入到基因亞型的研究等缺陷。我國(guó)目前缺乏對(duì)于HBV基因型分布的系統(tǒng)研究這在一定程度上也制約了HBV基因型研究的發(fā)展。目的通過(guò)乙肝分子流行病學(xué)調(diào)查確定本地區(qū)HBV基因型及亞型的地理分布建立一種快速靈敏、高通量的鑒定HBV基因型及亞型的方法以適合大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查并分析HBV基因型及亞型在肝臟疾病中的作用。方法通過(guò)多重PCR反應(yīng)對(duì)462例肝細(xì)胞癌患者HCC組、234例慢性乙肝患者CH組和110例HBV病毒攜帶者組進(jìn)行HBV基因型及亞型的鑒定;并對(duì)其中采取手術(shù)切除或TACE或兩者聯(lián)合治療的228例基因亞型為B2和C2的HCC患者隨訪觀察1年。通過(guò)回顧性的分子流行病學(xué)研究共調(diào)查298例AHB患者、588例對(duì)照和572例患者家庭成員填寫調(diào)查表抽取5ML血液樣本。結(jié)果1建立了快速簡(jiǎn)便的鑒定HBV基因型及亞型的型特異引物多重PCR方法。2探討HBV基因型及亞型在乙肝相關(guān)疾病中的分布規(guī)律以及在肝細(xì)胞癌HCC形成中的作用。檢測(cè)了中國(guó)東部地區(qū)江蘇、浙江、安徽和上海462例HBVDNA陽(yáng)性的HCC患者、234例慢性乙肝患者CH和425例乙肝攜帶者的HBV基因型、HBVDNA拷貝量和HBEAG462例HCC患者中B2型62例134%C2型337例729%混合型49例106%;在HCC組和CH組內(nèi)混合型的病毒滴度高于C2型且這兩組內(nèi)混合型所占的比例高于組HCC組的C2比例高于組HCC組內(nèi)B2型從30歲年齡組到5059歲年齡組有下降趨勢(shì)。通過(guò)多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)年齡≥40歲、HBVDNA拷貝量≥10000是HCC形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素年齡≤50歲、B2亞型的患者比C2亞型HCC患者更容易復(fù)發(fā)。3上海地區(qū)AHB感染新的危險(xiǎn)因素以及AHB慢性化與基因型的關(guān)系。通過(guò)回顧性的分子流行病學(xué)研究共調(diào)查298例AHB患者、588例對(duì)照和572例患者家庭成員填寫調(diào)查表抽取5ML血液樣本。多因素回歸分析表明侵入性治療A37295%C255542家庭內(nèi)密切接觸A30595%CI211441美容保健A15295%CI109212無(wú)乙肝疫苗接種史A77895%CI3761611是AHB感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。AHB患者中25例轉(zhuǎn)成慢性乙肝占84%。C2型AHB患者慢性化比例大于82型B2型患者與C2型相比有更高的病毒滴度和HBEAG表達(dá)。結(jié)論1HBV基因型及亞型的多重PCR方法是一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、高通量的方法適合大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查。2上海及周邊地區(qū)HBV基因亞型以C2型為主B2型次之HCC、CH及人群中的基因型構(gòu)成不同通過(guò)HBV陽(yáng)性的肝細(xì)胞患者、慢性乙肝患者和無(wú)癥狀攜帶者三組人群中HBV基因型及亞型的分布及臨床指標(biāo)的差異確定上海及周邊地區(qū)HBV基因型及亞型在肝臟疾病譜中的分布闡明了HBV混合基因型的感染發(fā)生HCC的危險(xiǎn)性高于單一基因型;HBVB2型HCC患者的預(yù)后較差為乙肝患者的個(gè)性化管理和治療提供依據(jù)。3通過(guò)家族聚集性調(diào)查表明上海地區(qū)AHB感染的新的危險(xiǎn)因素與B2型相比HBVC2型AHB更容易發(fā)生慢性化為急性乙肝的預(yù)防和控制的措施的制定提供依據(jù)。
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    • 簡(jiǎn)介:河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文進(jìn)展型腦梗死與人巨細(xì)胞病毒激活感染相關(guān)性的血清學(xué)研究姓名鮑繼奎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師高玉林王永祥20040301中文摘要檢測(cè)了271份血清HCMV、HSV1、HSV2、CP和HP5種IGM抗體,比較各組抗體陽(yáng)性率。結(jié)果在正常對(duì)照組、頸動(dòng)脈硬化組、穩(wěn)定型腦梗死組和進(jìn)展型腦梗死組組中,HCMVIGM抗體陽(yáng)性例數(shù)分別為4、19、34、33,陽(yáng)性率分別為645%、2923%、3864%和5893%HSV1IGM抗體陽(yáng)性例數(shù)分別為6、7、13、10,陽(yáng)性率分別為968%、1077%、14。77%和1786%;HSV2IGM抗體陽(yáng)性例數(shù)分別為5、6、8、6,抗體陽(yáng)性率分別為806%、923%、909%和107L%;CPIGM抗體陽(yáng)性例數(shù)6、6、8、9,陽(yáng)性率分別為968%、923%、909%和1607%HPIGM抗體陽(yáng)性例數(shù)分別為33、32、53和34,陽(yáng)性率分別為6129%、4923%、6023%和6071%。HCMVIGM抗體陽(yáng)性率在各組間有非常顯著性差異X238204,P0001,見附表3。HSV1、HSV2、CP和HPIGM抗體陽(yáng)性率在各組間無(wú)顯著性差異P均005,見附表4。提示腦梗死尤其是進(jìn)展型腦梗死主要與HCMV活動(dòng)性感染有關(guān),而與HSV1、HSV2、CPN、RIP活動(dòng)性感染無(wú)關(guān)。頸動(dòng)脈硬化組與正常對(duì)照組比較HCMVIGM抗體陽(yáng)性率有非常顯著性差異X211015。P0001,見附表5。提示頸動(dòng)脈硬化與HCMV活動(dòng)性感染有關(guān)。腦梗死包括穩(wěn)定型和進(jìn)展型組與頸動(dòng)脈硬化組比較HCMVIGM抗體陽(yáng)性率有顯著性差異X25507P0019,見附表6。提示腦梗死與HCMV活動(dòng)性感染有關(guān)。進(jìn)展型腦梗死組與穩(wěn)定型腦梗死組比較,HCMVIGM抗體陽(yáng)性率有顯著性差異X25625,P0018,見附表7。提示HCMV活動(dòng)性感染與進(jìn)展型腦梗死有關(guān)。4組兩種或兩種以上病原體多重感染率分別為4464%、
