簡(jiǎn)介：Ⅲ哪㈨㈣咖1111I洲0Y3291090分類號(hào)85261學(xué)號(hào)2014807169南京蔑蚩戈學(xué)全EL制專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文華東地區(qū)類豬圓環(huán)病毒P1的分子流行病學(xué)調(diào)查及自然感染P1病毒仔豬的病例研究焦方方指導(dǎo)教師學(xué)位類別領(lǐng)域名稱研究方向答辯日期韭煊塾援何孔旺研究員獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士微生物與免疫學(xué)二。一六年五月原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其它個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者需親筆簽名巧萋，葛而訓(xùn)掃年月細(xì)日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密口，在年解密后適用本授權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬于不保密“請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√，，學(xué)位論文作者需親導(dǎo)師需親筆簽名斯彬年R月珈日加6年上月珈日

簡(jiǎn)介：目的分析19992014年江西省甲型病毒性肝炎的流行特征及變化趨勢(shì)，了解江西省重點(diǎn)地區(qū)甲肝疫苗接種率及甲肝疫苗強(qiáng)化免疫流行病學(xué)效果，研究其相關(guān)關(guān)系，探討科學(xué)有效的甲型病毒性肝炎防治的策略，客觀評(píng)價(jià)甲肝疫苗預(yù)防接種效果；為我省以及甲型病毒性肝炎重點(diǎn)地區(qū)科學(xué)防控甲型病毒性肝炎提供流行病學(xué)依據(jù)。方法1通過(guò)全國(guó)法定傳染病報(bào)告系統(tǒng)收集江西省甲型病毒性肝炎病例，通過(guò)歷年江西省統(tǒng)計(jì)局統(tǒng)計(jì)年鑒資料收集人口學(xué)資料，采用描述性流行病學(xué)方法對(duì)19992014年江西省甲型病毒性肝炎疫情進(jìn)行分析，使用SPSS180軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2、在2009年在于都縣、瑞金市、萬(wàn)安縣、袁州區(qū)、萬(wàn)載縣等5個(gè)縣（區(qū)、市）開(kāi)展甲肝滅活疫苗的群體性預(yù)防接種，對(duì)五縣（區(qū)、市）無(wú)甲肝患病史及無(wú)甲肝疫苗接種史的18月齡12歲兒童（1997年1月1日至2007年4月30日出生的兒童）免費(fèi)接種1劑次甲肝滅活疫苗。收集五縣（區(qū)、市）甲肝疫苗接種數(shù)據(jù)及甲型病毒性肝炎發(fā)病率，采用描述性流行病學(xué)方法對(duì)20032014年五縣（區(qū)、市）甲型病毒性肝炎接種率及疫情進(jìn)行分析，使用SPSS180軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果1江西省19992014年的甲型病毒性肝炎平均發(fā)病率為6730210萬(wàn)，發(fā)病率總體呈逐年下降趨勢(shì)（Χ230956867，P2江西省19992007年的甲型病毒性肝炎年均發(fā)病率為10717210萬(wàn)，高于20082014年的年均發(fā)病率1856810萬(wàn)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Χ2319997944，P3江西省20012014年的甲型病毒性肝炎累計(jì)發(fā)病無(wú)明顯的季節(jié)性，3～5月發(fā)病數(shù)相對(duì)較多。4江西省20052014年甲型病毒性肝炎年平均發(fā)病率前三位的是景德鎮(zhèn)市、宜春市、鷹潭市，年平均發(fā)病率最低的是上饒市，發(fā)病率存在地區(qū)差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Χ22820768，P5江西省甲型病毒性肝炎的發(fā)病率男性大于女性，男女發(fā)病性別比為2011，男女之間發(fā)病率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Χ21652242，P6自2008年將甲肝疫苗納入擴(kuò)大免疫規(guī)劃以來(lái)，于都縣、瑞金市、袁州區(qū)、萬(wàn)載縣、萬(wàn)安縣20082014年甲型病毒性肝炎年均發(fā)病率均低于接種甲肝疫苗前20032007年年均發(fā)病率，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P72009年于都縣、瑞金市、袁州區(qū)、萬(wàn)載縣實(shí)施甲肝疫苗群體性接種后，4個(gè)縣（區(qū)、市）20092010年甲型病毒性肝炎年均發(fā)病率均低于2008年年發(fā)病率，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。8于都縣、瑞金市、袁州區(qū)、萬(wàn)載縣20102014年發(fā)病率變化較小，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1江西省甲型病毒性肝炎發(fā)病總體呈逐年下降趨勢(shì)。兒童接種甲肝疫苗防控效果明顯，人群甲型病毒性肝炎免疫水平提高；但報(bào)告的甲型病毒性肝炎病例仍然集中于0～14歲年齡組，提示托幼兒童及中小學(xué)生仍是甲型病毒性肝炎防控的重點(diǎn)人群。農(nóng)民作為高發(fā)職業(yè)群體，今后要采取以預(yù)防為主的綜合措施，重點(diǎn)加強(qiáng)宣傳健康教育，進(jìn)一步降低其甲型病毒性肝炎發(fā)病率，保護(hù)勞動(dòng)力。2于都縣、瑞金市、袁州區(qū)、萬(wàn)載縣、萬(wàn)安縣將甲肝疫苗納入擴(kuò)大國(guó)家免疫規(guī)劃后，甲型病毒性肝炎發(fā)病率明顯下降。在發(fā)生自然災(zāi)害后，對(duì)受災(zāi)地區(qū)進(jìn)行甲肝疫苗群體性接種，有效的預(yù)防了甲型病毒性肝炎暴發(fā)，從而達(dá)到降低甲型病毒性肝炎的發(fā)病率。今后應(yīng)進(jìn)一步研究制定最佳免疫程序提高甲肝疫苗的接種率，減少甲型病毒性肝炎發(fā)病機(jī)率。

