簡介：本研究分為三部分一、檢測18種（型亞型）呼吸道病毒的兩種反應(yīng)實(shí)時熒光定量PCR的建立臨床常見的呼吸道病毒種類眾多，感染的臨床表現(xiàn)相似，根據(jù)臨床癥狀難以進(jìn)行病原學(xué)鑒別診斷。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的引物和探針，成功建立了2種不同反應(yīng)條件實(shí)時熒光定量PCR方法檢測18種（型亞型）呼吸道病毒。通過驗(yàn)證該法的敏感性和特異性、準(zhǔn)確性，結(jié)果顯示，該法的最低檢測限為10拷貝數(shù)ΜL，變異系數(shù)CV為127％～344％，且特異性良好。經(jīng)檢測408份呼吸道標(biāo)本，鼻拭子檢測的陽性率為632％225356，肺泡灌洗液檢測的陽性率為25％1352。說明建立的REALTIMEPCR法簡便、特異、靈敏、穩(wěn)定。二、20112014年廣州市4種常見冠狀病毒的流行病學(xué)調(diào)查及20132014年不明原因肺炎患者中新型冠狀病毒的調(diào)查通過上述的REALTIMEPCR方法檢測18種（型亞型）呼吸道病毒，分析20112014年廣州市發(fā)熱呼吸道癥候群患者中229E、OC43、NL63、HKU1的流行病學(xué)情況。結(jié)果表明，4種冠狀病毒的總檢出率為442％1042355，HCOV合并HRV173％，18104及HCOV合并RSV144％，15104感染最常見不同年齡組P0188＞005、不同來源標(biāo)本P1000＞005中4種常見人類冠狀病毒的檢出率無明顯差異。2011年11月2014年12月HCOVS流行情況大致為HCOVS各季節(jié)均有分布其中OC43和NL63主要分布于2012年和2014年，呈兩年一次高峰期的典型特征，OC43各季節(jié)均有分布，但NL63主要集中于夏秋季610月229E與HKU1呈散在分布。HCOV感染患者最常見的臨床癥狀為發(fā)熱。大部分663％患者出現(xiàn)了下呼吸道感染，甚至出現(xiàn)重癥肺炎673％及死亡病例192％，說明HCOV感染不僅引起輕型呼吸道癥狀，還會引發(fā)嚴(yán)重疾病。此外，我們還通過通用型巢式PCR及基因測序，對20132014年不明原因肺炎患者中新型冠狀病毒進(jìn)行調(diào)查，以篩查出新型冠狀病毒。結(jié)果顯示，不明原因肺炎患者272份呼吸道標(biāo)本（鼻拭子標(biāo)本數(shù)N204，肺泡灌洗液N68）中，均無檢測出新型冠狀病毒。然而，由于重癥肺炎及死亡病例在不明原因肺炎中分別占993％27272和368％10272，提示UP可引發(fā)嚴(yán)重疾病。三、10年前后SARS患者核衣殼蛋白抗體效價變化的血清學(xué)研究以實(shí)驗(yàn)室前期BACTOBAC桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)的重組SARSNP作為抗原，進(jìn)一步優(yōu)化建立間接ELISA法，檢測10年前后SARS患者恢復(fù)期血清中SARSNP特異性IGG，分析SARSNPIGG水平變化情況。實(shí)驗(yàn)表明，基于桿狀病毒表達(dá)的間接ELISA法與其它病原體無交叉反應(yīng)。532份體檢者血清中，間接ELISA檢出率為113％6532，經(jīng)WESTERNBLOT確證陽性率為075％4532。該法的假陽性率為038％，特異性為9962％。同時測定了13名SARS患者10年前后的血清，總檢出率為95％（5760，N60，N表示13名SARS患者10年前、后的總血清標(biāo)本數(shù)），即敏感度為95％10年前的血清檢出率為982％（5455，N55，N表示13名SARS患者10年前的血清標(biāo)本數(shù)）10年后的血清（N5，N表示上述其中5名SARS患者10年后的血清標(biāo)本數(shù)）中，僅3份檢測為陽性。此外，5名SARS患者10年前SARSNPIGG最高效價由1∶160到1∶5120不等，10年后SARSNPIGG最高效價由1∶101∶160不等。10年前后SARS患者體內(nèi)SARSNPIGG水平呈明顯的下降趨勢，但部分患者SARSNPIGG抗體效價仍很高，說明SARSNPIGG可長期存在于患者體內(nèi)。小結(jié)綜上所述，本研究的必要性及意義如下1本研究成功建立了檢測18種（型亞型）呼吸道病毒的兩種反應(yīng)的REALTIMEPCR并進(jìn)行了臨床標(biāo)本評估。本方法簡便，涵蓋的病毒種類多，成本低，且具有臨床應(yīng)用價值，并為發(fā)熱呼吸道癥候群監(jiān)測平臺的建立及其在流行病學(xué)中的應(yīng)用提供了有力的技術(shù)支持。2分析發(fā)熱呼吸道癥候群患者中229E、OC43、NL63、HKU1的流行病學(xué)特征及臨床特征，對不明原因肺炎患者中新型冠狀病毒及臨床特征進(jìn)行調(diào)查，實(shí)時監(jiān)測呼吸道病原體的構(gòu)成及流行特征，對預(yù)防預(yù)警重大傳染病及新發(fā)傳染病的發(fā)生發(fā)展有重要的意義。3建立基于桿狀病毒表達(dá)重組SARSNP的間接ELISA法檢測SARSNP特異性抗體，調(diào)查SARS患者10年前后血清中SARSNP抗體水平的變化趨勢以及體檢者血清中SARSNP抗體的檢出情況。該法既可作為應(yīng)對SARS再次流行的儲備診斷方法，還可用于血清學(xué)研究觀察抗體水平變化，有助于進(jìn)一步了解機(jī)體對SARS的體液防御機(jī)制。