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    • 簡(jiǎn)介:背景腸道病毒ENTEROVIRUSES,EV是生活在人類腸道中的一類常見病毒,多為無(wú)癥狀感染,但也可引起多種嚴(yán)重的或潛在的致死性疾病如脊髓灰質(zhì)炎、腦炎、手足口病、出血性結(jié)膜炎和急性心肌炎等。近年的研究還表明,EV感染與某些慢性疾病有關(guān),如Ⅰ型糖尿病、甲狀腺炎等。EV在世界范圍內(nèi)廣泛分布,無(wú)明顯地域性差異。隨著當(dāng)前各國(guó)間國(guó)際交流日益頻繁,EV流行范圍早已超過(guò)人們最初的預(yù)期,并且自然界中EV生存環(huán)境的改變很可能會(huì)加速病毒的變異。EV所致疾病主要為散發(fā)或呈地區(qū)性暴發(fā)。在非流行期,特定區(qū)域通常有幾個(gè)優(yōu)勢(shì)型別共循環(huán),而在暴發(fā)時(shí)期,往往會(huì)在同一地區(qū)分離到大量同一型別毒株。長(zhǎng)期以來(lái),EV感染是嚴(yán)重威脅公眾特別是兒童健康與生命安全的重大公共衛(wèi)生問題之一,加強(qiáng)EV分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè),對(duì)于預(yù)防控制EV相關(guān)疾病具有重要理論和實(shí)際意義。EV以隱性感染為主,隱性感染者可持續(xù)數(shù)周向外環(huán)境排泄大量病毒,故EV常在下水道污水、江河水中檢出,甚至污染飲用水水源。環(huán)境中的EV可以通過(guò)不同的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行濃縮、分離及鑒定,以作為EV流行病學(xué)研究的一個(gè)補(bǔ)充方法,稱為環(huán)境監(jiān)測(cè)。生活污水是特定地區(qū)EV在環(huán)境中的豐富來(lái)源。環(huán)境監(jiān)測(cè)可以獲得特定地區(qū)EV的循環(huán)信息,包括有癥狀的感染和隱性感染,并有可能在人群產(chǎn)生臨床癥狀之前就在生活污水中檢出EV。EV在環(huán)境水體中廣泛存在,可在多種環(huán)境水體中被分離,但其滴度相對(duì)較低,且容易在水中懸浮物上附著,比臨床標(biāo)本更難檢出。因此,環(huán)境水體標(biāo)本檢測(cè)前必須進(jìn)行大量水體的濃縮富集,這是決定EV能否成功分離的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。膜吸附洗脫法是目前實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的濃縮方法,在病毒的環(huán)境監(jiān)測(cè)以及相關(guān)疾病的病原體檢測(cè)方面可以發(fā)揮很大作用。EV是相關(guān)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一,近年來(lái)對(duì)其進(jìn)行了廣泛的流行病學(xué)及病毒學(xué)研究。目前,全球已有相當(dāng)數(shù)量的國(guó)家開展環(huán)境生活污水標(biāo)本的監(jiān)測(cè)研究,以了解當(dāng)?shù)丶顾杌屹|(zhì)炎(脊灰)病毒POLIOVIRUS,PV和非脊灰腸道病毒NONPOLIOENTEROVIRUSES,NPEV的循環(huán)狀況和開展相關(guān)研究,而國(guó)內(nèi)在該領(lǐng)域研究較少。目的1在前期研究的基礎(chǔ)上,繼續(xù)優(yōu)化環(huán)境生活污水標(biāo)本中EV的濃縮分離方法,以完善方法學(xué),提高檢測(cè)效率探討污水標(biāo)本中懸浮顆粒物對(duì)病毒吸附和分離的影響。2通過(guò)環(huán)境監(jiān)測(cè)和病例監(jiān)測(cè),明確2012~2014年山東地區(qū)EV型別分布、傳播和頻率,為相關(guān)疾病的流行病學(xué)研究提供支持。3補(bǔ)充完善山東省環(huán)境生活污水標(biāo)本EV分離株各型別的VP1區(qū)基因數(shù)據(jù)庫(kù),研究山東省EV的基因特征和長(zhǎng)期循環(huán)動(dòng)態(tài)變化,為EV分子流行病學(xué)研究提供有價(jià)值的補(bǔ)充。方法1環(huán)境監(jiān)測(cè)本研究選擇濟(jì)南市光大污水處理廠、臨沂市首創(chuàng)水務(wù)公司作為采樣點(diǎn),之后在2013年9月又納入煙臺(tái)市辛安河污水處理廠作為采樣點(diǎn),分別在其生活污水的入口處采用定時(shí)采樣法采集污水標(biāo)本,使用陰離子膜吸附超聲波振蕩法進(jìn)行濃縮富集,接種RD和HEP2細(xì)胞進(jìn)行病毒分離。2病例監(jiān)測(cè)本研究選擇山東省2012~2014年急性弛緩性麻痹AFP和急性腦膜炎腦炎綜合癥AMES兩種疾病監(jiān)測(cè)系統(tǒng)中分離的EV進(jìn)行分析。3基因擴(kuò)增及型別鑒定提取病毒RNA,使用RTPCR擴(kuò)增VP1編碼區(qū),對(duì)陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定。將各分離株的VP1編碼區(qū)序列通過(guò)與美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心NCBI提供的數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),進(jìn)而確定EV血清型別。4生物信息學(xué)分析使用BIOEDIT7090軟件,對(duì)生活污水和病例標(biāo)本中的EV分離株以及GENBANK中公布的相關(guān)EVVP1核苷酸序列進(jìn)行同源性比較。使用MEGA50軟件,通過(guò)鄰位法NEIGHBJOININGMETHOD構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹,建樹的可靠性通過(guò)1000BOOTSTRAP評(píng)估。通過(guò)比較,研究山東地區(qū)EV的基因特征、變異及其進(jìn)化來(lái)源。結(jié)果1陰離子膜吸附洗脫法的優(yōu)化通過(guò)加標(biāo)回收試驗(yàn),比較不同PH值洗脫液和不同超聲波振蕩次數(shù)對(duì)EV的回收率,確定最優(yōu)洗脫條件為洗脫液PH為90,超聲振蕩時(shí)間設(shè)定為振蕩1次,持續(xù)3MIN。2環(huán)境污水中懸浮顆粒物對(duì)EV的吸附作用環(huán)境污水為酸性時(shí),有利于EV吸附到懸浮顆粒物上EV含量對(duì)懸浮顆粒物的吸附作用基本沒有影響。環(huán)境污水中懸浮顆粒物濃度增加,吸附到顆粒物上的病毒滴度及吸附率呈上升趨勢(shì),吸附在其中的病毒的洗脫率呈明顯下降趨勢(shì),總體的顆粒物回收效率在特定的濃度范圍內(nèi)保持穩(wěn)定。環(huán)境污水標(biāo)本中懸浮顆粒物對(duì)E3的吸附作用較強(qiáng),對(duì)E6的吸附作用較弱。3環(huán)境監(jiān)測(cè)和病例監(jiān)測(cè)標(biāo)本的采集和病毒分離情況2012~2014年環(huán)境監(jiān)測(cè)標(biāo)本共分離到EV2010株,包括NPEV1468株,優(yōu)勢(shì)血清型別為E7、CVB5、E6、E3、E11、CVB3PV542株,其中發(fā)現(xiàn)1株Ⅰ型疫苗衍生株脊灰病毒VDPVE12221,以及12株高變異株病毒PREVDPV。各市不同月份的NPEV型別譜各有不同,不同血清型別的毒株有不同的時(shí)間循環(huán)模式。AFP監(jiān)測(cè)病例共分離到NPEV119株,包括27種型別PV35株,未檢出VDPV毒株及PV野毒株。2014年AMES監(jiān)測(cè)病例中,收集標(biāo)本798份,分離到EV152株,陽(yáng)性率為191%。其中,CVB5、E6、E30分離數(shù)目較多,占總分離數(shù)的928%,還分離到E7、E25及1例E3與E6的混合感染。