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簡(jiǎn)介：背景中東呼吸道綜合征冠狀病毒（DLEEASTRESPIRATYSYNDROME，MERSCOV）是人類新發(fā)冠狀病毒，首次被ZAKI小組從沙特阿拉伯一名患有呼吸道感染和腎功能衰竭的老年患者體內(nèi)分離出來(lái)，并于2012年9月確診。目前中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS）造成1952人感染，其中693例死亡，死亡率高達(dá)36，對(duì)人類生命和健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。MERS復(fù)制酶聚合體（REPLICASECOMPLEX，RC）的形成主要取決于木瓜樣蛋白酶（PAPAINLIKEPROTEASE，PLPRO）和3C樣蛋白酶（3CLIKEPROTEASE，3CLPRO），抑制這兩種蛋白酶的激活可有效阻斷病毒復(fù)制。冠狀病毒木瓜樣蛋白酶在宿主抗病毒天然免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中起重要作用，這是前期實(shí)驗(yàn)室研究的結(jié)果，但目前對(duì)冠狀病毒3CLPRO研究較少，其與抗病毒天然免疫反應(yīng)的關(guān)系還不清楚。本課題將主要研究MERS3C樣蛋白酶，深入研究其與宿主抗病毒天然免疫關(guān)系等生物學(xué)功能。目的從MERS3CLPRO調(diào)控細(xì)胞內(nèi)IFN表達(dá)機(jī)制及其在宿主細(xì)胞中是否誘導(dǎo)自噬進(jìn)行研究，為探究人類新發(fā)MERS冠狀病毒參與免疫反應(yīng)機(jī)制提供理論依據(jù)。方法首先，合成MERSCOVSARSCOVNL63COV3CLPRO，利用PCR定點(diǎn)突變?cè)噭┖袠?gòu)建蛋白酶活性缺失突變體。其次，利用蛋白印跡法雙熒光素酶活性測(cè)定法酶聯(lián)免疫吸附法和實(shí)時(shí)定量PCR等研究技術(shù)，檢測(cè)MERS3CLPRO及突變體對(duì)干擾素水平以及泛素化蛋白的影響；利用免疫共沉淀技術(shù)研究3CLPRO與RIGI通路關(guān)鍵因子泛素化水平影響。為了研究冠狀病毒3C樣蛋白酶與細(xì)胞自噬的關(guān)系，將帶有綠色熒光蛋白GFP基因的LC3B與MERS3CLPRO轉(zhuǎn)染于細(xì)胞中，通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)確定MERS3CLPRO是否引起特征性GFPLC3B點(diǎn)狀聚集。其次，利用WESTERNBLOTTING和電鏡技術(shù)檢測(cè)3CLPRO誘導(dǎo)自噬效應(yīng)。為了探究自噬體產(chǎn)生機(jī)制，首先WESTERNBLOTTING技術(shù)檢測(cè)自噬蛋白P62的表達(dá)情況；隨后使用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)由3CLPRO誘導(dǎo)的PMRFPGFPLC3綠色和紅色點(diǎn)狀熒光聚集。結(jié)果13CLPRO是由人冠狀病毒編碼的新IFN拮抗蛋白（1）通過(guò)雙熒光素酶活性檢測(cè)技術(shù)對(duì)3CLPRO調(diào)控干擾素活性分析，發(fā)現(xiàn)MERSSARSNL633CLPRO均可抑制RIGIN介導(dǎo)以及仙臺(tái)病毒刺激下細(xì)胞內(nèi)干擾素激活活性，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)3CLPRO抑制細(xì)胞內(nèi)干擾素表達(dá)。同時(shí)檢測(cè)3CLPRO對(duì)關(guān)鍵蛋白介導(dǎo)的IFN信號(hào)通路的影響，結(jié)果顯示3CLPRO明顯抑制IPS1ERISTBK1IRF3IRF7激活的干擾素產(chǎn)生（2）對(duì)3CLPRO干擾素拮抗活性的特異性研究發(fā)現(xiàn)，3CLPRO兩種蛋白酶活性突變體不抑制IFN表達(dá)，提示3CLPRO抑制干擾素活性依賴于其催化活性位點(diǎn)。2MERS3CLPRO是一種新DUB酶（1）將MERS3CLPRO分別與泛素分子HAUB，以及HAUBK48，HAUBK63基因轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MERS3CLPRO能有效地去除細(xì)胞內(nèi)蛋白的泛素化修飾，證實(shí)MERS3CLPRO具有細(xì)胞內(nèi)去泛素化（DUB）活性，且3CLPRO的DUB活性與其蛋白酶催化活性密切相關(guān)。使用表達(dá)純化的3CLPRO進(jìn)行體外DUB實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)這一特性。（2）以類泛素分子（SUMO和ISG15）為作用底物，發(fā)現(xiàn)3CLPRO具有去SUMO活性和去ISG活性，且其活性依賴于酶催化活性位點(diǎn)。3MERS3CLPRO抑制IFN機(jī)制研究利用免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)，表明3CLPRO通過(guò)抑制或減弱RIGI／TBK1／IRF3等蛋白泛素化從而負(fù)調(diào)控干擾素表達(dá)，且其活性依賴于3CLPRO酶催化活性位點(diǎn)。4MERS3CLPRO是新發(fā)現(xiàn)的自噬誘導(dǎo)蛋白（1）MERS3CLPRO誘導(dǎo)EGFPLC3B綠色熒光點(diǎn)狀積累，MERS3CLPRO誘導(dǎo)自噬微管蛋白1輕鏈3（LC3II）表達(dá)上調(diào)說(shuō)明3CLPRO可誘導(dǎo)自噬。電子投射電鏡技術(shù)證實(shí)，3CLPRO誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)自噬體特征性雙層膜結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步證實(shí)3CLPRO可激活自噬。（2）研究發(fā)現(xiàn)3CLPRO誘導(dǎo)不完全自噬作用，MERS3CLPRO誘導(dǎo)自噬具有依賴時(shí)間性且獨(dú)立于其酶催化活性。（3）研究發(fā)現(xiàn)其它兩種感染人的冠狀病毒3CLPRO如SARS和NL63等均誘導(dǎo)自噬產(chǎn)生，提示3CLPRO誘導(dǎo)細(xì)胞自噬特性廣泛存在于人類冠狀病毒中。結(jié)論本課題研究發(fā)現(xiàn)了3CLPRO調(diào)控宿主免疫反應(yīng)及誘導(dǎo)細(xì)胞自噬等新型生物學(xué)功能。證實(shí)了MERS編碼的3CLPRO具有多方面功能，不僅參與負(fù)調(diào)控抗病毒天然免疫反應(yīng)，還具有去泛素化酶（DUB）活性，此外3CLPRO是一種冠狀病毒來(lái)源的細(xì)胞自噬誘導(dǎo)蛋白。3CLPRO參與抗病毒天然免疫反應(yīng)相關(guān)機(jī)制表明，3CLPRO利用可以去泛素化特性，減弱或抑制信號(hào)通路中關(guān)鍵因子的泛素化，負(fù)調(diào)控干擾素表達(dá)。本課題新發(fā)現(xiàn)冠狀病毒蛋白酶3CLPRO能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生自噬效應(yīng)，為抗病毒藥物的研究提供了理論依據(jù)。