簡介：病毒以異養(yǎng)寄生的方式存在于近乎所有的生物中，有些病毒能對寄主造成危害甚至是死亡。傳統(tǒng)的病毒鑒定方法包括過濾篩選、組織培養(yǎng)、電子顯微鏡觀察、血清學(xué)、疫苗接種，以及細(xì)胞培養(yǎng)等，但這些方法都依賴對病毒的分離富集、病毒在蛋白和核酸水平上序列保守性等信息，往往對一些不易擴(kuò)增的病毒或者和已知病毒序列保守性很低的新病毒的鑒定就無能為力。病毒宏基因組學(xué)是一種新興的病毒組學(xué)研究技術(shù)，該方法不需要對病毒進(jìn)行培養(yǎng)，且在未知病毒序列的情況下，它可以直接以環(huán)境樣本中所有病毒的遺傳物質(zhì)為研究對象，快速地鑒定出樣本中的所有病毒組成。目前基于宏基因組學(xué)來對病毒樣品進(jìn)行研究的方法很多，包括對SMALLRNAS、TOTALRNADNA、VIRALRNADNA等分析。本論文主要應(yīng)用病毒宏基因組學(xué)方法，對具有病害癥狀的檳榔和煙草的植物樣本的小RNA進(jìn)行分析，鑒定獲得兩個新的長線性病毒通過對腹瀉嬰幼兒糞便樣品中病毒的富集和隨后的核酸分析，獲得了樣本中的病毒譜。對具有黃化癥狀的檳榔樣本中的小RNA進(jìn)行文庫構(gòu)建和高通量測序后獲得46，613，994條序列，組裝后生成11，246個CONTIGS，經(jīng)BLAST比對篩選發(fā)現(xiàn)在26個與已知病毒具有部分同源性的序列中有21個與長線形病毒具有部分同源性。選取LCHV1作為參考序列，經(jīng)RTPCR、5RACEPCR、3RACEPCR和SANGERSEQUENCING，最終發(fā)現(xiàn)了一種歸屬于VELARIVIRUS屬的新病毒APV1，全長16080BP，具有11個FS，其中F10是APV1所特有的，F(xiàn)1A和F4均具有兩段內(nèi)部重復(fù)序列，且F1A還具有兩段跨膜區(qū)，這些都是APV1有別于其它VELARIVIRUS屬中病毒的特點(diǎn)所在。APV1的鑒定將為未來研究病毒與檳榔黃化病之間的關(guān)系提供了基礎(chǔ)和依據(jù)。在具有葉鑲嵌、萎縮和黃化等病害癥狀煙草中鑒定了一種歸屬與長線形病毒的新病毒TV1AH。全長15，362BP，含有185BP的5UTR和330BP的3UTR，以及9個FS，包括病毒復(fù)制相關(guān)的F1，病毒組裝和轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的FS26，作為RNASILENCINGREPRESS來發(fā)揮作用的F7，以及功能未知的F8。這些FS產(chǎn)物均與MV1產(chǎn)物具有最高同源性4974％，8344％，5873％，6562％，5652％，6574％，4948％，3248％，4088％，此外還與其它長線形病毒具有不同程度的相似性。TV1AH是第一個在在煙草中被鑒定的長線形病毒，它的發(fā)現(xiàn)將為未來研究其與煙草病害之間的關(guān)系和病害防御起到重要作用。對腹瀉嬰幼兒糞便樣品中的病毒顆粒進(jìn)行富集、抽提RNA來構(gòu)建文庫、IONTRENT測序、數(shù)據(jù)質(zhì)量篩選后獲得2，806，916條序列。經(jīng)聚類和組裝生成63，448條，宏基因組分類顯示與病毒相關(guān)的2，911條中有29條歸為輪狀病毒。針對這29條序列在所有序列中執(zhí)行BLAT，在找到49條與輪狀病毒有關(guān)序列中有29條都比對到了輪狀病毒A1上，以輪狀病毒A1作為參考基因組，通過實(shí)驗(yàn)便可以獲得目的病毒序列。同時我們又將整個分析流程整合成為了兩個軟件，為未來在宏基因組中鑒定病毒提供方法指導(dǎo)。

簡介：流行性感冒是由甲、乙、丙3型流感病毒（INFLUENZAVIRUS，IAV）引起的急性呼吸道傳染病。由于該病經(jīng)呼吸道飛沫傳播，且流感病毒易發(fā)生抗原性變異，人群對變異株普遍易感，所以容易迅速導(dǎo)致世界性的流感大流行。加之目前禽流感在世界各國此起彼伏的暴發(fā)和流行，無疑將會增加禽流感與人流感病毒發(fā)生基因重組的機(jī)會，增加新流感病毒株出現(xiàn)的幾率由流感病毒引起下一次世界性的人類流感大流行似乎不可避免，只是時間的問題。利用動物模型可以很好模擬IAV感染人體引發(fā)的呼吸系統(tǒng)疾病和機(jī)體免疫反應(yīng)。成功的IAV感染模型包括小鼠、大鼠、雪貂、豬和靈長類猴等動物。利用基因敲除小鼠模型可針對特定的免疫細(xì)胞因子進(jìn)行具體分析。鑒于CXCL4在炎癥、凝血等眾多生理及病理反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。機(jī)體多種免疫細(xì)胞功能的發(fā)揮，我們的工作建立CXCL4敲除小鼠感染IAV模型，對CXCL4在IAV感染過程中的生物學(xué)作用進(jìn)行探索。我們的研究發(fā)現(xiàn)CXCL4對小鼠抵抗致命H1N1病毒攻擊具有保護(hù)作用，CXCL4的缺失導(dǎo)致感染小鼠病毒清除能力減弱帶來感染后期嚴(yán)重的肺部炎癥損傷和肺水腫，造成感染后小鼠體重急劇下降和高死亡率。此外，缺失CXCL4導(dǎo)致感染初期小鼠肺灌洗液中天然免疫嗜中性粒細(xì)胞顯著減少，而單核巨噬細(xì)胞相對增加。缺失CXCL4沒有影響到感染后期小鼠T、B淋巴細(xì)胞獲得性免疫反應(yīng)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，缺失CXCL4抑制了嗜中性粒細(xì)胞募集到感染小鼠肺組織而沒有影響骨髓內(nèi)嗜中性粒細(xì)胞的發(fā)生。綜合我們的研究結(jié)果CXCL4在流感病毒呼吸道感染中具有重要的保護(hù)性作用。CXCL4可通過促進(jìn)嗜中性粒細(xì)胞浸潤入病毒感染肺組織來發(fā)揮抗病毒免疫效應(yīng)。