4EV優(yōu)勢(shì)血清型別的同源性比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析E7分離數(shù)目最多,分離株之間同源性較低,存在多個(gè)傳播鏈共循環(huán)。E3核苷酸和氨基酸變異較小,在遺傳進(jìn)化上較為穩(wěn)定,具有明顯的時(shí)間和地域聚集性。CVB5分離株之間同源性較高,存在兩個(gè)傳播鏈,在山東省內(nèi)傳播迅速,廣泛流行。CVB3分離株之間核苷酸差異較小,進(jìn)化分支具有明顯的時(shí)間聚集特征。E6分離株核苷酸差異較大,保持著較快的進(jìn)化速度,山東省內(nèi)存在至少兩條傳播鏈的共循環(huán)。E11分離株包括GERGYLIKE和SILVALIKE毒株,分為明顯的兩個(gè)進(jìn)化分支,之間的核苷酸差異較大。結(jié)論1根據(jù)加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果,通過(guò)優(yōu)化洗脫液PH值、超聲振蕩時(shí)間和次數(shù),確定了污水標(biāo)本的陰離子膜吸附超聲波振蕩法的最優(yōu)洗脫條件。2環(huán)境污水中懸浮顆粒物對(duì)EV具有較強(qiáng)的吸附作用,并受到多種因素的影響,其分離型別構(gòu)成與上清中差異不大,但各血清型別分離率存在差異。建立了從懸浮顆粒物中洗脫濃縮EV的方法。在今后的環(huán)境監(jiān)測(cè)中,應(yīng)綜合采用污水上清和懸浮顆粒物進(jìn)行分離分析。3環(huán)境監(jiān)測(cè)和病例監(jiān)測(cè)中主要分離到的是EVB組病毒,A組、C組病毒分離株數(shù)較少。NPEV分離株的優(yōu)勢(shì)血清型別為E7、CVB5、E6、E3、E11、CVB3。各市不同月份的NPEV型別譜各有不同,不同血清型別的毒株有不同的時(shí)間循環(huán)模式。4環(huán)境污水中分離到的PV均為疫苗株,無(wú)野病毒。國(guó)內(nèi)首次從環(huán)境污水中發(fā)現(xiàn)疫苗衍生株脊灰病毒。5山東省EV各優(yōu)勢(shì)血清型分離株進(jìn)化速度較快,變異活躍,存在多條傳播鏈的共同流行,環(huán)境監(jiān)測(cè)與病例監(jiān)測(cè)優(yōu)勢(shì)株之間存在一定的遺傳進(jìn)化關(guān)系。6環(huán)境監(jiān)測(cè)對(duì)EV具有較高的敏感性,能夠獲得外環(huán)境中EV的流行情況和時(shí)間循環(huán)模式,也可以作為AFP監(jiān)測(cè)系統(tǒng)之外評(píng)估人群中PV流行的一種補(bǔ)充手段,為預(yù)防控制相關(guān)疾病提供科學(xué)依據(jù)。
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    • 簡(jiǎn)介:我國(guó)部分地區(qū)病毒性腦炎的病原學(xué)檢測(cè)背景病毒性腦炎是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病,不但癥狀嚴(yán)重、病死率高,還可造成嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)130余種病毒可以引起病毒性腦炎,各國(guó)病毒性腦炎的病原分布情況各不相同。由于病毒性腦炎不屬于我國(guó)的法定傳染病并缺少系統(tǒng)的監(jiān)測(cè),我國(guó)病毒性腦炎的病原種類及其分布特征尚不清晰。目的初步了解我國(guó)病毒性腦炎的病原種類及其分布特征,為我國(guó)病毒性腦炎的監(jiān)測(cè)和預(yù)防控制提供理論依據(jù)。方法收集到771例臨床診斷為病毒性腦炎病人的血清和腦脊液標(biāo)本。病例來(lái)自我國(guó)乙腦高發(fā)區(qū)的河南475例、貴州89例、四川31例、云南7例和低發(fā)區(qū)的甘肅139例、山西30例。病人年齡在4天到67歲之間,其中15歲者占488﹪,610歲者占308﹪。男女比例為141。629例816﹪病例的標(biāo)本采集時(shí)間為7、8、9三個(gè)月,主要集中在7、8月732﹪。標(biāo)本儲(chǔ)存在20℃或70℃條件下,在冷凍條件下從各地運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。用ELISA方法首先對(duì)所有標(biāo)本檢測(cè)乙腦病毒IGM抗體,然后對(duì)乙腦IGM抗體陰性的所有血清標(biāo)本檢測(cè)7種病毒IGM抗體腸道病毒柯薩奇病毒和??刹《?、單純皰疹病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、水痘帶狀皰疹病毒、EB病毒、巨細(xì)胞病毒。此外,用PCR方法對(duì)54例病人腦脊液標(biāo)本檢測(cè)腸道病毒、版納病毒和遼寧病毒的基因。結(jié)果經(jīng)血清學(xué)檢測(cè),771例病人中的567例735﹪檢測(cè)出病毒特異性IGM抗體,其中乙腦高發(fā)區(qū)的602例中檢測(cè)出陽(yáng)性病例496例824﹪,496602,乙腦低發(fā)區(qū)的169例檢測(cè)出71例420﹪,71169。乙腦高發(fā)區(qū)的病原順序?yàn)橐夷X病毒566﹪,341602、腸道病毒95﹪,57602、腮腺炎病毒88﹪,53602、單純皰疹病毒60﹪,36602、EB病毒05﹪,3602、麻疹病毒03﹪,2602、水痘帶狀皰疹病毒03﹪,2602、巨細(xì)胞病毒03﹪,2602,乙腦低發(fā)區(qū)的病原順序?yàn)槿傺撞《?72﹪,29169、乙腦病毒124﹪,21169、腸道病毒65﹪,11169、單純皰疹病毒47﹪,8169、麻疹病毒06﹪,1169、水痘帶狀皰疹病毒06﹪,1169。經(jīng)分子生物學(xué)檢測(cè),在54例腦脊液中檢測(cè)到8例腸道病毒基因陽(yáng)性標(biāo)本,未檢測(cè)到版納病毒與遼寧病毒基因陽(yáng)性標(biāo)本。結(jié)論本研究結(jié)果表明,乙腦是我國(guó)最重要的病毒性腦炎;腮腺炎病毒是乙腦低發(fā)區(qū)最常見的病毒性腦炎病原,腸道病毒和單純皰疹病毒也是我國(guó)重要的病毒性腦炎病原。本研究是我國(guó)近年來(lái)開展的的較大范圍的病毒性腦炎標(biāo)本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),研究結(jié)果為我國(guó)病毒性腦炎的監(jiān)測(cè)和預(yù)防控制提供了重要的試驗(yàn)依據(jù)。