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建符合深圳市實(shí)際的乙肝免疫預(yù)防決策分析馬爾科夫模型，同時(shí)采用成本效益分析和成本效果分析兩種方法，完成乙肝母嬰阻斷策略的經(jīng)濟(jì)學(xué)評(píng)價(jià)。構(gòu)建基于深圳市社區(qū)人群慢性乙肝抗病毒治療策略的決策分析馬爾科夫模型，獲得20～59歲人群中慢性乙肝病人采用恩替卡韋治療的成本效果分析結(jié)果和可負(fù)擔(dān)性。明確成本效益分析和成本效果分析的適用條件及其在策略定量?jī)?yōu)化中的作用，探索廣義成本效果分析的指標(biāo)和應(yīng)用。方法根據(jù)決策分析馬爾科夫模型原理，以乙肝母嬰阻斷為研究策略，以乙肝疫苗普種和不接種作為參比策略，確定新生兒乙肝免疫預(yù)防策略模型，引入深圳市相關(guān)參數(shù)后，用2013年的出生人口數(shù)作為隊(duì)列人群，計(jì)算凈現(xiàn)效益（NPV）和效益成本比（BCR）、增量成本效果比（ICER），同時(shí)進(jìn)行CBA和CEA比較和評(píng)估。通過(guò)一維和多維敏感性分析，明確參數(shù)不確定性對(duì)決策結(jié)果的影響。以抗病毒治療策略為研究策略，以不治療為對(duì)比策略，確定深圳市20～59歲人群中慢性乙肝病人采用恩替卡韋抗病毒治療的決策分析馬爾科夫模型，模擬10萬(wàn)人隊(duì)列，引入相關(guān)參數(shù)后獲得抗病毒治療策略的成本和效果，計(jì)算ICER并分析研究策略的經(jīng)濟(jì)性。在一維和多維敏感性分析的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步完成抗病毒治療策略可支付線和成本效果可支付曲線，對(duì)該策略的可負(fù)擔(dān)性作出評(píng)價(jià)。結(jié)果構(gòu)建的深圳市新生兒乙肝免疫預(yù)防決策分析馬爾科夫模型中，決策樹(shù)部分包括3個(gè)決策分支，概率節(jié)點(diǎn)涵蓋了孕婦HBSAG篩檢率和陽(yáng)性率、乙肝疫苗和HBIG接種率等；在抗HBS陽(yáng)轉(zhuǎn)、易感和圍產(chǎn)期感染結(jié)局后連接3類MARKOV模型。模型參數(shù)包括率、成本、效用值和轉(zhuǎn)歸概率等4大類。CBA表明，從醫(yī)療衛(wèi)生和全社會(huì)角度看，乙肝母嬰阻斷策略的BCR分別為1626和1437，高于乙肝疫苗普種策略（BCR為1342和1207）；用深圳市2013年出生人口計(jì)算，社會(huì)資源的投入和產(chǎn)出分別為170億元和2437億元，NPV為2267億元。CEA顯示，從支付者、醫(yī)療衛(wèi)生和全社會(huì)三個(gè)角度看，與乙肝疫苗普種策略相比，乙肝母嬰阻斷策略的ICER分別為174746元QALY、5177593元QALY和8510000元QALY，具有明顯的成本效果價(jià)值。一維和多維敏感性分析顯示，CBA和CEA的結(jié)果穩(wěn)定可靠；乙肝疫苗接種率和乙肝相關(guān)疾病費(fèi)用分別是CBA和CEA的最重要影響因素?？芍Ц缎苑治霰砻?，以2013年為例，深圳市實(shí)施乙肝母嬰阻斷策略最多需投入23013萬(wàn)元，比普種策略多投入9595萬(wàn)元，結(jié)合支付意愿分析，均未超過(guò)可負(fù)擔(dān)能力。深圳市基于社區(qū)人群慢性乙肝抗病毒治療策略的決策分析馬爾科夫模型包括2個(gè)決策分支，概率節(jié)點(diǎn)考慮了HBSAG篩檢率和陽(yáng)性率、就醫(yī)率、HBSAG陽(yáng)性治療比例、治療依從性和不良反應(yīng)發(fā)生率。參數(shù)包括HBSAG陽(yáng)性率及其治療所占比例、治療成本（篩檢和確診費(fèi)、抗病毒藥物成本、隨訪檢測(cè)費(fèi)和不良反應(yīng)治療費(fèi)）、依從性、治療與否的轉(zhuǎn)歸概率等4類。從支付者和社會(huì)角度看，20～59歲人群實(shí)施抗病毒治療策略的ICER分別為8700363元QALY和1193874元QALY，均小于深圳市人均GDP，說(shuō)明該策略具有高成本效果，從全社會(huì)角度看更具成本效果意義。20～29歲年齡組ICER最?。ǚ謩e為6574163和159234元QALY），隨著年齡增加ICER增大，說(shuō)明低年齡組慢性乙肝治療策略更具成本效果。一維和多維敏感性分析未能改變上述結(jié)論，而抗病毒藥物成本和乙肝相關(guān)疾病費(fèi)用是影響策略經(jīng)濟(jì)效果的關(guān)鍵參數(shù)。模擬10萬(wàn)社區(qū)人群中開(kāi)展慢性乙肝抗病毒治療，需要投入的總預(yù)算高達(dá)752億元。結(jié)論1深圳市施行的乙肝母嬰阻斷策略可獲得較高的效益成本比（14371），與乙肝疫苗普種策略（12071）相比，公共資源投入的效益明顯。2深圳市施行的乙肝母嬰阻斷策略，可以進(jìn)一步降低乙肝相關(guān)疾病的發(fā)生，增加壽命年；與新生兒乙肝疫苗普種策略相比，雖然每多獲得一個(gè)效果需增加投入，但具有較高的成本效果價(jià)值。3經(jīng)濟(jì)學(xué)評(píng)價(jià)模型中參數(shù)的變化沒(méi)有改變決策分析的基本結(jié)果，結(jié)論可靠；乙肝疫苗接種率和乙肝相關(guān)疾病費(fèi)用分別是乙肝母嬰阻斷策略CBA和CEA的最重要影響因素。4深圳市用于乙肝母嬰阻斷的年總投入水平和接種者的支付意愿均未超過(guò)可負(fù)擔(dān)能力，該策略可支付性良好。5在深圳市20～59歲社區(qū)人群中開(kāi)展慢性乙肝抗病毒治療的經(jīng)濟(jì)學(xué)價(jià)值隨年齡增長(zhǎng)而降低，但均具有成本效果意義。6與社區(qū)人群慢性乙肝抗病毒治療相適應(yīng)的年總投入水平和患者的支付意愿均較高，是一項(xiàng)高成本的策略；抗病毒治療藥物成本是最主要的影響因素。7成本效益分析側(cè)重方案優(yōu)化，成本效果分析側(cè)重方案評(píng)估，兩者結(jié)合可使經(jīng)濟(jì)學(xué)評(píng)價(jià)更加豐富；將可支付線應(yīng)用于成本效果分析，能夠?yàn)檠芯坎呗缘膶?shí)施提供預(yù)算信息。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R72單位代碼10343學(xué)號(hào)131002116溫小1J嚼科大誓WENZHOUMEDLCALUNIVERSLTY碩士學(xué)位論文論文題目顯趔絲區(qū)』L童逋蹙痘壹塾王哩暖道蹙染三魚(yú)魚(yú)倒遵筮痘堂屋隆鏖鱉點(diǎn)盆板研究生姓名鐘佩佩學(xué)科專業(yè)兒科學(xué)呼吸類型專業(yè)型指導(dǎo)教師李昌崇張海鄰二。一六年五月溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文一、論文目錄縮略詞表3中文摘要4英文摘要6前言9材料與方法10結(jié)果11分析與討論18結(jié)論22今后研究方向22參考文獻(xiàn)23附勇乏26致謝27二、綜述綜述28參考文獻(xiàn)34獨(dú)創(chuàng)性聲明382