簡介：目的了解2014年重慶區(qū)域諾如病毒感染所致兒童急性腹瀉的感染現(xiàn)狀、臨床特征、流行基因型以及發(fā)生基因重組情況。方法2014年1月至12月在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院門診檢驗(yàn)科收集符合納入條件的腹瀉標(biāo)本511例，同時記錄患兒的臨床資料，用RTPCR法分別對諾如病毒GI和GII基因組的衣殼蛋白（CAPSID）區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，再對陽性PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，并對序列進(jìn)行基因分型及構(gòu)建進(jìn)化樹；為進(jìn)行重組分析，再次用RTPCR法對NV陽性標(biāo)本的部分RDRP區(qū)和CAPSID區(qū)同時進(jìn)行擴(kuò)增，然后基因分型，如果RDRP區(qū)和CAPSID區(qū)分型不一致則考慮基因重組，然后選取重組代表株用SIMPLOT再次進(jìn)行鑒定。結(jié)果共收集到符合條件的標(biāo)本511例（男290例，女221例），未檢測出NVGI型，共檢出NVGII型67例，檢出率131％67511，男性38例，陽性率為131％（38290）女性29例，陽性率為131％（29221），男女NV檢出率差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Χ20000，P005）。除4月份外，其余各月份均有NV陽性，以8月至10月為檢出高峰，不同月份間NV檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Χ258583，P結(jié)論諾如病毒是重慶區(qū)域小兒病毒性腹瀉的常見病原，2014年檢出率為131，男女NV檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。諾如病毒在重慶地區(qū)的流行高峰主要集中在8月至10月，檢出率最高年齡組為7到12月齡，發(fā)病年齡以小于2歲的嬰幼兒為主，嘔吐為NV腹瀉最常見的伴隨癥狀。2014年重慶地區(qū)NV有5種流行基因型按CAPSID區(qū)分型，GII4SYDNEY2012為最主要的流行株，其次分別是GII3，GII17，GII6和GII14。2014年重慶地區(qū)NV重組現(xiàn)象十分明顯，此次研究共檢測到4種重組株，分別是GIIEGII4SYDNEY2012、GII12GII3、GII7GII6、GII7GII14。

簡介：人類冠狀病毒HKU1屬于冠狀病毒亞科Β屬A組群冠狀病毒，主要引起人類自限性上下呼吸道感染在免疫系統(tǒng)受損或低下的人群中情況更為嚴(yán)重，特別是哮喘病人和新生兒童。冠狀病毒基因組編碼復(fù)制酶蛋白基因、結(jié)構(gòu)蛋白基因和附屬蛋白基因。復(fù)制酶多蛋白被主蛋白酶和附屬蛋白酶切割成16個非結(jié)構(gòu)蛋白，進(jìn)而組裝成復(fù)制、轉(zhuǎn)錄復(fù)合體，介導(dǎo)病毒傳播。非結(jié)構(gòu)蛋白9（NSP9）是一種DNARNA結(jié)合蛋白，在病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄過程中起著至關(guān)重要的作用。Β屬冠狀病毒基因組3‘非翻譯區(qū)（UTR）存在兩個保守性的二級結(jié)構(gòu)凸出莖環(huán)和假結(jié)。在研究小鼠肝炎病毒基因組3‘非翻譯區(qū)的過程中發(fā)現(xiàn)假結(jié)處6個堿基（AACAAG）的插入會造成病毒幾近死亡，病毒傳代實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)一個病毒回復(fù)突變體U13017G（NSP9N60K）能救活病毒，但是其挽救病毒的機(jī)制未知。小鼠肝炎病毒NSP9蛋白結(jié)構(gòu)尚未被解析，但N60在Β屬冠狀病毒NSP9蛋白一級序列中是相對保守的。因此，選擇人類冠狀病毒HKU1NSP9為模型，研究NSP9與病毒基因組3’UTR的相互作用機(jī)制。此篇論文以人類冠狀病毒HKU1非結(jié)構(gòu)蛋白9為研究對象，構(gòu)建N60K克隆，通過一系列表達(dá)純化手段，獲得了純度較高的HCOVHKU1NSP9N60K蛋白。經(jīng)過反復(fù)的結(jié)晶嘗試晶體，獲得衍射分辨率高達(dá)26埃的蛋白晶體。

簡介：碩士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位以確診的宮頸癌為觀察終點(diǎn)探討高危型人乳頭瘤病毒以確診的宮頸癌為觀察終點(diǎn)探討高危型人乳頭瘤病毒（HRHPV）和宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢測的篩查價值）和宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢測的篩查價值研究生生王東閣王東閣導(dǎo)師師黃向華黃向華教授教授專業(yè)業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)二級學(xué)院二級學(xué)院河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院20162016年3月授予單位代碼授予單位代碼10089學(xué)號或申請?zhí)枌W(xué)號或申請?zhí)?0133041中國圖書分類號中國圖書分類號R33HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要2英文縮寫4研究論文以確診的宮頸癌為觀察終點(diǎn)探討高危型人乳頭瘤病毒（HRHPV和宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢測的篩查價值前言5材料與方法7結(jié)果8附表10討論13結(jié)論16參考文獻(xiàn)17綜述宮頸癌組織中一定能檢測到人乳頭狀瘤病毒嗎20致謝27個人簡歷28