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    • 簡(jiǎn)介:目的研究我國(guó)HBSAG陽(yáng)性獻(xiàn)血者感染的HBV病毒的基因型,亞型,血清型的分布及重要基因區(qū)域的突變特征;分析獻(xiàn)血者中HBV基因型,亞型,血清型與獻(xiàn)血者HBV血清學(xué)特征及病毒學(xué)特征的關(guān)系;研究HBSAG陰性HBVDNA檢測(cè)陽(yáng)性獻(xiàn)血者感染的HBV病毒的基因型,亞型,血清型,分析其序列變異與HBSAG檢測(cè)陰性的可能關(guān)系。方法1從20082010年五家合作血液中心(血站)(新疆烏魯木齊血液中心,洛陽(yáng)血站,綿陽(yáng)血站,云南昆明血液中心,柳州血液中心)HBSAG確證陽(yáng)性獻(xiàn)血者標(biāo)本中隨機(jī)選取245份樣本進(jìn)行研究。2S區(qū)擴(kuò)增測(cè)序結(jié)合多對(duì)型特異性引物巢式PCR法分析HBV基因型,通過(guò)S區(qū)序列推導(dǎo)HBV血清型,通過(guò)PRESS區(qū)擴(kuò)增測(cè)序或全基因組擴(kuò)增測(cè)序分析HBV基因亞型。3擴(kuò)增PRECBCP區(qū),用CLUSTALX將PRECBCP區(qū)測(cè)序結(jié)果和PRESS區(qū)擴(kuò)增結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)株序列進(jìn)行比對(duì),分析是否存在PRES區(qū)和PRECBCP區(qū)重要位點(diǎn)的突變;將測(cè)序結(jié)果翻譯成氨基酸后與標(biāo)準(zhǔn)株的氨基酸序列比對(duì),分析是否存在S區(qū)和逆轉(zhuǎn)錄酶RT編碼區(qū)突變。4用SPSS110統(tǒng)計(jì)軟件分析各地HBV血清型,基因型,基因亞型的分布,比較獻(xiàn)血者中HBV基因型和亞型分布與慢性乙型肝炎患者的區(qū)別,分析HBV血清型,基因型,基因亞型與人口特征,病毒學(xué)特征和血清學(xué)特征的關(guān)系,比較PRESS區(qū)和PRECBCP區(qū)變異的地理分布,人口特征分布,基因型和亞型分布以及其與病毒學(xué)特征和血清學(xué)特征的關(guān)系。組間均數(shù)比較用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn),率的比較用X2檢驗(yàn)。5擴(kuò)增8份HBSAG陰性HBVDNA檢測(cè)陽(yáng)性樣本的HBVPRESS區(qū)和PRECBCP區(qū),分析其基因型、亞型和血清型,分析成功測(cè)序樣本的PRES區(qū),S區(qū)和PRECBCP區(qū)序列變異,分析其與HBSAG檢測(cè)陰性的關(guān)系。結(jié)果1烏魯木齊,洛陽(yáng),綿陽(yáng),昆明,柳州五地獻(xiàn)血者感染的HBV病毒的主要基因型為B型和C型,B型流行率高于C型,未見EH型;基因亞型依次為B2,C2,D1,A1血清型依次為ADW,ADR,AYW在昆明獻(xiàn)血者中發(fā)現(xiàn)了B基因型的一種新亞型B9五地獻(xiàn)血者感染的HBV中所有的A型和絕大多數(shù)B型為ADW血清型,絕大多數(shù)C型為ADR血清型。2C型和C2亞型中的HBEAG陽(yáng)性率分別顯著高于B型和B2亞型中的HBEAG陽(yáng)性率。317%的HBSAG陽(yáng)性獻(xiàn)血者樣本中存在主要疏水區(qū)(MAJHYHILICREGION,MHR)區(qū)突變,突變率低于其它國(guó)家報(bào)道的數(shù)據(jù)獻(xiàn)血者感染的HBV病毒B基因型中MHR區(qū)的突變率高于C基因型;PRES區(qū)發(fā)生缺失的較少,且所有的D基因型樣本中均未發(fā)現(xiàn)D基因型特有的PRES區(qū)33個(gè)核苷酸的缺失;C型HBV中PRES區(qū)的突變率高于B型;五地獻(xiàn)血者中PRECBCP區(qū)變異樣本的HBEAG陽(yáng)性率顯著低于無(wú)該區(qū)突變樣本,C型中A1762TG1764A朕合突變率高于B型,C2亞型高于B2亞型,G1896A突變?cè)贐型中發(fā)生率高于C型和D型,A型中未發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)突變;五地獻(xiàn)血者中逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)突變位點(diǎn)主要與阿德福韋酯和拉米夫定耐藥有關(guān),未發(fā)現(xiàn)最典型的YMDD拉米夫定突變。4我國(guó)獻(xiàn)血者中HBSAGHBVDNA的獻(xiàn)血者主要為隱匿性感染,小部分為窗口期感染;我國(guó)五地獻(xiàn)血者HBV隱匿性感染基因型主要為C型;HBV隱匿性感染可能與PRES區(qū)缺失或插入及MHR區(qū)氨基酸突變有關(guān),HBEAG檢測(cè)陰性可能與PRECBCP區(qū)核苷酸突變有關(guān)。結(jié)論1S區(qū)擴(kuò)增測(cè)序結(jié)合多對(duì)型特異性引物巢式PCR法可以彌補(bǔ)單獨(dú)測(cè)序法分型不能鑒別混合基因型感染的缺陷,是HBV分型的較好方法。2我國(guó)獻(xiàn)血者中感染的HBV病毒的主要基因型為B型和C型,B型高于C型,且具有流行率增高的趨勢(shì),C型獻(xiàn)血者中HBV復(fù)制活性高于B型。3獻(xiàn)血者感染的C型HBV在PRES區(qū)的突變率和A1762TG1764A聯(lián)合突變率高于B型,B基因型中MHR區(qū)的突變率和G1896A突變率高于C基因型,A1762TG1764A聯(lián)合突變及G1896A突變與HBEAG檢測(cè)陰性有關(guān)。4HBV隱匿性感染是威脅輸血安全的的一個(gè)重要因素,隱匿性感染的產(chǎn)生可能與PRES區(qū)及MHR區(qū)突變有關(guān)。
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    • 簡(jiǎn)介:慢性丙型肝炎是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一。免疫應(yīng)答在丙型肝炎的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。輔助性T淋巴細(xì)胞TH12細(xì)胞失平衡在丙型肝炎發(fā)病中有重要作用。本文檢測(cè)了64份慢性HCV感染者血清TH12相關(guān)細(xì)胞因子及其動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果肝炎和肝硬化組患者IL2,IFNΓ無(wú)明顯差別;肝硬化組患者IL4,IL10表達(dá)增強(qiáng);TNFΑ表達(dá)減弱。對(duì)6名患者動(dòng)態(tài)血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IL4,IL10有逐漸增高趨勢(shì),IL2,TNFΑ,IFNΓ表達(dá)有下降趨勢(shì);急性發(fā)作時(shí),IL2,TNFΑ,IFNΓ增高;IL4,IL10維持在一定水平;1名患者接受PEGIFNΑ2A治療后,血清IL2,TNFΑ,IFNΓ增高,IL4,IL10下降。提示慢性HCV感染者外周血TH1TH2細(xì)胞失平衡,以TH2細(xì)胞因子為主,干擾素治療有利于恢復(fù)TH1TH2失衡。通過(guò)調(diào)節(jié)TH相關(guān)細(xì)胞因子糾正TH1TH2失平衡可能成為慢性HCV感染新的治療思路為了解慢性HCV感染者肝臟內(nèi)免疫狀態(tài),對(duì)30例慢性HCV感染者的肝穿標(biāo)本進(jìn)行了研究,用原位雜交法檢測(cè)HCVRNA表達(dá),發(fā)現(xiàn)HCVRNA陽(yáng)性表達(dá)在肝組織內(nèi)呈散在分布,周圍可伴隨單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)。HCVRNA復(fù)制活躍可加重肝臟損傷。用免疫組化方法檢測(cè)肝臟中IFNΓ、TNFΑ、IL10的表達(dá)。觀察到IFNΓ、TNFΑ、IL10在肝內(nèi)主要表達(dá)于淋巴細(xì)胞和竇內(nèi)皮細(xì)胞等,另外炎癥、壞死、脂肪變性周圍的部分肝細(xì)胞也可見IFNΓ、TNFΑ、IL10表達(dá)。