簡(jiǎn)介：目的對(duì)深圳地區(qū)諾如病毒感染進(jìn)行分子流行病學(xué)研究。對(duì)水和牡蠣中諾如病毒進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)行暴發(fā)的溯源研究。并利用暴發(fā)研究諾如病毒感染與宿主受體組織血型抗原相互作用，預(yù)測(cè)諾如病毒的流行強(qiáng)度。方法收集深圳地區(qū)20052016年腹瀉糞便樣本9580份，用GⅠ和GⅡ型諾如病毒REALTIMERTPCR、RTPCR方法以及杯狀病毒核酸三重RTPCR進(jìn)行檢測(cè)通過(guò)測(cè)定基因序列，對(duì)諾如病毒進(jìn)行基因進(jìn)化分析和基因分型。建立簡(jiǎn)易的吸附洗脫法對(duì)水體的諾如病毒進(jìn)行濃縮，還建立了牡蠣中諾如病毒的濃縮方法。另外，對(duì)諾如病毒暴發(fā)進(jìn)行組織血型抗原表型分析和HBGAS結(jié)合區(qū)分析。結(jié)果1深圳地區(qū)散發(fā)NOV的檢出率在12242537％之間。病毒基本呈隔年增高的趨勢(shì)，每年的78月份達(dá)到最高峰。各年齡段NOV檢出率在12582132％。6月齡至3歲的兒童和20歲以上的成人是高危人群。2139起腹瀉暴發(fā)疫情中有122起是由諾如病毒引起。諾如病毒性腹瀉全年均可暴發(fā)，冬春季是諾如病毒暴發(fā)的高峰。深圳諾如病毒暴發(fā)主要集中在南山區(qū)，以幼兒園、學(xué)校及社區(qū)為主要場(chǎng)所。3在四起水源性腹瀉暴發(fā)疫情的病人糞便中和可疑水樣中均檢出諾如病毒，NOVGⅡ4DEN_HAAG_2006B和NOVGⅡ3各兩起，分別由于諾如病毒污染飲用水源、地下蓄水池、山泉水和二次供水所致。還四次從牡蠣中檢測(cè)出諾如病毒。4四株諾如病毒全基因組序列同源性為868％991％，氨基酸序列的同源性為946992％，發(fā)現(xiàn)SZ2012054毒株三個(gè)位點(diǎn)發(fā)生有義突變。通過(guò)SIMPLOT重組分析，發(fā)現(xiàn)SZ2012054、SZ2012049與SZ2010422株在F1F2重疊區(qū)發(fā)生重組。935株散發(fā)諾如病毒核苷酸序列同源性及系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，NOVGⅠ毒株間的同源性為621％1000％，NOVGⅡ?yàn)?74％1000％。43株諾如病毒屬于GⅠ，包括GⅠ16、GⅠ8，共7種基因型892株諾如病毒屬于GⅡ，分別為GⅡ4SYDNEY_2012、GⅡ4DEN_HAGG_2006B、GⅡ4HUNTER_2004、GⅡ4ASIA_2003、GⅡ4NEW_LEANS_2009、GⅡ3、GⅡ2、GⅡ5～7、GⅡ12～14、GⅡ17和GⅡ21，共15種基因型，還有部分GⅡ4不能進(jìn)一步分型。5在諾如病毒暴發(fā)疫情中，GⅠ3、GⅠ6所致的疫情各兩起，NOVGⅡ所致的疫情118起，包括10個(gè)基因亞型，分別是GⅡ13、6、8、17、21GⅡ4SYDNEY_2012、GⅡ4DENHAAG_2006B、GⅡ4ASIA2003，另有28起GⅡ疫情未能定型。2012年7月首次在散發(fā)病例中發(fā)現(xiàn)NOVGⅡ4SYDNEY_2012株，并對(duì)暴發(fā)疫情進(jìn)行了預(yù)警預(yù)測(cè)。深圳地區(qū)的NOV散發(fā)和暴發(fā)的優(yōu)勢(shì)株均為GⅡ4SYDNEY_2012、GⅡ4DEN_HAGG_2006B、GⅡ3。6對(duì)兩起諾如病毒腹瀉暴發(fā)研究發(fā)現(xiàn)，分泌型個(gè)體對(duì)諾如病毒是易感的，且能與非分泌型唾液和抗原結(jié)合。結(jié)論諾如病毒是深圳地區(qū)腹瀉散發(fā)和暴發(fā)疫情的重要病原，深圳地區(qū)每年都有一個(gè)流行的優(yōu)勢(shì)株和次優(yōu)勢(shì)株，當(dāng)新毒株的出現(xiàn)后逐步取代以往的流行株而成為新的流行株，20052016深圳地區(qū)優(yōu)勢(shì)株為GⅡ4SYDNEY_2012、GⅡ4DEN_HAGG_2006B、GⅡ3。散發(fā)病例中諾如病毒有22種基因型，暴發(fā)疫情有12種基因型，部分諾如病毒不能分型。還開(kāi)展溯源研究，從四起疫情的水樣和四批次的牡蠣中檢測(cè)到諾如病毒。通過(guò)研究諾如病毒感染與宿主受體組織血型抗原相互作用，發(fā)現(xiàn)分泌型和非分泌型個(gè)體對(duì)GⅡ4和GⅡ3型諾如病毒都易感，GⅡ4可能和CAIRO1有相似的HBGA受體。

簡(jiǎn)介：科大學(xué)CAIUNIVERSITY學(xué)號(hào)201420S48碩士學(xué)位論文CASK過(guò)表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)H1299細(xì)胞生物學(xué)功能特性的影響覃覓導(dǎo)師姓名周華富專業(yè)名稱外科學(xué)申請(qǐng)學(xué)位類型學(xué)術(shù)型學(xué)位答辯委員會(huì)主席林輝答辯委員會(huì)委員曾建業(yè)鄭寶石郭建極馮旭二O一七年五月基本情況姓名覃覓民族土家族籍貫湖北宜昌學(xué)習(xí)工作經(jīng)歷起止時(shí)間20089201362014920176個(gè)人簡(jiǎn)歷所在院校或單位三峽大學(xué)廣西醫(yī)科大學(xué)研究生期間科研經(jīng)歷／臨床工作經(jīng)歷項(xiàng)目起止時(shí)間性別男出生年月19901政治面貌共青團(tuán)員學(xué)歷學(xué)位學(xué)士學(xué)位碩士學(xué)位職稱無(wú)無(wú)項(xiàng)目名稱項(xiàng)目來(lái)源熏皇荔差覃翥萎蒜舅黯肺癌桂科攻標(biāo)志物及早期診斷方案的研究～“臨床工作時(shí)間工作單位廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院職稱實(shí)習(xí)醫(yī)師

簡(jiǎn)介：目的社區(qū)獲得性肺炎（CAP）是常見(jiàn)的呼吸道感染性疾病，給人類社會(huì)帶來(lái)了沉重的健康和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。人冠狀病毒（HUMANCONAVIRUSE，HCOV）尤其是SARS冠狀病毒（SARSCOV）和中東呼吸綜合征冠狀病毒（DLEEASTRESPIRATYSYNDROMECONAVIRUSE，MERSCOV）的出現(xiàn)給人類健康帶來(lái)了嚴(yán)重的危害。不同地區(qū)CAP病原學(xué)各有其特點(diǎn)，因此了解一地區(qū)CAP病原學(xué)分布對(duì)指導(dǎo)治療意義重大。因此本研究致力于明確我國(guó)華中地區(qū)成人CAP住院病人的病原學(xué)分布特點(diǎn)和HCOV的流行病學(xué)特征，為CAP經(jīng)驗(yàn)性抗菌治療提供依據(jù)，同時(shí)為提升我國(guó)新生冠狀病毒相關(guān)新發(fā)突發(fā)呼吸道傳染病應(yīng)急處理能力提供理論支撐。方法選取2014年5月至2015年1月華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院呼吸內(nèi)科成人社區(qū)獲得性肺炎住院患者，采集入選病例的相關(guān)臨床資料，包括性別、年齡、身高、體重、職業(yè)、臨床癥狀體征、基礎(chǔ)疾病、影像學(xué)表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、病原學(xué)資料、抗生素使用情況、住院時(shí)間、治療效果等，收集合格痰標(biāo)本，運(yùn)用PCR方法進(jìn)行常見(jiàn)呼吸道感染性病原菌及人冠狀病毒的核酸檢測(cè)。