簡介：目的橫斷面調(diào)查急性胰腺炎AP患者巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染以及重度急性胰腺炎SAP患者HCMV潛伏激活感染血清學(xué)及臨床特征，初步探討SAP患者急性期巨細(xì)胞病毒激活情況。方法收集2013年10月2015年7月我院因急性胰腺炎住院的456名患者入院時的血清標(biāo)本，同時收集普通人群血清標(biāo)本280例為對照，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測所有標(biāo)本中HCMVIGG和IGM值，分析AP患者感染HCMV的血清學(xué)及臨床特征。同時測定入院時及入院第14天128例SAP患者（2013年10月2016年1月期間入院）HCMVIGM值，結(jié)合臨床特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果AP組和對照組血清HCMVIGG陽性率分別為9605和9607，兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）。AP組和對照組血清HCMVIGM陽性率分別為987和464，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。在AP患者中，HCMVIGG陽性率在不同的年齡、不同的居住地、不同的性別、不同文化程度上有明顯差異（P＜005），而HCMVIGG在不同的AP病因、嚴(yán)重程度、體重指數(shù)、吸煙等無明顯差異（P＞005）。入院第14天128例SAP患者重復(fù)檢測HCMVIGM陽性率為28136128，與入院時比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005，其中IGM由陰性變?yōu)殛栃?5例，血清學(xué)轉(zhuǎn)換率為117（15128）。結(jié)合相關(guān)臨床特征比較，女性、大齡者、農(nóng)村居所更易發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換，血清學(xué)轉(zhuǎn)換組呼吸機(jī)使用率更高，ICU時間及總住院時間更長。結(jié)論AP患者HCMVIGG陽性率超過90，與普通人群無明顯差異；而AP患者HCMVIGM陽性率高于普通人群，且重度AP陽性率較高。而不同年齡、不同居住地、不同性別、不同文化程度的AP患者的HCMV既往感染率有明顯差異；而在不同病因、嚴(yán)重程度、體重指數(shù)、是否吸煙等因素上無明顯差異。重度急性胰腺炎患者急性期存在巨細(xì)胞病毒潛伏再激活，與臨床結(jié)局有關(guān)。

簡介：學(xué)校代碼10459學(xué)號或申請?zhí)?01212443312密級公開碩士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)CCDC67轉(zhuǎn)染甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞生物學(xué)活性的鑒定本課題受國家自然科學(xué)基金（81372863）資助作者姓名許建輝導(dǎo)師姓名殷德濤學(xué)科門類醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱外科學(xué)（普通外科）培養(yǎng)院系第一附屬醫(yī)院完成時間2015年3月原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月日

簡介：背景隨著自身抗體檢測手段的普及以及生活水平的提高，自身免疫性肝?。ˋILD）和非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）等慢性非病毒性肝病的發(fā)病率逐漸提高，已經(jīng)成為威脅人類健康的主要肝臟疾病之一。第一部分膠原三螺旋重復(fù)蛋白1CTHRC1減輕小鼠膽汁淤積性肝纖維化目的研究CTHRC1在膽汁淤積性肝纖維化中的作用及機(jī)制。方法建立膽汁淤積性肝纖維化動物模型，通過腺病毒載體調(diào)控CTHRC1；培養(yǎng)肝星狀細(xì)胞，行染色質(zhì)免疫沉淀、PCR、WESTERNBLOT、激光共聚焦、免疫共沉淀等技術(shù)研究CTHRC1影響肝星狀細(xì)胞功能的機(jī)制。結(jié)果膽汁淤積性肝病中CTHRC1表達(dá)增高；CTHRC1通過促進(jìn)PSMAD3經(jīng)蛋白酶體途徑降解，抑制纖維化相關(guān)基因合成，從而抑制膽汁淤積性肝纖維化。結(jié)論CTHRC1通過抑制TGFΒSMAD信號通路參與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。第二部分RANKLRANKOPG信號通路參與原發(fā)性膽汁性肝硬化的發(fā)生發(fā)展目的研究RANKLRANKOPG信號通路在PBC發(fā)病中的作用。方法免疫組化及激光共聚焦明確RANKLRANKOPG信號通路的表達(dá)。結(jié)果PBC中，RANKLRANKOPG表達(dá)增高，且主要表達(dá)于免疫細(xì)胞，并與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)。結(jié)論P(yáng)BC中，RANKLRANKOPG信號通路活化，通過影響肝內(nèi)免疫功能參與其發(fā)病。第三部分自身免疫性肝病中細(xì)胞穿入種類及意義的研究目的研究自身免疫性肝?。ˋILD）中細(xì)胞穿入種類及意義。方法通過HE染色及激光共聚焦，比較AIH、PBC患者中發(fā)生穿入的種類及相關(guān)性。結(jié)果淋巴細(xì)胞穿入肝細(xì)胞多見于AIH，與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)；PBC中淋巴細(xì)胞穿入膽管更常見，與疾病分期呈正相關(guān)；CD8T淋巴細(xì)胞是發(fā)生穿入的主要細(xì)胞。結(jié)論穿入現(xiàn)象參與AILD的發(fā)病機(jī)制。