慢性HCV感染者肝組織中的IFNΓ、TNFΑ、IL10較正常肝組織增強(qiáng)。隨炎癥程度的增加IL10、TNFΑ表達(dá)逐漸增強(qiáng),IFNΓ表達(dá)無(wú)明顯增加。TNFΑ與IL10表達(dá)有較高相關(guān)性,TNFΑ和IL10與IFNΓ表達(dá)有相關(guān)性,但相關(guān)系數(shù)較低。TNFΑ、IL10與HCVRNA表達(dá)相關(guān)性較高,IFNΓ與HCVRNA相關(guān)性稍低。提示慢性HCV感染者肝內(nèi)促炎因子TNFΑ和抗炎因子IL10表達(dá)均增強(qiáng),可能是HCV感染慢性化的原因之一。用免疫組化法檢測(cè)了慢性HCV感染者肝臟內(nèi)CD4、CD8、FOXP3T細(xì)胞的分布特點(diǎn),觀察到CD4、CD8、FOXP3T淋巴細(xì)胞主要分布于匯管區(qū)和部分膽管增生區(qū),肝小葉內(nèi)也可見散在分布。CD4、CD8、FOXP3T陽(yáng)性細(xì)胞分布部位與HCVRNA陽(yáng)性部位較為一致。CDBT淋巴細(xì)胞在肝小葉內(nèi)炎性壞死灶及竇周炎部位增多明顯。慢性HCV感染者肝臟FOXP3表達(dá)增強(qiáng),隨炎癥程度增加,F(xiàn)OXP3表達(dá)逐漸增強(qiáng),由于FOXP3特異性地表達(dá)于TREG,推測(cè)TREG細(xì)胞可能在HCV感染慢性化中發(fā)揮重要作用。慢性HCV感染者患者肝內(nèi)存在抑制HCV特異性CTL功能的機(jī)制如調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞、IL10等,可能是HCV慢性感染持續(xù)存在的重要原因之一。隨著慢性HCV免疫學(xué)研究的進(jìn)一步深入,將為臨床治療和預(yù)防HCV感染提供新的思路和方法。
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    • 簡(jiǎn)介:博士學(xué)位論文漢灘病毒多組分新型重組腺病毒病毒多組分新型重組腺病毒的制備及免疫學(xué)特性研究的制備及免疫學(xué)特性研究李凱培養(yǎng)類別全日制學(xué)位類型學(xué)術(shù)學(xué)位一級(jí)學(xué)科專業(yè)類生物學(xué)二級(jí)學(xué)科專業(yè)微生物學(xué)研究方向腎綜合征出血熱基因工程疫苗指導(dǎo)教師徐志凱教授培養(yǎng)單位基礎(chǔ)部二O一三年五月第四軍醫(yī)大學(xué)THEFOURTHMILITARYMEDICALUNIVERSITY分類號(hào)R37332UDC60661密級(jí)公開博士學(xué)位論文目錄縮略語(yǔ)表縮略語(yǔ)表1中文摘要中文摘要4ABSTRACT9前言15文獻(xiàn)回顧文獻(xiàn)回顧18正文30第一部分30含漢灘病毒結(jié)構(gòu)基因雙順反子及HSP70C的重組腺病毒的制備及免疫學(xué)特性研究301材料3011菌種、質(zhì)粒載體、引物及病毒株3012動(dòng)物及細(xì)胞3113工具酶3114抗體及HFRS患者血清3115其他主要試劑3216常用培養(yǎng)液(基)及緩沖液3317主要儀器與器材342實(shí)驗(yàn)方法3421含HTNV結(jié)構(gòu)基因、IRES及HSP70C的腺病毒重組轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建3422重組腺病毒DNA的構(gòu)建及鑒定3623重組腺病毒的包裝3724重組腺病毒的單斑純化及大量擴(kuò)增3825重組腺病毒滴度的測(cè)定3826重組腺病毒表達(dá)產(chǎn)物(目的蛋白)的鑒定3927重組腺病毒免疫小鼠及其免疫應(yīng)答的檢測(cè)3928HTNV對(duì)免疫小鼠的感染實(shí)驗(yàn)4429統(tǒng)計(jì)分析453結(jié)果45
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    • 簡(jiǎn)介:病毒樣顆粒中衣殼粒分子能學(xué)的病毒樣顆粒中衣殼粒分子能學(xué)的分子動(dòng)力學(xué)解析分子動(dòng)力學(xué)解析MOLECULARENERGETICSINTHECAPSOMEREOFVIRUSLIKEPARTICLEREVEALEDBYMOLECULARDYNAMICSSIMULATIONS學(xué)科專業(yè)生物化工研究生唐榮宏指導(dǎo)教師白姝副教授天津大學(xué)化工學(xué)院二零一二年六月摘要病毒樣顆粒(VIRUSLIKEPARTICLE,VLP)是由病毒衣殼結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)自組裝而形成的空心納米顆粒,在疫苗、基因治療、藥物載體和材料科學(xué)等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。然而病毒樣顆粒自組裝效率不高且結(jié)構(gòu)調(diào)控難度大,限制其設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和應(yīng)用。因此,本文通過(guò)全原子模型的分子動(dòng)力學(xué)模擬結(jié)合分子力學(xué)泊松玻爾茲曼方程表面積計(jì)算(MOLECULARMECHANICSPOISSONBOLTZMANNSURFACEAREA,MMPBSA)自由能分解,展示鼠多瘤病毒樣顆粒自組裝的初始階段,考察此過(guò)程的能量變化,尤其關(guān)注衣殼粒的結(jié)合自由能以研究衣殼粒內(nèi)VP1結(jié)合的調(diào)控因素,從而為自組裝過(guò)程的控制和優(yōu)化提供理論基礎(chǔ)。本文首先根據(jù)自組裝實(shí)驗(yàn)條件構(gòu)建鼠多瘤病毒衣殼粒以及模擬體系的全原子模型,考慮純水、穩(wěn)定溶液、組裝溶液、聚集溶液等四種溶液條件。然后,利用分子動(dòng)力學(xué)模擬和MMPBSA自由能分解方法計(jì)算不同溶液條件下的總結(jié)合自由能,考察離子強(qiáng)度、二硫鍵以及抗原片段插入對(duì)衣殼粒穩(wěn)定性的影響。最后,解析VP1結(jié)合的熱點(diǎn)殘基,闡釋衣殼粒內(nèi)VP1之間相互結(jié)合的分子機(jī)理。模擬結(jié)果表明,低離子強(qiáng)度和衣殼粒內(nèi)二硫鍵對(duì)衣殼粒的穩(wěn)定性起促進(jìn)作用,而抗原片段插入則不利于衣殼粒的穩(wěn)定。MMPBSA自由能分解的結(jié)果表明,疏水相互作用對(duì)衣殼粒VP1之間的結(jié)合有利,而靜電作用對(duì)其結(jié)合不利。確定不同溶液條件下衣殼粒單體VP1之間結(jié)合的關(guān)鍵殘基,包括S132、L136、D137、H139、E138、D180、E225、H228、E235、Y239、G246、T247、F255、N257和K307等。本文的研究結(jié)果初步展示病毒樣顆粒的自組裝微觀過(guò)程,闡釋病毒樣顆粒結(jié)構(gòu)蛋白的功能和相互作用,為病毒樣顆粒疫苗設(shè)計(jì)以及自組裝過(guò)程調(diào)控奠定了理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞病毒樣顆粒;自組裝;分子動(dòng)力學(xué)模擬;結(jié)合自由能;關(guān)鍵殘基