對(duì)收集的臨床資料及檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)性分析。結(jié)果調(diào)查共納入CAP患者78例，其中男性731％（5778）、女性269（2178），男女比例為2711。年齡范圍為18～85歲，平均年齡5519±1601歲，主要集中在40歲以上的中老年患者（821）。痰培養(yǎng)陽(yáng)性率3768（2669），共檢出34株病原菌，以銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和念珠菌為主。痰液病原體核酸檢測(cè)陽(yáng)性率8077，明顯高于痰培養(yǎng)結(jié)果，以肺炎克雷伯桿菌、巨細(xì)胞病毒和甲型流感病毒為主，混合感染占4872（3878）。人冠狀病毒HCOVNL63、HCOV229E和HCOVOC43的檢出率分別為513、256和128，未檢出HCOVHKU1。結(jié)論我國(guó)華中地區(qū)成人CAP住院患者以40歲以上中老年為主，病原體以革蘭陰性桿菌為主，因此在對(duì)CAP患者進(jìn)行抗感染治療時(shí)應(yīng)充分考慮以上特點(diǎn)。采用PCR方法可以提高病原體陽(yáng)性率，但仍需繼續(xù)設(shè)法提高檢驗(yàn)水平，還需根據(jù)患者實(shí)際情況綜合判斷可能致病菌。研究中檢出了人冠狀病毒HCOVOC43、HCOV229E和HCOVNL63，未檢出HCOVHKU1，它們?cè)贑AP患者發(fā)病中所起的作用還不清楚，需要進(jìn)一步研究。

簡(jiǎn)介：背景巨細(xì)胞病毒（CYTOMEGALOVIRUSCMV）屬于皰疹病毒Β亞科組的DNA病毒，病毒初次感染人體后，由于其較低的毒力及病毒特性可逃避宿主免疫監(jiān)視，病毒可在體內(nèi)長(zhǎng)期存在。多數(shù)人群在兒童時(shí)期感染CMV，病毒持久性存在于體內(nèi)是基于多種病毒與宿主之間的復(fù)雜的免疫關(guān)系決定，這種“低毒力”病毒和免疫功能正常宿主之間保持相對(duì)平衡，不會(huì)導(dǎo)致特異性臨床表現(xiàn)。在某些特殊人群中，比如孕婦，感染CMV可有潛在嬰兒致畸風(fēng)險(xiǎn)；先天性CMV感染可導(dǎo)致患兒耳聾、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙。在免疫缺陷患者中，比如腫瘤、AIDS、移植患者，CMV可成為重要病原體，除直接病毒復(fù)制導(dǎo)致非特異臨床表現(xiàn)，組織損傷之外，免疫缺陷患者體內(nèi)病毒激活可導(dǎo)致繼發(fā)性細(xì)菌或真菌感染。男男性行為者（MENWHOHAVESEXWITHMENMSM）人群HCMV感染率達(dá)到95％，流行病學(xué)調(diào)查顯示MSM是HIV易感人群，HIV感染者最終50會(huì)出現(xiàn)CMV感染的各種疾病。目前我國(guó)無(wú)針對(duì)MSM人群HCMV感染的流行病學(xué)調(diào)查，鑒于本地區(qū)MSM人群HIV感染率較高，因此，本研究對(duì)重慶市MSM人群開(kāi)展HCMV感染流行病學(xué)調(diào)查，了解該地區(qū)男同性戀巨細(xì)胞病毒感染情況。目的調(diào)查重慶地區(qū)男男性行為者M(jìn)ENWHOHAVESEXWITHMEN，MSM人巨細(xì)胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV）感染現(xiàn)狀。方法1、研究對(duì)象選擇采用非概率抽樣法，對(duì)907例MSM（來(lái)源為2012年2014年重慶地區(qū)進(jìn)行臨床藥物實(shí)驗(yàn)預(yù)防艾滋病感染的MSM人群）和170例健康成人血清（同期健康體檢的成年男性）。2、采用ELISA方法檢測(cè)HCMV的IGG、IGM抗體。3、統(tǒng)計(jì)分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS170進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。各組間率的比較采用行X列Χ2檢驗(yàn)，當(dāng)1＜T＜5且N＞40時(shí)采用校正四格表Χ2檢驗(yàn)，當(dāng)T＜1或N≤4O時(shí)采用FISHER的精確檢驗(yàn)，以P＜005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1、907例MSM中HIV130例，HIV777例130例HIVMSM中HCMV既往感染率為9846，感染后再活化率為625；777例HIV（）MSM中HCMV既往感染率為9678，感染后再活化率為505170例健康對(duì)照組既往感染率9294，感染后再活化率127。2、HIV（）MSM的HCMV既往感染率及感染后再活化率雖然高于HIV對(duì)照組，但兩者比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義Χ2＝0583P＞005；Χ2＝0369P＞005。3、MSM的HCMV既往感染率及感染后再活化率明顯高于健康成人，且兩者比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Χ2＝6835P＜005；Χ2＝4227P＜005）。結(jié)論1、重慶地區(qū)MSM人群的HCMV既往感染率及感染后再活化率明顯高于健康成人，提示MSM人群面臨HCMV感染威脅較嚴(yán)重。2、MSM人群中HIV（）病毒攜帶者血清既往感染率及感染后再活化率雖然高于HIV（）對(duì)照組，但兩者比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、本研究再次證實(shí)中國(guó)成人HCMV感染率很高。

簡(jiǎn)介：背景流行性感冒病毒共分為甲、乙、丙、丁型，其中季節(jié)性H3N2亞型流感在人群中普遍流行。HA蛋白和NA蛋白是H3N2流感病毒表面主要的兩種抗原，經(jīng)常頻繁地發(fā)生變異，對(duì)發(fā)生流感感染和造成流行具有重要意義，其中HA蛋白的遺傳變異進(jìn)化發(fā)生得最頻繁。HA蛋白的抗原位點(diǎn)、受體結(jié)合部位及關(guān)鍵的糖基化位點(diǎn)如果發(fā)生氨基酸替換，病毒的致病性和感染的宿主種類就會(huì)相應(yīng)發(fā)生改變。NA蛋白又作為藥物治療的重要靶點(diǎn)，酶活性中心的關(guān)鍵位點(diǎn)發(fā)生變異會(huì)導(dǎo)致耐藥性。因此研究H3N2亞型流感病毒的HA基因和NA基因在流感流行中的基因進(jìn)化規(guī)律和分子變異特點(diǎn)具有重要意義。目的了解2014年4月至2015年3月山東省流感病毒病原學(xué)監(jiān)測(cè)的描述性流行病學(xué)分布情況，以及在H3N2亞型流感病毒的流行過(guò)程中HA基因和NA基因的分子流行病學(xué)分布特點(diǎn)，為預(yù)測(cè)流感發(fā)展趨勢(shì)及預(yù)防控制流行提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。