第四部分抑制富半胱氨酸蛋白61（CCN1）減輕飲食誘導(dǎo)的小鼠NAFLD目的研究CCN1在NAFLD中作用。方法ELISA、免疫組化、PCR，WESTERNBLOT檢測NAFLD患者及動物模型中CCN1表達(dá)水平；腺病毒載體調(diào)控CCN1基因表達(dá)，研究對NAFLD的影響。結(jié)果NAFLD中，CCN1表達(dá)增高；CCN1通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡、脂肪變以及肝內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤等幾方面參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展。結(jié)論CCN1參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展，有望成為NAFLD治療的新靶點(diǎn)。

簡介：研究目的調(diào)查重慶地區(qū)輪狀病毒流行情況，總結(jié)輪狀病毒腸炎的臨床特征，分析輪狀病毒在重慶的分子流行病學(xué)特點(diǎn)，探討輪狀病毒疫苗在重慶地區(qū)的使用價值，為輪狀病毒腸炎防治策略的制定提供參考依據(jù)。研究方法采集201401至201412月（12個月）期間于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院門診就診、年齡5歲以內(nèi)、診斷急性腹瀉且除外侵襲性腹瀉的患兒新鮮糞便樣本，同時搜集臨床相關(guān)資料；新鮮糞便標(biāo)本采用膠體金檢測法檢測輪狀病毒抗原；經(jīng)膠體金法檢測為輪狀病毒陽性的標(biāo)本進(jìn)一步采用RTPCR（逆轉(zhuǎn)錄PCR）擴(kuò)增，留取擴(kuò)增成功的產(chǎn)物進(jìn)行測序區(qū)分VP7G、VP4P型別。研究結(jié)果1）符合要求的樣本共495例，其中男性277例，女性218例。輪狀病毒陽性率為3798％188495，男性與女性構(gòu)成比分別為5904111188、419677188，陽性率分別為4007111277、353277218，男女沒有顯著性差異（Χ21169，P028）。188例輪狀病毒腸炎患兒中2）臨床資料193234176的輪狀病毒腸炎患兒僅有腹瀉癥狀。嘔吐是輪狀病毒腸炎最常見的伴隨癥狀6648，117176，與諾如病毒腸炎相比較，兩者是否伴有嘔吐無顯著性差異。輪狀病毒腸炎較諾如病毒腸炎更易引起發(fā)熱，且輪狀病毒引起的發(fā)熱程度更高Χ2569，P0017。兩者均有60以上是在腹瀉3天內(nèi)就診，但輪狀病毒腸炎在腹瀉后3天內(nèi)就診的更多Χ2648，P0013。輪狀病毒腸炎抗生素使用率125022176。3）GP基因分型188例經(jīng)膠體金法確認(rèn)的輪狀病毒陽性標(biāo)本，對其中7606143188經(jīng)RTPCR擴(kuò)增成功的標(biāo)本進(jìn)行VP7及VP4分型。優(yōu)勢流行G基因型G96643，95143，其次為G11119，16143、G2559，8103、G3979，14143，未分出型別的有70010143。P優(yōu)勢流行基因型為P88881，127143及P4629，9143，4907143未分出型別，未檢測出P6等基因型。此次檢測出的GP組合基因型有G9P86224，61143、G1P81049，15143、G3P8979，14143、G2P4490，7143、G2P8070，1143及G9P4070，1143，111916143未分出型別。結(jié)論輪狀病毒是引起5歲以下兒童急性非侵襲性腹瀉的主要病原體，6月3歲的嬰幼兒是感染的高峰年齡，男性與女性發(fā)病率無差異；在重慶地區(qū)輪狀病毒腸炎流行存在明顯的季節(jié)性，幾乎全年散發(fā)，秋冬季節(jié)明顯，其中氣溫最低的11、12、1月的陽性率明顯高于其他月份。輪狀病毒腸炎常伴有嘔吐、發(fā)熱及呼吸道癥狀，其中嘔吐是其最常見伴隨癥狀，極少僅伴有發(fā)熱或者呼吸道癥狀；其發(fā)熱以中低熱為主，呼吸道癥狀較輕微；輪狀病毒較諾如病毒引起的腹瀉伴有發(fā)熱更常見，且發(fā)熱的程度更高。輪狀病毒腸炎治療不需要使用抗生素，但目前仍有抗生素使用不合理的情況。2014年重慶地區(qū)的優(yōu)勢流行G基因型為G9，組合基因型以G9P8為優(yōu)勢流行株，其次為G1P8、G3P8，重慶地區(qū)的輪狀病毒分子流行病學(xué)表現(xiàn)為復(fù)雜且多變的趨勢。輪狀病毒疫苗RV1及RV5在重慶地區(qū)的使用提供了一定的參考價值。

簡介：點(diǎn)擊查看更多替比夫定初治慢性乙型肝炎患者早期病毒學(xué)應(yīng)答預(yù)測模型研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：據(jù)世界衛(wèi)生組織最新統(tǒng)計(jì)，全世界大約有24億人感染乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV，研究表明慢性乙型肝炎患者每年內(nèi)約有2％～6％逐漸發(fā)展為肝硬化、肝癌，每年大約有65萬人死于慢性乙型肝炎。目前慢性HBV感染的自然史分為4個階段，包括免疫耐受期IMMUNETOLERANTPHASE、免疫清除期IMMUNECLEARANCEPHASE、非活動復(fù)制期INACTIVEPHASE和再活動期REACTIVATIONPHASE。HBEAG自然轉(zhuǎn)換需經(jīng)歷一個漫長的時期，而抗病毒治療的HBEAG轉(zhuǎn)換率也只有40％左右812，離我們理想的轉(zhuǎn)換率還有一定的差距。病毒的變異影響著病毒的表達(dá)和復(fù)制，最常見的即為前C區(qū)和BCP區(qū)變異，前C區(qū)變異常見為G1896A突變后形成了一個新的終止密碼子，從而使HBEAG的表達(dá)被終止。