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    • 簡(jiǎn)介:安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)學(xué)位論文白血病患者中乙型肝炎病毒感染及隱匿性乙型肝炎病毒感染的分子流行病學(xué)調(diào)查MOLECULAREPIDEMIOLOGICALANALYSISOFHBVINFECTIONANDOCCULTHEPATITISBVIRUSINFECTIONINLEUKEMIAPATIENTS孫丙虎孫丙虎指導(dǎo)教師姓名李旭教授安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院張振華副教授安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)(傳染?。┨峤徽撐娜掌?01303論文答辯日期201305學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)201306答辯委員會(huì)主席趙守松教授評(píng)閱人邢益平鄒桂舟2013年5月安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版,有權(quán)允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱,有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。愿意將本人的學(xué)位論文提交中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)中全文發(fā)表,并可以以電子、網(wǎng)絡(luò)及其他數(shù)字媒體形式公開出版,并同意編入CNKI中國(guó)知識(shí)資源總庫(kù),在中國(guó)博碩士學(xué)位論文評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期日期
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    • 簡(jiǎn)介:HBV感染是全球性健康問題,我國(guó)更是一個(gè)HBV高感染地區(qū)。HBV屬嗜肝DNA病毒科,基因組長(zhǎng)約32KB,為部分雙鏈環(huán)狀DNA,分為A~H8個(gè)基因型,各基因型又可分為不同基因亞型。各基因型具有不同的地理分布,亞洲感染者主要感染的是基因型B和C。HBV前SSPRESS區(qū)編碼大、中、小3種表面蛋白。盡管HBV是DNA病毒,但它特有的一些特征使它的突變幾率遠(yuǎn)遠(yuǎn)比別的DNA病毒高。在HBV’感染者體內(nèi),突變株往往與野生型病毒一起成為混合病毒群。HBV的基因變異對(duì)分子生物學(xué)和免疫學(xué)分析的敏感性提出了挑戰(zhàn)。PRESS基因突變給乙型肝炎的實(shí)驗(yàn)診斷、治療及判斷預(yù)后帶來(lái)許多臨床問題。診斷HBV感染的免疫學(xué)試驗(yàn)是檢測(cè)一系列HBV免疫學(xué)標(biāo)志物。病毒基因的變異所致的一系列病毒表型的改變,使人們對(duì)免疫學(xué)診斷提出質(zhì)疑。在我們?nèi)粘5膶?shí)驗(yàn)診斷工作中經(jīng)常會(huì)遇到異常的HBV血清學(xué)診斷模式,包括HBSAG和HBSAB同時(shí)存在,乙肝五項(xiàng)中僅HBCAB強(qiáng)陽(yáng)性,乙肝五項(xiàng)中僅HBEAB強(qiáng)陽(yáng)性,HBSAG陰性但HBEAG陽(yáng)性,不同診斷試劑診斷HBSAG結(jié)果不一致。這些血清學(xué)診斷模式的異??赡芘cHBVPRESS基因突變有關(guān)。常用的血清學(xué)診斷方法在遇到影響抗原決定簇構(gòu)象、抗原不表達(dá)或分泌缺陷等基因突變時(shí),會(huì)出現(xiàn)檢測(cè)失敗。PRESS基因變異可導(dǎo)致免疫逃避、隱匿性HBV感染,血清學(xué)檢測(cè)時(shí)表現(xiàn)為HBSAG和HBSAB同時(shí)存在或HBSAG陰性。許多年來(lái),人們都以病人血清中HBSAG作為HBV感染的特征,HBVPRESS基因突變對(duì)HBSAG檢測(cè)和其他HBV血清學(xué)標(biāo)記物的影響及其相關(guān)性需要進(jìn)一步研究。HBVPRES突變和“A”決定簇內(nèi)部的突變對(duì)于免疫逃避和隱匿性感染的影響在不同國(guó)家和地區(qū)的研究結(jié)論并不相同。通常認(rèn)為“A”決定簇內(nèi)部的突變,尤其是G145R突變是免疫逃避的主要突變位點(diǎn)。有關(guān)東亞地區(qū)的HBVPRESS突變數(shù)據(jù)采集主要來(lái)自于日本、中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)、韓國(guó),這提示在中國(guó)PRES和S區(qū)基因突變研究數(shù)據(jù)不多,本地區(qū)即中國(guó)大陸PRESS突變發(fā)生位點(diǎn)及PRESS突變與HBV血清學(xué)異常檢測(cè)模式的關(guān)系尚需研究。本研究旨在通過(guò)對(duì)各種異常HBV血清學(xué)檢測(cè)模式的標(biāo)本進(jìn)行S基因分型和PRESS區(qū)突變分析,提供本地區(qū)HBV基因型和突變株流行病學(xué)數(shù)據(jù),探討PRESS基因突變與各種異常血清學(xué)診斷模式的關(guān)系,分析PRESS基因突變對(duì)實(shí)驗(yàn)診斷結(jié)果的影響和造成免疫逃避和隱匿性HBV感染的各種因素。本研究收集了臨床五種異常HBV血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)本,并以具有常見血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)本作為對(duì)照組。采用DNA定量檢測(cè)方法篩選HBVDNA陽(yáng)性的標(biāo)本。應(yīng)用病毒核酸提取效率較高的方法提取收集血清的HBVDNA。設(shè)計(jì)特異性引物,通過(guò)PCR擴(kuò)增得到各模板中HIBVPRESS擴(kuò)增產(chǎn)物,并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化。通過(guò)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序或克隆測(cè)序的方法得到各標(biāo)本中HBVPRESS基因序列,進(jìn)而進(jìn)行S基因分型和PRESS區(qū)缺失突變和點(diǎn)突變分析。采用非參數(shù)假設(shè)檢驗(yàn)方法WILCOXRANKSUMTEST進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,討論P(yáng)RESS區(qū)突變與各種異常血清學(xué)檢測(cè)模式的關(guān)系。根據(jù)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和核酸檢測(cè)結(jié)果,實(shí)驗(yàn)標(biāo)本可被分為三部分進(jìn)行分析。第一部分為HBSAG和HBSAB檢測(cè)同時(shí)陽(yáng)性的標(biāo)本。測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)這些標(biāo)本中存在PRES缺失突變、PRES2起始密碼子突變和“A’決定簇中少數(shù)位點(diǎn)的點(diǎn)突變,其中2例標(biāo)本出現(xiàn)G145RA突變。