簡介：雞傳染性支氣管炎AVIANINFECTIOUSBRONCHITIS，IB是由雞傳染性支氣管炎病毒AVIANINFECTIOUSBRONCHITISVIRUS，IBV引起的一種急性、高度接觸傳染性疾病，其臨床特征為病雞咳嗽、噴嚏、氣管啰音；幼雞流鼻液蛋雞產(chǎn)蛋數(shù)量和品質(zhì)下降，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一。疫苗免疫是當(dāng)前預(yù)防和控制雞傳染性支氣管炎的主要措施，針對不同致病型或血清型的病毒，國內(nèi)外均有多種疫苗毒株和疫苗效力評價用強毒株。一些毒株用傳統(tǒng)的種毒鑒定方法很難準(zhǔn)確鑒別，尤其是血清型相同的毒株，因此有必要建立分子生物學(xué)鑒別方法，進(jìn)一步完善IBV特異性檢驗方法，從而對IBV種毒進(jìn)行鑒定，并對國內(nèi)外疫苗進(jìn)行純凈性檢測。本研究以中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所菌種中心保存的不同年代的32株H120株、H52株和M41株種毒為研究對象，采用自行設(shè)計的特異性引物經(jīng)RTPCR技術(shù)擴增得到病毒的S1蛋白基因片段。經(jīng)過序列分析，種毒H52中，1993年3月25日與1993年3月28日凍干的H52種毒的S1基因序列與其他代次不同，但與M41株一致。查閱種毒原始記錄，該批次種毒檢定不合格，安全檢驗表明接種該批次H52病毒的雞出現(xiàn)了呼吸噦音、甩頭等癥狀。1983年10月7日和1992年12月凍干的種毒與其他幾株相比，分別存在2個和9個核苷酸突變。H120種毒中未發(fā)現(xiàn)明顯堿基變異。M41株可分成兩組79年、88年、91年、96年、93年4月、01年凍干的種毒序列一致；而76年、93年3月、06年凍干的種毒序列一致，與H120相似。將從GENBANK上下載的H52株、H120株、M41株以及歐洲使用的疫苗491株的全基因序列全長276KB進(jìn)行比對分析，從中找出他們之間序列差異較明顯的區(qū)域，使用自行設(shè)計的四對引物引物對A、引物對B、引物對C、引物對D對這四種毒株進(jìn)行擴增。用引物對A時，能擴增出M41株全基因組序列中2900～4690BP處長度為1791BP的目的片斷，所需的M41株最低病毒滴度為1035EID50ML，而無法擴增出H52株和H120株，因此用該對特異性引物能夠區(qū)分M41株與H52株、H120株。用引物對B時，能夠擴增出H52株和H120株全基因組序列中21588BP～23288BP處長度為1700BP的目的片斷，所需的H120H52株最低病毒滴度為1035EID50ML，再利用限制性內(nèi)切酶NAEI對PCR純化產(chǎn)物進(jìn)行酶切，H120株能夠被切成1000BP和700BP兩個片斷，而H52株的擴增產(chǎn)物由于不存在該酶切位點，所以無法切開。因此利用特異性引物對B并結(jié)合酶切的方法可以區(qū)分H52株和H120株。使用引物對C時，能夠擴增出491毒株S1基因序列中長度為1351BP的目的片斷，所需的491株最低病毒滴度為1025EID50ML，并結(jié)合使用引物對D進(jìn)行套式PCR就能擴增出491株S1基因中1066BP的目的片斷，而無法擴增H52株、H120株和M41株，因此使用引物對C和引物對D能夠有效區(qū)分491疫苗株和H52株、H120株、M41株，三對引物A、B、C均具有很好的特異性。從全國疫苗企業(yè)中隨機抽取了19個疫苗企業(yè)共75批IBV活疫苗、從市場上抽取了11個企業(yè)的共16批IBV活疫苗、從5個外國企業(yè)中國代理中共抽取了15批IBV活疫苗，對其進(jìn)行S1基因測序并使用上述建立的分子生物學(xué)鑒別方法進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示H120株疫苗和H52株疫苗用引物對B進(jìn)行檢測時，結(jié)果符合率為100％，用引物對C和引物對D檢測發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)禽苗企業(yè)的75批疫苗中有6個企業(yè)9批疫苗、市場上抽取的16批禽疫苗中有1批疫苗出現(xiàn)了491株特異性片段，而從外企抽取的活疫苗均未出現(xiàn)491株特異性片段。