方法本研究首先對(duì)山東省流感監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行流感病毒病原學(xué)監(jiān)測(cè)情況的基本描述，然后選擇山東省疾病預(yù)防控制中心流感實(shí)驗(yàn)室于2014年4月至2015年3月期間分離保存的H3N2亞型流感毒株102株，并對(duì)其進(jìn)行復(fù)蘇，最后共95株H3N2亞型流感病毒毒株進(jìn)行RTPCR擴(kuò)增和基因測(cè)序。利用DNASTAR軟件的EDITSEQ模塊編輯序列及MEGALIGN模塊分析同源性多序列比對(duì)采用MOLECULAREVOLUTIONARYGEICSANALYSIS50MEGA50軟件的CLUSTALW程序系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的構(gòu)建使用MEGA50軟件NEIGHBJOININGNJ法。結(jié)果1山東省于2014年4月至2015年3月共收集了21276份流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本，描述分析發(fā)現(xiàn)2014年10月至2015年3月為流感流行高峰期，感染人群主要為0～15歲人群，以5歲以下比例最高共分離出2371株流感病毒細(xì)胞株，其中AH3N2流感病毒占比例最高（1665株），并且2014年11至2015年1月是H3N2亞型流感的流行高峰期。2山東省所分離的H3N2亞型流感病毒的HA和NA基因序列的同源性分析結(jié)果分別為980～100％和977～100％。HA基因系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)分析顯示，大多數(shù)山東省分離的H3N2流感病毒的HA基因聚集成一簇，與ASWITZERL97152932013H3N2的親緣關(guān)系最近，與ATEXAS502012H3N2的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。NA基因系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)分析提示，大多數(shù)山東省分離的H3N2流感病毒NA基因聚集分布在一個(gè)大分支，與ASWITZERL97152932013H3N2的遺傳距離最短，與ATEXAS502012H3N2的遺傳距離最長(zhǎng)，均未發(fā)現(xiàn)明顯的地域和時(shí)間特征。3HA蛋白共52個(gè)位點(diǎn)發(fā)生氨基酸替換，其中抗原決定簇（HA1蛋白）位點(diǎn)發(fā)生了17個(gè)，裂解位點(diǎn)序列并沒(méi)有發(fā)生變異，丟失糖基化位點(diǎn)NES134136和NSS156158，同時(shí)新增糖基化位點(diǎn)NYT170172。NA蛋白有51個(gè)位點(diǎn)發(fā)生氨基酸替換，酶活性中心位點(diǎn)118DN、371VI發(fā)生變異，催化位點(diǎn)156VI、425TN發(fā)生變異，5個(gè)抗原位點(diǎn)發(fā)生變異，丟失糖基化位點(diǎn)NWS7779和NDS320322，同時(shí)新增糖基化位點(diǎn)NIT8486和NAS236238。結(jié)論12014年4月至2015年3月山東省流感病毒流行的優(yōu)勢(shì)毒株是H3N2亞型流感病毒，其流行高峰時(shí)間為冬春季（2014年11月、2014年12月、2015年1月）。22014年4月至2015年3月山東省分離的H3N2亞型流感流行株的HA基因和NA基因的同源性較高，但與當(dāng)年疫苗株的遺傳距離稍遠(yuǎn)，與下一年的疫苗株遺傳距離較近HA蛋白和NA蛋白均有部分抗原決定位點(diǎn)出現(xiàn)氨基酸替換現(xiàn)象，HA基因普遍可能發(fā)生了抗原性漂移，WHO推薦的2014～2015年疫苗株對(duì)H3N2亞型流感病毒保護(hù)效果可能較差，而2015～2016年的疫苗株可能對(duì)其具有一定保護(hù)效果。3部分H3N2亞型分離毒株的HA基因和NA基因的糖基化位點(diǎn)也發(fā)生了變異，不同功能的基因片段發(fā)生糖基化位點(diǎn)的變異可能產(chǎn)生不同的影響。4所有毒株的NA蛋白的酶活性中心的NA抑制劑抑制位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)變異，所以推測(cè)病毒均對(duì)奧司他韋敏感。

簡(jiǎn)介：背景兒童社區(qū)獲得性肺炎CAP已經(jīng)逐漸成為導(dǎo)致全世界5歲以下兒童死亡的第一位病因。全球每年死于肺炎的患兒統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)大約是200萬(wàn)，這占到全球范圍內(nèi)兒童死亡總數(shù)的20％。病毒感染是小兒CAP區(qū)別于成人的重要特征。其中以呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUSRSV占首位1，其他病毒如腺病毒ADENOVIRUS，ADV、流感病毒INFLUENZAVIRUS，IFV、人類偏肺病毒HUMANMETAPNEUMONIAEVIRUS，HMPV副流感病毒（PARAINFLUENZAVIRUS，PIV）等。就中醫(yī)病名而言，兒童CAP可劃為“肺炎喘嗽”，風(fēng)寒郁肺證常作為小兒病毒性肺炎起初的重要證候，如何全面地、科學(xué)地闡述這一中醫(yī)證候內(nèi)涵與本質(zhì)，成為現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)需解決的迫切問(wèn)題。據(jù)相應(yīng)的研究顯示，兒童病毒性肺炎的治療上，缺乏完全有效、安全的理想化合藥物，病毒唑RIBAVIRIN是唯一被美國(guó)兒科協(xié)會(huì)AAP謹(jǐn)慎推薦的“也許能夠使用”的合成核苷類抗病毒藥物。相較于此，中醫(yī)藥在治療小兒病毒性肺炎上顯示出明顯優(yōu)勢(shì)，且已經(jīng)為大量臨床和實(shí)驗(yàn)研究所證實(shí)。代謝組學(xué)METABOLOMICS作為系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，是聚焦于生物體內(nèi)源性代謝物性質(zhì)、數(shù)量、種類及其整體變化規(guī)律的一門嶄新學(xué)科2。代謝組學(xué)可以有效避免既往蛋白組學(xué)或基因組學(xué)單獨(dú)采用一種或幾種指標(biāo)，或者一條或幾條基因阻斷后的通路表達(dá)就預(yù)測(cè)或推斷生理狀態(tài)或病理情況的“真實(shí)世界”，同時(shí)卻可以及時(shí)地、有效地、客觀靈敏地映射生物體受外界擾動(dòng)后機(jī)體內(nèi)基因、蛋白、細(xì)胞或組織的“生化表型”，以整體衡量取代單一檢測(cè)，這十分契合中醫(yī)基礎(chǔ)理論的“整體觀、恒動(dòng)觀”，是一種以“航拍視覺(jué)”替換單一“叢林搜索”的角度?