與對(duì)照組HBSAG陽(yáng)性而HBSAB陰性的標(biāo)本>比較發(fā)現(xiàn)PRES缺失突變與HBSAG和HBSAB同時(shí)存在具有一定統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性P0024,而PRES2起始密碼子突變和“A”決定簇點(diǎn)突變與這種檢測(cè)模式不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性P0571,P0408。PRES缺失突變主要發(fā)生在PRES13’端和PRES25’端,3例標(biāo)本中PRES13’端大片段缺失突變株與野生型共同存在。PRES缺失突變通過(guò)影響HBV多個(gè)功能位點(diǎn)從而形成體內(nèi)的免疫逃避,造成HBSAG和HBSAB檢測(cè)同時(shí)陽(yáng)性。第二部分為HBSAG陰性但HBVDNA陽(yáng)性的標(biāo)本,其中包括HBSAG陰性但HBEAG陽(yáng)性的檢測(cè)模式、乙肝五項(xiàng)中僅HBCAB強(qiáng)陽(yáng)性或僅HBEAB強(qiáng)陽(yáng)性的檢測(cè)模式。僅HBCAB強(qiáng)陽(yáng)性或僅HBEAB強(qiáng)陽(yáng)性的檢測(cè)模式中發(fā)現(xiàn)HBV隱匿性感染的存在,比率分別為16%和33%。測(cè)序結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)PRES缺失突變、PRES2起始密碼子突變和“A”決定簇中的點(diǎn)突變與HBSAG血清學(xué)檢測(cè)失敗均有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性P0033,P0033,P0033。“A”決定簇的點(diǎn)突變中2例標(biāo)本出現(xiàn)G145RA突變。突變株存在多重突變和混合感染,但結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)造成HBSAG漏檢的原因不僅僅是PRESS突變,循環(huán)中HBSAG水平低于檢測(cè)限也是另外一個(gè)重要的漏檢原因。第三部分為不同診斷試劑診斷HBSAG結(jié)果不一致的標(biāo)本。核酸檢測(cè)均為陰性,未發(fā)現(xiàn)PRESS基因突變。這一部分標(biāo)本核酸檢測(cè)的陰性結(jié)果可能與標(biāo)本選擇的局限性有關(guān)。本研究結(jié)果表明由于HBV在體內(nèi)長(zhǎng)期存在和免疫壓力下,慢性HBV感染者可以通過(guò)PRESS基因突變導(dǎo)致免疫逃避,形成HBSAG和HBSAB同時(shí)陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果,PRES缺失突變與這種檢測(cè)模式具有相關(guān)性。文獻(xiàn)報(bào)道“A”決定簇點(diǎn)突變與這種模式具有相關(guān)性,而在本研究中并未得到相同結(jié)論。臨床免疫檢測(cè)中HBSAG漏檢的原因可能是由于PRESS基因突變引起抗原決定簇構(gòu)象變化或影響抗原的分泌表達(dá)而造成的,本研究表明PRES缺失突變、PRES2起始密碼子突變和“A”決定簇中的點(diǎn)突變均與HBSAG漏檢具有相關(guān)性,但循環(huán)中HBSAG水平低于檢測(cè)限也是另外一個(gè)重要的原因。本研究中發(fā)現(xiàn)的“A”決定簇點(diǎn)突變主要在以下位點(diǎn)IT126SNL、Q129NRPH、D144EG、G145RA、G130N、T131N和M133TI。在異常血清學(xué)檢測(cè)模式中,PRESS突變往往表現(xiàn)為多重變異以及不同突變株或突變株與野生型的混合感染。與報(bào)道相比,作為免疫逃避主要突變位點(diǎn)的G145R突變并不常見。關(guān)于HBVPRESS基因突變與免疫逃避的關(guān)系,目前不同的研究有不同的結(jié)論,這可能與不同地域HBV流行株變異有關(guān)。換言之,免疫壓力下不同基因型或基因亞型可能產(chǎn)生不同類型的突變。本研究中PRES缺失突變和PRES2起始密碼子突變?nèi)堪l(fā)生在基因型C中??傊惓Q鍖W(xué)檢測(cè)模式往往與HBVPRESS基因突變相關(guān),DNA檢測(cè)和突變株檢測(cè)對(duì)于這些標(biāo)本尤為重要。PRESS基因突變可造成HBSAG血清學(xué)漏檢,HBV低水平攜帶者的低抗原量造成的漏檢同樣值得注意。HBV隱匿性感染不僅可以造成臨床診斷失誤,更為嚴(yán)重的是獻(xiàn)血員HBV隱匿性感染造成血液的污染。提高HBSAG突變株和低抗原量的檢測(cè)能力尤為重要。
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    • 簡(jiǎn)介:背景病毒性胃腸炎是世界各國(guó)高發(fā)疾病之一,尤其在發(fā)展中國(guó)家因胃腸炎疾病死亡的兒童人數(shù)高于相應(yīng)的發(fā)達(dá)國(guó)家。隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展和腹瀉研究的深入,病毒性腹瀉在急性非細(xì)菌性腹瀉中顯得越來(lái)越重要,占60%。引起嬰幼兒腹瀉的常見病原體以輪狀病毒ROTAVIRUS,RV為主,之后相繼發(fā)現(xiàn)諾如病毒NOVIRUS,NOV、扎幌病毒SAPOVIRUS,SAV、腸道腺病毒DENOVIRUSES,ADV和星狀病毒ASTROVIRU,ASTV也是引起急性腹瀉的主要病因。據(jù)統(tǒng)計(jì),在世界范圍內(nèi)由A組輪狀病毒起因的腹瀉每年大約有111億,其感染對(duì)象主要為5歲以下兒童,在我國(guó)每年約有1~2萬(wàn)名5歲內(nèi)兒童死于輪狀病毒腹瀉。杯狀病毒在世界范圍內(nèi)流行僅次于輪狀病毒,這與水源性和食源性胃腸炎的暴發(fā)和散發(fā)有著密切的關(guān)系,其自身毒性較弱,且發(fā)病過(guò)程具有自限性,但傳染性較強(qiáng),如不能及時(shí)治療可導(dǎo)致患者死亡。腸道腺病毒引起的腹瀉呈全球分布,多以區(qū)域性流行為主,少見暴發(fā)流行報(bào)道。由腸道腺病毒引起的腹瀉全年均可發(fā)生,部分地區(qū)有季節(jié)性升高現(xiàn)象,以秋冬季常見,AD41型為流行優(yōu)勢(shì)株,部分地區(qū)以AD40為主,也可見非腸道腺病毒引起的腹瀉報(bào)道。星狀病毒感染在世界范圍內(nèi)廣泛存在,易感人群以2歲兒童為主,在患兒腹瀉糞便中檢出率為06%~26%,其既可引起醫(yī)源性感染和散發(fā)流行,也有暴發(fā)報(bào)道,有研究報(bào)道它也是成人腹瀉散發(fā)流行的病原體之一。國(guó)內(nèi)外近幾年對(duì)病毒性腹瀉的流行病學(xué)研究已廣泛開展,但多數(shù)研究主要針對(duì)常住人群5歲內(nèi)兒童進(jìn)行研究,針對(duì)成人和城鄉(xiāng)結(jié)合部人群腹瀉的報(bào)道較少。