綜上所述，本研究通過對中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所菌種中心保存的IBV種毒株的主要免疫原性基因S1基因進(jìn)行測序分析，并對IBV的H52株、H120株、M41株及國外流行疫苗毒株491株的全基因組進(jìn)行分析，建立的雞傳染性支氣管炎病毒種毒的分子生物學(xué)鑒別方法，進(jìn)一步完善了種毒特異性檢驗方法。并將該方法應(yīng)用于國內(nèi)外市場中的雞傳染性支氣管炎病毒活疫苗的純凈性檢測，為今后IBV疫苗種毒、疫苗鑒別檢驗技術(shù)支撐。

簡介：小鵝瘟病毒PCR檢測方法的建立及江淮地區(qū)小鵝瘟病毒分子流行病學(xué)調(diào)查DEVELOPMENTOFPCRFORDETECTIONOFGOOSEPARVOVIRUSANDMOLECULAREPIDEMIOLOGICALINVESTIGATIONOFGOOSEPARVOVIRUSINJIANGHUAIAREAS研究生呂亞楠導(dǎo)師秦愛建教授基金項目國家農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)科研專項子課題小鵝瘟快速診斷與疫苗研制201003012教育部創(chuàng)新團隊項目IRT0978江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心江蘇省優(yōu)勢學(xué)科項目揚州大學(xué)二0一四年揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文本研究對從常州送檢的死亡雛鵝病料中分離到的一株鵝源小鵝瘟病毒GPVCZM和從上海奉賢送檢的死亡天鵝病例中分離出的鵝細(xì)小病毒GPVSHFXL20619，進(jìn)行了全基因進(jìn)行克隆測序，參照已發(fā)表的標(biāo)準(zhǔn)B株的全基因序列進(jìn)行序列拼接，獲得了GPVSHFX20120619DGPVCZM的全基因序列。測序結(jié)果顯示，GPVCZM全長為5106BP，與歐洲標(biāo)準(zhǔn)B株基因序列全長相同，且同源性為931％，與福建疫苗株GDAGPV同源性最高，為989％GPVSHFX20120619GENBANK登錄號KC478066基因組全長為5050BP，與標(biāo)準(zhǔn)B株相比出現(xiàn)了基因的缺失，缺失部位在末端重復(fù)序列，且同源性為982％，但與1982年臺灣分離株820321基因序列全長相同，缺失部位相同，同源性高達(dá)997％。關(guān)鍵詞小鵝瘟；分子流行病學(xué)；基因序列；進(jìn)化分析

簡介：陳燕燕豬水腫病毒素STX2E基因突變體原核表達(dá)及重組蛋白的免疫生物學(xué)特性研究豬水腫病毒素STX2E基因突變體原核表達(dá)及重組蛋白的免疫生物學(xué)特性研究摘要豬水腫病EDEMADISEASEOFSWINE，ED是斷奶仔豬的一種急性致死性疾病，主要由產(chǎn)II型志賀毒素變異體E亞型STX2E，SHIGATOXIN2E的大腸桿菌引起。STX2E是致水腫病大腸桿菌的主要毒力因子。抗毒素免疫可以保護動物免受產(chǎn)毒素大腸桿菌的侵襲，并已經(jīng)成為水腫病研究的重點之一，毒素或類毒素的獲取是研究抗毒素免疫機制及效果的關(guān)鍵。制備類毒素的方法主要有兩種一種利用提取的天然STX2E，然后利用化學(xué)滅活的方法制備，但研究表明利用該法制備的類毒素免疫動物會產(chǎn)生影響動物體重增加或?qū)е麦w重下降的副作用；另外一種是采用基因工程的方法，突變STX2E的酶活性位點，獲得基因工程法生產(chǎn)的類毒素，這種類毒素不需使用化學(xué)試劑滅活，對動物的體重等生產(chǎn)性能沒有影響。根據(jù)GENEBANK收錄的STX2EA、B亞基的基因設(shè)計了四對引物。一對用于擴增出STX2EB不包含信號肽的基因序列，兩對用于用PCR法將STX2EA的第167位編碼GLU的密碼子突變?yōu)榫幋aGLN的密碼子，第170位編碼ARG的密碼子突變?yōu)榫幋aLYS的密碼子，再用最后一對引物用PCR重疊延伸法擴增出突變的不包含信號肽的STX2EA基因序列。