；诖朔N宏觀認(rèn)識(shí)，本課題采用代謝組學(xué)方法，結(jié)合患兒生命體征，血、尿常規(guī)，肝、腎功能等生化檢測(cè)，整體出發(fā)探討病毒性肺炎風(fēng)寒郁肺證WC所導(dǎo)致的代謝差異的意義，試圖從小分子代謝角度解釋小兒病毒性肺炎風(fēng)寒郁肺證的證候內(nèi)涵。目的整體角度探討小兒病毒性肺炎風(fēng)寒郁肺證患兒的血清和尿液的內(nèi)源性差異代謝特征，闡釋小兒病毒性肺炎風(fēng)寒郁肺證的差異代謝證候?qū)嵸|(zhì)。方法小兒病毒性肺炎風(fēng)寒郁肺證組學(xué)技術(shù)的臨床實(shí)驗(yàn)挑選可以納入中西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)的病毒性肺炎屬于風(fēng)寒郁肺證型的患兒30例，設(shè)為風(fēng)寒組WC，同時(shí)設(shè)立體檢時(shí)的正常健康兒童30例NH。分別在入院第二天收集兩組兒童的血清和尿液，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀GASCHROMATOGRAPHYMASSSPECTROMETRY，GCMS同時(shí)分析獲取WC組和NH組血清、尿液中的差異內(nèi)源性代謝物，基于數(shù)據(jù)庫(kù)成立小兒病毒性肺炎風(fēng)寒郁肺證的證候相關(guān)代謝集群，通過(guò)在線分析平臺(tái)XCMSONLINE預(yù)處理、NIST數(shù)據(jù)庫(kù)和已有標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證、METABOANALYST確定差異性代謝物及代謝路徑，解釋所涉及的相關(guān)通路，揭示小兒病毒性肺炎風(fēng)寒郁肺證的差異代謝特點(diǎn)和本質(zhì)。結(jié)果1血清代謝組學(xué)模式識(shí)別分析結(jié)果顯示，風(fēng)寒郁肺證與健康兒童組間能夠良好區(qū)分，眾多有機(jī)酸、氨基酸、脂類等差異性代謝物及代謝通路被確定。與健康兒童相比，風(fēng)寒郁肺證患兒血清中丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、牛磺酸、賴氨酸等多種有機(jī)酸、氨基酸上調(diào)氨基丁酸、乙醇酸、甘油、1棕櫚酸單甘油酯、膽固醇、葡萄糖等下調(diào)。2尿液代謝組學(xué)模式識(shí)別分析結(jié)果顯示，風(fēng)寒郁肺證與健康兒童組間雖有一定分離趨勢(shì)，但仍存在交叉重疊，進(jìn)一步建模OPLSDA，兩組完全分離，說(shuō)明代謝物存在差異。尿液代謝中甘氨酸、絲氨酸、色氨酸、Β羥基丁酸、葡萄糖酸、D半乳糖、肌苷、尿苷等物質(zhì)上調(diào)羥基乙酸、硬脂酸、棕櫚酸等下調(diào)。結(jié)論1GCMS代謝組學(xué)技術(shù)平臺(tái)能夠良好區(qū)分和初步解答小兒病毒性肺炎風(fēng)寒郁肺證WC與正常健康兒NH之間的差異代謝。2病毒性肺炎WC證患兒的血清和尿液代謝中主要以丙氨酸、甘氨酸、?；撬岽x、花生四烯酸、棕櫚酸代謝等代謝紊亂為標(biāo)志。

簡(jiǎn)介：原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含獲得廣西醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即在校期間論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)屬?gòu)V西醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本論文的部分或全部?jī)?nèi)容，可以采用影印、復(fù)印或其他手段保存、匯編本論文，學(xué)?？梢韵驀?guó)家有關(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。同意廣西醫(yī)科大學(xué)可以用不同的方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或者部分內(nèi)容。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名逢腳蝴期≯，步。如刁日目錄反轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的過(guò)表達(dá)M濃21對(duì)肝癌細(xì)胞干樣生物學(xué)特性的影響摘要1ABSTRACT4▲』L刖舌8第一部分反轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的過(guò)表達(dá)IILIR21穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建111材料與儀器112實(shí)驗(yàn)方法153結(jié)果364討論425結(jié)論45參考文獻(xiàn)46第二部分過(guò)表達(dá)血R21對(duì)肝癌細(xì)胞干樣生物學(xué)特性的影響501材料與儀器502方法533結(jié)果624討論685結(jié)論72參考文獻(xiàn)73全文小結(jié)771結(jié)論772創(chuàng)新之處77

簡(jiǎn)介：諾如病毒NOVIRUS，NV是引起非細(xì)菌性急性胃腸炎的主要病原體之一，近年來(lái)由諾如病毒引起的疫情暴發(fā)與流行逐漸增多，日益成為重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。由于諾如病毒尚不能體外培養(yǎng)，且極易發(fā)生變異，傳統(tǒng)的血清學(xué)及免疫學(xué)檢測(cè)方法存在很大局限性，目前以PCR為核心的分子生物學(xué)檢測(cè)方法成為檢測(cè)諾如病毒的主要研究方向。本研究通過(guò)建立常規(guī)RTPCR與熒光定量RTPCR檢測(cè)方法，對(duì)水體樣品的前處理進(jìn)行研究，并運(yùn)用建立的方法對(duì)采集于江蘇部分地區(qū)的臨床、牡蠣和水體樣品進(jìn)行檢測(cè)與評(píng)價(jià)，為進(jìn)一步完善諾如病毒的檢測(cè)提供依據(jù)。同時(shí)了解江蘇部分地區(qū)諾如病毒的污染狀況，分析其分子流行病學(xué)特征，為諾如病毒的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及分子流行病學(xué)調(diào)查提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。一、諾如病毒常規(guī)RTPCR與熒光定量RTPCR檢測(cè)方法的建立及比較針對(duì)諾如病毒衣殼蛋白保守區(qū)及F1F2連接處的基因序列設(shè)計(jì)引物、探針，優(yōu)化反應(yīng)體系，建立常規(guī)RTPCR和熒光定量RTPCR檢測(cè)方法。運(yùn)用建立的方法對(duì)其他腸道病毒進(jìn)行檢測(cè)，均無(wú)交叉反應(yīng)，表明該兩種方法具有良好的特異性不同拷貝數(shù)的諾如病毒檢測(cè)結(jié)果顯示常規(guī)RTPCR檢測(cè)限為103COPIESΜL，熒光定量RTPCR檢測(cè)限為102COPIESΜL。