BCP區(qū)最常見的變異是A1762T和G1764A的雙點(diǎn)突變，通過降低前C區(qū)MRNA的轉(zhuǎn)錄水平從而減少HBEAG合成。多項(xiàng)全基因組關(guān)聯(lián)研究（GENOMEWIDEASSOCIATIONSTUDYGWAS）證明了HLADPDQ、IL28B在HBV持續(xù)感染和清除過程中有著顯著的相關(guān)性。慢性HBV感染的進(jìn)程和結(jié)局受到病毒因素PCBCP和宿主因素HLADPDQ、IL28B兩方面的影響，但是自發(fā)HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換的免疫遺傳學(xué)機(jī)制尚不清楚。目前也還沒有針對HBEAG轉(zhuǎn)換的大樣本隊(duì)列GWAS研究，所以，我們前瞻性的收集了低年齡HBEAG未轉(zhuǎn)換（年齡小于20歲，HBEAG陽性）、低年齡HBEAG轉(zhuǎn)換（年齡小于20歲，HBEAG陰性）、高年齡HBEAG轉(zhuǎn)換（年齡大于50歲，HBEAG陰性）和高年齡HBEAG未轉(zhuǎn)換（年齡大于50歲，HBEAG陽性）四組病例樣本，通過對PCBCP變異和HLADPDQ、IL28B基因多態(tài)性的分析，從病毒和宿主兩個方面對HBEAG早發(fā)血清學(xué)轉(zhuǎn)換進(jìn)行研究，希望能進(jìn)一步證明HLADPDQ、IL28B單核苷酸多態(tài)性及PCBCP變異與HBEAG早發(fā)遲發(fā)血清學(xué)轉(zhuǎn)換的關(guān)系。我們的主要研究結(jié)果如下1第一階段收集CHB患者共437例，低年齡HBEAG未轉(zhuǎn)換組106例，低年齡HBEAG轉(zhuǎn)換組179例，高年齡HBEAG轉(zhuǎn)換組90例及高年齡HBEAG未轉(zhuǎn)換組62例。低年齡HBEAG轉(zhuǎn)換組男性患者比例明顯高于高年齡HBEAG未轉(zhuǎn)換組659％VS467％。患者進(jìn)入免疫清除期的機(jī)率明顯高于再活動期237％，355％VS95％，ALT在正常范圍內(nèi)時比較四組病例的ALT和HBVDNA，HBEAG陽性組均顯著高于HBEAG陰性組241±833，69±12VS20687，42±13。HBEAG陰性患者中，高年齡段的HBVDNA陽性率為422％，明顯高于低年齡患者的184％（X2174，P＜005）。2低年齡HBEAG未轉(zhuǎn)換組，全為野生型，并未發(fā)生PC或BPC位點(diǎn)突變低年齡HBEAG轉(zhuǎn)換組，PC區(qū)變異占69％但BCP雙位點(diǎn)突變及野生型，仍占約25％高年齡HBEAG轉(zhuǎn)換組，BCP區(qū)變異和野生型分別占了24％和17％。高年齡HBEAG未轉(zhuǎn)換組，有6例11％患者雖然發(fā)生了PC區(qū)變異，但仍然表現(xiàn)為HBEAG持續(xù)陽性。高年齡HBEAG陽性患者，PCBCP變異型與野性型相比，在年齡、性別、ALT、HBVDNA及HBSAG水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BCP突變型HBEAG滴度顯著低于野生型患者T31，P＜005。PC突變型HBEAG滴度低于野生型患者，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異T14，P＞005。3HBV持續(xù)陽性患者RS12979860T和RS8099917G等位頻率90％，85％顯著高于早發(fā)轉(zhuǎn)換患者34％，33％P145104，P315104，為危險等位。IL28BRS12979860CC和RS8099917TT基因型與慢性HBV患者HBEAG早發(fā)血清學(xué)轉(zhuǎn)換顯著關(guān)聯(lián)RS12979860P874104RS8099917P215103IL28BRS8099917、RS12979860GT單倍型與HBEAG持續(xù)陽性患者顯著關(guān)聯(lián)P239103，IL28BRS8099917、RS12979860TC單倍型與HBEAG早發(fā)血清學(xué)發(fā)轉(zhuǎn)換患者顯著關(guān)聯(lián)P239103。4HLADPDQ與HBEAG自發(fā)血清學(xué)轉(zhuǎn)換并無明顯的相關(guān)性。總之，本研究通過PCBCP變異實(shí)驗(yàn)證明了病毒變異能降低HBEAG水平，并影響HBEAG轉(zhuǎn)換率，但病毒因素并不能完全解釋HBEAG轉(zhuǎn)換結(jié)局通過HLADPDQ、IL28B與HBEAG早發(fā)或遲發(fā)血清學(xué)轉(zhuǎn)換的研究，從宿主遺傳方面證明了IL28B與HBEAG早發(fā)轉(zhuǎn)換的相關(guān)性，而HLADPDQ并沒有發(fā)現(xiàn)明顯的相關(guān)性。

簡介：目的掌握石家莊地區(qū)住院兒童急性下呼吸道感染ACUTELOWRESPIRATYTRACTINFECTIONALRTI病毒病原譜構(gòu)成和流行病特征，為呼吸道感染的診斷和防治工作提供科學(xué)依據(jù)。方法1、收集2015年3月至2016年2月間河北省兒童醫(yī)院呼吸內(nèi)科診斷為急性下呼吸道感染的住院患兒的支氣管肺泡灌洗液BRONCHOALVEOLARLAVAGEFLUID，BALF標(biāo)本558份。2、提取BALF標(biāo)本核酸，采用多重實(shí)時熒光定量PCR（MULTIPLEXREALTIMEPCR）方法檢測15種呼吸道病毒核酸，利用計(jì)算機(jī)軟件判定病毒種類和型別。3、采用EXCEL和SPSS170軟件對15種病毒在兒童ALRTI中的流行病學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為005。結(jié)果1、呼吸道病毒檢出情況2015年3月至2016年2月共收集住院患兒支氣管肺泡灌洗液（BALF）標(biāo)本558份有261份標(biāo)本病毒陽性，總檢出率為4677％261558。