將PCR產(chǎn)物分別與克隆載體PMD18一TSIMPLEVECTOR相連接，重組克隆分別命名為PMD18TAINU和PMD18TB，經(jīng)酶切鑒定正確后進(jìn)行序列測定，并將測序結(jié)果與GENEBANK上收錄的STX2E的A、B基因分別進(jìn)行比對，A亞基的基因序列同源性結(jié)果在99O％～996％之間，其編碼的氨基酸序列的同源性為983％～99O％，且成功地將第167位的GLU突變?yōu)镚LN，第170位的ARG突變?yōu)長YS；B亞基的基因序列同源性為995％～100％，其編碼的氨基酸序列的同源性為986％～100％。提取克隆載體PMD18一TAMU和PMD18一TB，分別對其進(jìn)行雙酶切，獲得STX2EAMU和STX2EB基因片段，將兩目的片段與原核表達(dá)載體PETDUET1連接，構(gòu)建同時表達(dá)STX2EA亞單位突變體和B亞單位的質(zhì)粒載體，命名為PETABMU，使用兩個啟動子分別驅(qū)動A亞單位和B亞單位在同～載體上表達(dá)，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌陳燕燕豬水腫病毒素STX2E基因突變體原核表達(dá)及重組蛋白的免疫生物學(xué)特性研究PROKARYOTICEXPRESSIONOFSHIGATOXIN2EGENEMUTANTANDSTUDYOFIMMUNOBIOLOGICALPROPERTIESOFRECOMBINANTPROTEINSABSTRACTEDEMADISEASEEDOFSWINEISALLACUTEDEADLYDISEASEOFWEANINGPIGLETS，ITRESULTSFROMECOTIPRODUCINGSHIGATOXIN2ESTX2ESTX2EISTHEMAJORTOXICFACTOROFECOLIWHICHCANRESULTINEDEMADISEASEOFSWINEANTITOXICIMMUNITYCANPROTECTANIMALSFROMINFECTIONOFTOXIGENICECOLI，ANDITALREADYBECAMEONEOFTHEFOCALPOINTOFEDSTUDYTHEEXTRACTIONOFTOXINORTOXOIDISTHEKEYOFTHEMECHANISMANDEFFECTOFANTITOXICIMMUNITYSTUDYTHEREARETWOMETHODSOFTOXOIDPREPARATIONONEMETHODISINACTIVATENATURALSTX2EBYCHEMICALMETHOD，BUTTHETOXOIDPREPAREDBYTHISMETHODCANPRODUCESIDEEFFECTSOFDISTURBINGWEIGHTINCREASEORLEADINGTOWEIGHTDECREASEOFANIMALS；THEOTHERMETHODISMUTATETHEENZYMEACTIVITYSITESOFSTX2ETOOBTAINTOXOIDBYGENETICENGINEERING，ANDTHISKINDOFTOXOIDDOESN’TNEEDTOINACTIVATEBYCHEMICALMETHODOREFFECTANIMALS’WEIGHTOROTHERPRODUCTIONPROPERTIESACCORDINGTOTHEA、BGENEOFSTX2EFROMGENBANK，F(xiàn)OURPAIRSOFPRIMERSWEREDESIGNEDTHEONEOFTHEFOURPAIRSWASUSEDTOAMPLIFYTHESEQUENCEOFBSUBUNITDELETINGITSSIGNALPEPTIDETWOPAIRSOFPRIMERWASUSEDTOAMPLIFYGENETICALLYMUTATIVESTX2EASUBUNITBYPCR，INTRODUCINGDOUBLEPOINTMUTATIONSATRESIDUES167GLUGINAND170ARGLYSTHEFINALPAIROFPRIMERWASUSEDTOAMPLIFYTHESEQUENCEOFMUTATIVESTX2EASUBUNITDELETINGITSSIGNALPEPTIDEUSINGOVERLAPEXTENSIONPCRTECHNIQUETHEPCRPRODUCTSWERECLONEDINTOCLONINGVECTORPMD18TSIMPLEVECTORANDRESULTINGRECOMBINANTSWERECALLEDPMD18TAINUANDPMD18TBTHESEQUENCINGRESULTSHOWEDTHATTHENUCLEOTIDEHOMOLOGYOFAUNITWAS99。