對(duì)不同稀釋梯度含有GⅠ型、GⅡ型諾如病毒目的基因的標(biāo)準(zhǔn)重組質(zhì)粒進(jìn)行熒光定量RTPCR反應(yīng)，結(jié)果GⅠ型標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒在102～108COPIESΜL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y405853301LGX，相關(guān)系數(shù)R2達(dá)到0997，擴(kuò)增效率E仃為100889％GⅡ型標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒在101～108COPIESΜL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y406663229LGX，R2達(dá)到0996，EFF為104039％批內(nèi)變異系數(shù)在018％～057％之間，批間變異系數(shù)在071％～262％之間，表明熒光定量RTPCR具有良好的重復(fù)性。運(yùn)用建立的常規(guī)RTPCR和熒光定量RTPCR方法對(duì)22份臨床樣品進(jìn)行同步檢測(cè)，并與南通市疾病預(yù)防控制中心的檢測(cè)結(jié)果相比對(duì)，常規(guī)RTPCR敏感度、特異度分別為7143％、100％，符合率達(dá)到9091％熒光定量RTPCR檢測(cè)結(jié)果與南通市疾病預(yù)防控制中心完全一致。運(yùn)用建立的兩種方法進(jìn)一步對(duì)180份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)，其中常規(guī)RTPCR陽(yáng)性率為556％，符合率達(dá)9722％熒光定量RTPCR陽(yáng)性率為833％，符合率達(dá)100％統(tǒng)計(jì)分析兩種方法的檢測(cè)率有顯著性差異P＜005，并對(duì)陽(yáng)性樣品測(cè)序，結(jié)果證實(shí)均為諾如病毒。二、水中諾如病毒富集方法的建立及優(yōu)化采用國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的混合纖維素酯濾膜，對(duì)人為污染諾如病毒的水樣進(jìn)行病毒富集，優(yōu)化濾膜的吸附與洗脫過(guò)程，建立水體病毒富集方法。在吸附過(guò)程中對(duì)水樣PH值、多價(jià)陽(yáng)離子及離子濃度進(jìn)行優(yōu)化，隨后在洗脫過(guò)程中優(yōu)化洗脫液及其PH值和濃度。研究結(jié)果顯示，在吸附水體病毒過(guò)程中，當(dāng)水樣PH值為35時(shí)，病毒平均吸附率為2896％，吸附效果優(yōu)于其它PH值向水樣加入NA、MG2、AL3，三種離子的平均吸附率分別4842％、2896％、1828％，NA吸附效果優(yōu)于MG2和AL3當(dāng)水樣中NA濃度為02MOLL時(shí)，濾膜吸附效果較好，平均吸附率高達(dá)7215％，優(yōu)于NA其它濃度。在洗脫濾膜過(guò)程中，1％NAPPPB甘氨酸05％吐溫80洗脫液較好，平均洗脫率為10785％，優(yōu)于其它洗脫液當(dāng)NAPP的濃度為05％時(shí)，平均洗脫率高達(dá)11994％，優(yōu)于其它濃度的洗脫液洗脫液的PH值為85、95、105、115時(shí)，平均洗脫率分別為2943％、11354％、13490％、10452％，表明當(dāng)洗脫液的PH值為105時(shí)，其洗脫效果優(yōu)于其它PH值。運(yùn)用建立的混合纖維素酯膜吸附洗脫法對(duì)人為污染100～103COPIESΜL諾如病毒液的待濾水進(jìn)行富集，通過(guò)熒光定量RTPCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)10～103COPIESΜL諾如病毒的待濾水經(jīng)富集后，均可檢出諾如病毒，未經(jīng)富集的待濾水均未檢出諾如病毒，表明該水樣富集方法的靈敏度為待濾水中病毒量達(dá)10COPIESΜL。三、江蘇部分地區(qū)諾如病毒分子流行病學(xué)分析在2014年1月～2014年12月間采集揚(yáng)州、南通兩地區(qū)腹瀉病人的臨床樣品648份，揚(yáng)州市翠園橋海鮮農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、歐尚超市的牡蠣樣品136份以及市區(qū)二道河、安敦河和寶帶河中水體樣品60份，用熒光定量RTPCR方法對(duì)上述樣品進(jìn)行諾如病毒檢測(cè)。結(jié)果顯示648份臨床樣品中，共檢測(cè)出85份陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率為1312％。其中，揚(yáng)州地區(qū)陽(yáng)性率為1913％57298，南通地區(qū)陽(yáng)性率為8％28350，揚(yáng)州地區(qū)諾如病毒的感染率顯著高于南通地區(qū)P＜00514歲以下兒童感染率為1804％57316，14歲以上患者感染率為806％22273，14歲以下兒童的感染率顯著高于其它人群P＜005男性感染率為1301％38292，女性感染率為1230％38309，男、女感染率差異不顯著P＞005。136份牡蠣樣品中，檢測(cè)出9份陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率662％。其中翠園橋海鮮農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)陽(yáng)性率為764％567歐尚超市陽(yáng)性率為580％469，統(tǒng)計(jì)分析揚(yáng)州市兩個(gè)海鮮銷售市場(chǎng)諾如病毒感染率無(wú)顯著差異P＞005。60份水體樣品中，檢測(cè)出13份陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率為2167％。其中二道河水樣陽(yáng)性率為10％220，安敦河水樣陽(yáng)性率為20％420，寶帶河水樣陽(yáng)性率為35％720，統(tǒng)計(jì)分析揚(yáng)州市區(qū)三道河流諾如病毒污染率無(wú)顯著差異P＞005?；谥Z如病毒衣殼蛋白保守區(qū)的基因序列，應(yīng)用MEGA50軟件對(duì)43份陽(yáng)性臨床樣品和1份陽(yáng)性水體樣品中諾如病毒進(jìn)行基因分型，檢出GⅠ型諾如病毒2份，包括GⅠ2、GⅠ6亞型GⅡ型諾如病毒42份，包括GⅡ4、GⅡ6、GⅡ8、GⅡ17四種基因亞型。其中GⅡ4亞型有32份，占所有基因型別的7273％，并與世界流行株GⅡ42006VARIANT和GⅡ42010在同一分支上，同源性為97％。1份陽(yáng)性水體樣品中諾如病毒與臨床樣品中的GⅡ4亞型同源性高達(dá)100％，說(shuō)明人類諾如病毒感染與水源可能有著密切關(guān)系。同時(shí)發(fā)現(xiàn)1份GⅠ2GⅡ8間混合感染的臨床樣品，為我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)該兩種亞型間的混合感染。