其中以鼻病毒最為常見，檢出率為1201％；其次為副流感病毒3型，檢出率為1075％60558；檢出陽性率居于第三、第四位的分別為呼吸道合胞病毒789％和腺病毒699％。乙型流感病毒檢出率為358％；博卡病毒和偏肺病毒檢出率均為341％；甲型流感病毒檢出率為251％；副流感病毒1型檢出率為232％；冠狀病毒OC43HKU1和冠狀病毒229ENL63和檢出率均為215％12558；副流感病毒4型檢出率為197％；副流感病毒2型檢出率為072％；未檢出腸道病毒和中東呼吸綜合征病毒。2、性別感染情況558例住院患兒中男性342例，檢出病毒陽性162例，檢出率為4708％；女性216例，檢出病毒陽性100例，檢出率為4630％，男女之間病毒陽性檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異20047，P0828。各種病毒的男女檢出率均無差異P均005。3、不同年齡感染情況0～1歲患兒的病毒檢出率為5455％4277，1～2歲患兒的病毒檢出率為6373％65102，2～3歲患兒的病毒檢出率為5645％3562，3～4歲患兒的病毒檢出率為3906％2564，4～5歲患兒的病毒檢出率為4130％1946，＞5歲患兒的病毒檢出率為3623％75207。各年齡段之間病毒陽性檢出率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異233374，P＜0001，尤以1～2歲年齡段病毒陽性檢出率最高，且不同病毒檢出率在各年齡段分布各有特點(diǎn)。4、季節(jié)檢出情況每個月均可檢出病毒，2016年2月的病毒陽性檢出率最高，為7500。病毒總檢出率在四季分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異2135953，P＜0001，以冬季和春季檢出率最高，分別為5440％和5347％秋季最低。5、混合感染檢出情況261份陽性標(biāo)本中62份檢出兩種及以上病毒混合檢出率為2375％，其中三重感染8份，四重感染2份?；旌蠙z出病毒以HRV，PIV3和RSV最常見。各個月份中病毒感染均存在混合檢出的情況，其中以2016年1月至2016年2月病毒的混合檢出率最高。結(jié)論1、2015年3月至2016年2月期間ALRTI住院兒童病毒檢出率為4677％，兩種及以上病毒混合感染率為2375％。2、引起石家莊地區(qū)兒童ALRTI的病毒中居前五位的是鼻病毒、副流感病毒3型、呼吸道合胞病毒、腺病毒和乙型流感病毒，近年來新發(fā)現(xiàn)的博卡病毒、偏肺病毒、冠狀病毒229ENL63和冠狀病毒OC43HKU1也有較高的檢出率。3、病毒流行在男女分布上無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在各年齡段之間的分布有差異，其中以1～2歲之間患兒病毒檢出率最高。4、不同呼吸道病毒流行有季節(jié)性差異，呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒和冠狀病毒OC43HKU1主要流行季節(jié)為冬春季冠狀病毒229ENL63、偏肺病毒主要流行季節(jié)為冬季，鼻病毒流行季節(jié)為春秋季，副流感病毒3型流行季節(jié)為春夏季博卡病毒流行季節(jié)為夏冬季。5、多重實(shí)時熒光定量PCR在監(jiān)測呼吸道病毒感染方面快速、簡單，實(shí)驗(yàn)室污染機(jī)會減少，值得推廣。

簡介：溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會主席答辯委員會成員論文答辯日期溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3．1SF9昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)???????????．243．2BACMIDFGF8B轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞????????．．243．3收獲病毒??????????????．243．4病毒滴度的測定????????????．253．5蛋白表達(dá)條件初步優(yōu)化??????????．253．6FGF8B蛋白的純化???????????．．26實(shí)驗(yàn)結(jié)果???????????????．．264．1正常及感染病毒之后的SF9昆蟲細(xì)胞??????．264．2昆蟲細(xì)胞的活細(xì)胞率隨病毒侵染時間的變化????．274．3FGF8B表達(dá)條件優(yōu)化???????????274．4FGF8B蛋白的純化???????????．．28分析與討論???????????????29第三部分FGF8B的生物活性研究引言?????????????????30實(shí)驗(yàn)儀器與材料?????????????．．30實(shí)驗(yàn)方法一????一．．???．．????．．．??313．1FGF8B細(xì)胞促增殖活性測定?????????313．2帕金森病細(xì)胞模型的建立?????????．．313．3不同濃度FGF8B，BFGF蛋白對帕金森病細(xì)胞模型促增殖作用．313．4FGF8B重組蛋白帕金森病細(xì)胞模型的抗凋亡作用???32實(shí)驗(yàn)結(jié)果???????????????．．324．1FGF8B，BFGF蛋白對NLH3T3細(xì)胞的促增殖作用???．323