伴隨改革開放急促的步伐,經(jīng)濟(jì)、醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)也在迅猛發(fā)展,但農(nóng)村、城鄉(xiāng)結(jié)合部等經(jīng)濟(jì)條件卻相對(duì)落后,由于人員構(gòu)成復(fù)雜流動(dòng)性大、知識(shí)水平低、經(jīng)濟(jì)條件差等問題,整體上影響了城市流動(dòng)人口的衛(wèi)生保健服務(wù)狀況,腹瀉病的發(fā)病率不容樂觀,所以本研究前瞻性地收集兩家哨點(diǎn)醫(yī)院(其一為城區(qū)人群,其二為城鄉(xiāng)結(jié)合部人群)2011年6月至2012年5月的兒童腹瀉患者和18歲以上成人腹瀉標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)病毒研究,以便系統(tǒng)的掌握廣州市5歲以下兒童和18歲以上成人病毒性腹瀉的流行特征和流行優(yōu)勢(shì)株的變化,為以后制定病毒性腹瀉的預(yù)防控制策略提供科學(xué)依據(jù),也為將來(lái)研制開發(fā)病毒疫苗提供全面系統(tǒng)的背景資料。研究目的1了解廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院2011年6月~2012年5月5歲內(nèi)兒童和18歲以上成人散發(fā)病毒性腹瀉中RV、NOV、ADV、ASTV和SAV感染狀況及流行病學(xué)特征,完善我國(guó)病毒性腹瀉的流行病學(xué)基礎(chǔ)資料2了解該地區(qū)5歲內(nèi)兒童和18歲以上成人病毒性腹瀉中NOV、ADV、ASTV和SAV基因型別,探討4種病毒的流行優(yōu)勢(shì)毒株,明確各病毒分子特征及基因型分布情況3為廣州地區(qū)兒童和成人病毒感染性腹瀉的研究提供豐富的背景資料。方法1標(biāo)本收集收集2011年6月~2012年5月期間在廣州市白云區(qū)某社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心和南方醫(yī)院第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科就診的年齡在5歲以下的360例患兒標(biāo)本和年齡在18歲以上的127例成人腹瀉患者糞便標(biāo)本、人口學(xué)資料及流行病學(xué)資料。2標(biāo)本處理方法每份糞便標(biāo)本取5~10G或5~10ML,加入PBS,震蕩后制成10%的懸液,分裝三管后80℃保存?zhèn)溆谩?標(biāo)本病毒檢測(cè)方法使用A群輪狀病毒膠體金法檢測(cè)糞便中的輪狀病毒后對(duì)符合要求的標(biāo)本進(jìn)行核酸提取,用引物JV12YJV13I、AD1AD2、MON269MON270和SLV5317SLV5749分別檢測(cè)NOV、ADV、ASTV和SAV,對(duì)純化后的PCR陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,測(cè)序結(jié)果應(yīng)用BLAST在GENBANK上尋找各陽(yáng)性株的同源序列,應(yīng)用CLUSTALW進(jìn)行多序列對(duì)比分析和MEGA50構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹,分析NOV、SAV、ADV和ASTV的基因型別,判斷NOV、ADV、ASTV和SAV的流行優(yōu)勢(shì)毒株。4統(tǒng)計(jì)分析方法數(shù)據(jù)管理采用EPIDATA21進(jìn)行雙份錄入,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS130對(duì)收集的患者資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,分析廣州地區(qū)病毒性腹瀉的流行病學(xué)特征,檢驗(yàn)水準(zhǔn)Α為005。結(jié)果12011年6月2012年5月共收集廣州市兩家哨點(diǎn)醫(yī)院5歲內(nèi)患兒糞便標(biāo)本和問卷共360份?;純褐饕O(jiān)護(hù)人文化程度以大專及以上最多530%188355,職業(yè)以在家及待業(yè)為主202%71351。2共收集18歲以上符合要求的成人腹瀉患者糞便127份,成人患者中平均年齡為4191±1792?;颊呶幕潭纫源髮<耙陨险甲疃啵瑸?04%64127,文盲最少為08%1127,職業(yè)以辦公室白領(lǐng)占最多,為252%32127。3五歲內(nèi)兒童RV、NOV、ADV、SAV、ASTV的檢出率分別為30%108360、89%32360、75%27360、17%6360、25%9360,以輪狀病毒檢出最高?;旌细腥菊?%18360,以輪狀病毒混合感染為主。五種病毒檢出者主要集中在3歲內(nèi)兒童,輪狀病毒集中發(fā)病季節(jié)主要集中在911月,以10月高發(fā),札幌病毒以11月到12月為發(fā)病高峰,星狀病毒僅在1012月有檢出,這三種病毒散發(fā)主要集中在秋冬季,而諾如病毒發(fā)病高峰以6月最為集中,腺病毒的發(fā)病高峰在2011年以9月最高,2012年2月最高。4成人患者五種病毒的檢出率以諾如病毒檢測(cè)率最高,為87%11127,其次是輪狀病毒55%7127,腺病毒24%3127,札如病毒24%3127,星狀病毒08%1127。未見混合感染。病毒感染主要集中在60歲以上這個(gè)年齡組中占25%728。發(fā)病季節(jié)顯示輪狀病毒的流行期為12月次年2月份,諾如病毒的發(fā)病高峰在9月和12月,腺病毒、札幌病毒和星狀病毒檢出例數(shù)較少,還不能顯示季節(jié)分布特點(diǎn)。5序列分析結(jié)果360份兒童糞便標(biāo)本中檢出諾如病毒感染32株,測(cè)序分析,26株屬于GⅡ4型,其中3株屬于GⅡ42006A。3株屬于GⅡ13型,1株為GⅡ5,2株GⅡ6。檢出6株SAV,6株為都為GⅠ型,其中4株為GⅠ1型,2株屬于GⅠ2檢出ADV27例,其中AD41型18例,9例非腸道腺病毒中檢出2份AD1型,2份AD2型,1份AD7型,2份AD12型,2份AD31型而檢出9株ASTV均為HASTV1。6127份成人腹瀉標(biāo)本中檢出諾如病毒11株,其中8株屬于GⅡ4,1株GⅡB,1株GⅡ6,1株GⅠ1。腺病毒檢出3例均為AD41,星狀病毒1例陽(yáng)性為HAST1札幌病毒陽(yáng)性2例屬于GⅠ2,1例屬于GⅣ。結(jié)論1、病毒性腹瀉是引起嬰幼兒和成人腹瀉的重要病原,其中兒童以輪狀病毒為主,成人以諾如病毒為主,3歲以內(nèi)兒童和60歲以上老年人為感染高發(fā)人群,不同病毒引起的季節(jié)性高峰有所不同,故應(yīng)開展長(zhǎng)期、連續(xù)的的疾病監(jiān)測(cè)和病原學(xué)檢測(cè)2、NOVGⅡ4型是引起廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院5歲內(nèi)兒童和18歲以上成人散發(fā)腹瀉的流行優(yōu)勢(shì)株,其中3株屬于GⅡ42006A,而在我國(guó)很多地區(qū)均已檢測(cè)到2006B,對(duì)2006A檢出報(bào)道較少ADV引起腹瀉的流行優(yōu)勢(shì)株為AD41,同時(shí)也檢出了其他多個(gè)非腸道腺病毒的基因型別,但未檢出AD40型,表明AD41是廣州地區(qū)流行優(yōu)勢(shì)株,與國(guó)內(nèi)外ADV血清型變化趨勢(shì)相符ASTV在兒童和成人腹瀉中的流行優(yōu)勢(shì)株均為ASTV1,與我國(guó)國(guó)內(nèi)情況相同兒童SAV以GⅠ1為主,而成人以GⅠ2型為主。四種病毒的感染基因型別多樣,應(yīng)引起重視。
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