簡介：目的非酒精性脂肪性肝病NONALCOHOLICFATTYLIVERDISEASENAFLD是代謝綜合征在肝臟的具體表現(xiàn)。NAFLD病理學(xué)變化，主要為肝細(xì)胞的脂肪變性。疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝NONALCOHOLICSIMPLEFATTYLIVERNAFL、非酒精性脂肪性肝炎NONALCOHOLICSTEATOHEPATITISHNASH、肝硬化、肝細(xì)胞癌（HCC）。隨著肥胖相關(guān)的代謝綜合征在世界范圍的流行，近些年亞洲國家NAFLD增長迅速、低齡化。在中國發(fā)達(dá)地區(qū)，NAFLD患病率約達(dá)15％。然而NAFLD的病因和發(fā)病機(jī)制并不明確。我國仍是病毒性肝炎高發(fā)國家，以慢性HBV和HCV感染為主。而隨著NAFLD的流行，慢性病毒性肝炎合并NAFLD的發(fā)病率逐年上升，有些地區(qū)發(fā)病率高達(dá)27Q，這兩種疾病的合并引起了我們廣泛關(guān)注。目前，關(guān)于HCV合并NAFLD，已有一些比較明確研究。NAFLD可促進(jìn)HCV患者進(jìn)展為肝硬化、肝癌，而HCV又可導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變性，因而形成正反饋進(jìn)一步加重NAFLD的進(jìn)展。而HBV合并NAFLD患者中，HBV復(fù)制和NAFLD相互關(guān)系，尚無定論。目前，該領(lǐng)域的研究主要集中在對一些臨床現(xiàn)象的觀察，且研究結(jié)果尚不一致。NAFLD的研究主要集中在對一些臨床現(xiàn)象的觀察，且研究結(jié)果尚不一致。部分研究認(rèn)為，NAFLD促進(jìn)HBV清除；有些研究表示，NAFLD對HBV復(fù)制沒有影響；還有研究證明，脂肪肝可促進(jìn)HBV復(fù)制，降低CHB的抗病毒療效，增加CHB進(jìn)展為肝硬化、HCC的風(fēng)險。關(guān)于HBV是否也如HCV一樣，可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變是否會引起脂質(zhì)代謝紊亂目前這方面的研究主要利用通過轉(zhuǎn)染HBV相關(guān)質(zhì)粒入肝癌等細(xì)胞模型以及臨床病人標(biāo)本，臨床病人主要通過超聲診斷脂肪肝，病人肝穿樣本為診斷脂肪肝的金標(biāo)準(zhǔn)，但存在樣本數(shù)量有限以及病人的依從性等不足。動物模型能避免以上兩種模型的缺陷，但目前乙型病毒性肝炎合并NAFLD的動物模型主要是轉(zhuǎn)基因小鼠，缺乏免疫完全的乙型肝炎病毒持續(xù)復(fù)制的小鼠模型，而本研究提供的動物模型可以彌補(bǔ)以上的不足。本研究的具體目標(biāo)如下1建立HBV持續(xù)復(fù)制合并NAFLD的動物模型；2觀察NAFLD對HBV復(fù)制的影響以及動態(tài)觀察HBV對脂質(zhì)代謝的影響，主要是對膽固醇的合成和代謝的影響，并探討相關(guān)代謝分子機(jī)制。方法1通過尾靜脈高壓注射基因B型的HBV復(fù)制DNA質(zhì)粒（PGEM4ZHBV13）到FVBN雄性小鼠肝細(xì)胞內(nèi)，隔日眼內(nèi)眥靜脈采血檢測血清HBEAG的滴度HBEAG陽性小鼠開始采用60高脂飼料喂養(yǎng)14周，觀察小鼠的狀態(tài)、體重以及習(xí)性的改變，檢測血清生化指標(biāo)（ALT、AST、GLUCOSE、HDL、LDL、TG、TC、胰島素）和動態(tài)觀察肝組織切片的變化（HE、油紅染色）。2采用免疫組化測肝組織HBCAG表達(dá)，免疫化學(xué)發(fā)光方法測血清HBEAG和肝組織HBSAG。定量PCR以及SOUTHERNBLOT測肝組織HBVDNA，觀察HBV復(fù)制的變化。肝組織勻漿酶法定量檢測TG和TC，RTPCR測肝組織TC合成和代謝相關(guān)基因的表達(dá)來觀察HBV持續(xù)復(fù)制對TC代謝的影響。3采用MDATBA法，檢測肝組織脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA。結(jié)果1成功建立HBV持續(xù)復(fù)制合并NAFLD的動物模型。隔日采血，小鼠血清HBEAG帶原率85左右。高脂飲食喂養(yǎng)14周，F(xiàn)VBN小鼠不喜活動，體型肥胖，毛發(fā)油膩，體重明顯增加；小鼠血清HBEAG帶原率下降為70左右；外周血生化指標(biāo)（ALT、AST、GLUCOSE、HDL、LDL、TG、TC、胰島素）及HOMAIR明顯升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P2免疫組化表明HBCAG在HBV、HBV合并NAFLD組的肝細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)，高倍視野下，陽性細(xì)胞數(shù)（400倍），在HBV合并NAFLD組降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P3酶法檢測肝組織TG，HFD組較ND組明顯增加且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P4MDATBA法檢測肝組織脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA，HBV組較HBV合并NAFLD組、NAFLD組、CONTROL組明顯增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P結(jié)論1本研究成功建立HBV持續(xù)復(fù)制合并NAFLD小鼠模型，為研究二者之間的相互關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。2在該模型中，NAFLD可以抑制HBV的復(fù)制，降低外周血HBEAG、肝組織HBSAG和HBCAG。3在該模型中，HBV持續(xù)復(fù)制，可影響TC代謝相關(guān)基因的表達(dá)。4在該模型中，HBV持續(xù)復(fù)制，促進(jìn)脂質(zhì)氧化，增強(qiáng)肝組織的氧化應(yīng)激。