0％996％ANDAMINOACIDHOMOLOGYWAS983％990％COMPAREDWITHTHESTX2EAGENEFROMGENBANK，ANDSUCCEFULLYGOTPOINTMUTATIONSATRESIDUES167GLUGINAND170ARGLYS；THENUCLEOTIDEHOMOLOGYOFBUNITWAS995％100％ANDAMINOACIDHOMOLOGYWAS986％100％COMPAREDWITHTHESTX2EBGENEFROMGENBANKCOLLECTTHERECOMBINANTPLASMIDSPMD18一TAMUANDPMD18TB，ANDOBTAINSTX2EAMU

簡介：分類號單位代碼10389密級學(xué)號1105808福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文水禽呼腸孤病毒感染番鴨肝臟的水禽呼腸孤病毒感染番鴨肝臟的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究學(xué)科門類農(nóng)學(xué)一級學(xué)科名稱獸醫(yī)學(xué)二級學(xué)科名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向動物病原與免疫學(xué)姓名朱果真指導(dǎo)老師陳少鶯研究員完成時間二零一三年四月CATEGYNUMBERUNITCODE10389碩士學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位（畢業(yè)）論文，是本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下獨立完成的研究成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標(biāo)注和致謝中已作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同對本研究做出貢獻(xiàn)的同志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意，如被查有侵犯他人知識產(chǎn)權(quán)的行為，由本人承擔(dān)應(yīng)有的責(zé)任。學(xué)位（畢業(yè)）論文作者親筆簽名日期論文使用授權(quán)的說明論文使用授權(quán)的說明本人完全了解福建農(nóng)林大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位（畢業(yè)）論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱學(xué)校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。保密，在年后解密可適用本授權(quán)書?！醪槐Ｃ?，本論文屬于不保密。□學(xué)位（畢業(yè)）論文作者親筆簽名日期指導(dǎo)教師親筆簽名日期

簡介：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文表達(dá)1型鴨肝炎病毒VP1基因重組鴨腸炎病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性初步研究姓名付培芬申請學(xué)位級別碩士專業(yè)獸醫(yī)學(xué)；預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王君偉20120620東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文CONSTRUCTIONOFAEXPRESSINGTHEVP1RECOMBINANTDEVGENEOFDHV_1ANDPRELIMINARYSTUDYOFTHERECOMBINANTVIRUSBIONOMICSABSTRACTDUCKVIRALHEPATITISISANACUTEANDHIGHLYCONTAGIOUSDISEASEOFYOUNGDUCKLINGSCHARACTERIZEDBYHIGHMORTALITYANDLIVERLESIONSWITHHAEMORRHAGICSPOTSVP1PROTEINISTHEMAJORVIRULENCEDETERMINANTSWHICHCONTAINSMULTIPLEENPITOPEOFBLINDINGCELLSANDCANINDUCETHEIMMUNERESPONSEANDNEUTRALIZINGANTIBODIESDUCKVIRALENTERITISDVE，ALSOKNOWNASDUCKPLAGUE，ISANACUTE，CONTAGIOUSANDLETHALDISEASEOFDUCKS，GEESEANDSWANS，CAUSEDBYDUCKENTERITISVIRUSDEVINTHISSTUDYDEVWASUSEDASARECOMBINANTVIRALVECTOR，ANDWECONSTRUCTEDARECOMBINANTVIRUSOFDEVWHICHCANEXPRESSVPIPROTEINOFDHVANDLAYTHEMATERIALFOUNDATIONFORTHEDUCKHEPATITISVIRUSGENETICALLYENGINEEREDVACCINEVPLGENEWASAMPLIEDBYRTPCRANDCLONEDINTOPCDNA31，THENWEAMPLIEDVPLEXPRESSIONCASSETTEINCLUDINGPCMVANDBHGPLOABYPCREGFPEXPRESSIONCASSETTE，GPTEXPRESSIONCASSETTEANDHOMOLOGOUSARMSGENEWEREAMPLIEDBYPCRTHENEGFPEXPRESSIONCASSETTE，VPIEXPRESSIONCASSETTE，THEHOMOLOGYARMSGENEANDGPTEXPRESSIONCASSETTEWERECLONEDINTOPMD18TVECTINTURNBYRESTRICTIONSITESANDGOTRECOMBINANTVIRUSTRANSFERVECTORPMD18TVP1GPTEGFPPMD18TVP1GPTEGFPANDDEVDNAWERECOTRANSFECTEDWITHTHESECONDGENERATIONDUCKEMBRYOFIBROBLASTSAPUREVIRUSWASOBTAINEDAFTERHOMOLOGOUSRECOMBINATIONANDPRESSURESCREENINGTHEPURIFIEDVIRUSWEREIDENTIFIEDWITHPCR，RTPCR，WESTERNBLOTANDIFAANDNAMEDASDEV／AGG／VPLDEV／AGG／VPLANDDEVHASTHESAMESTRUCTUREACCORDINGTOELECTRONMICROSCOPYTHENDEV／AGG／VPLPARTICLESWEREREACTEDWITHRABBITANTIDHVVP1POLYCLONALANTIBODYTHERESULTSOFIMMUNEELECTRONMICROSCOPYSHOWEDTHATVPLPROTEINCOULDBEEXPRESSEDINTHEVIRUSPARTICLESURFACE100TCID50DEVANDDEV／Z▲GG／VPLWEREINOCULATEDINDEFRESPECTIVELYANDDETERMINEDTHETITLEOFVIRUSCOLLECTEDBYTHEDIFFERENTTIME，THERESULTSHOWEDTHATTHETIMEOFDEV／AGG／VP1TITERREACHEDTHEPEAKOFWAS96H，WHICHWASLATERTHANDEVTHELACKOFGGPROTEINHASNOEFFECTONVIRALREPLICATION，BUTITSPROLIFERATIONTIMELAGGEDRELATIVLY。THEPLAGUEDIAMETERSOFDEVANDTHERECOMBINANTVIRUSDIDNOTHAVESIGNIFICANTDIFFERENCES，WHICHSHOWEDTHATTHEINSERTIONOFFOREIGNGENESDIDNOTAFFECTTHESPREADOFTHEVIRUSINCELLDEV／AGG／VPLWASPASSAGEDFOR20ROUNDS，THENIDENTIFIEDVPLGENEBYPCRVPLGENECANBEAMPLIFIED，VP1PROTEINOFTHE20THGENERATIONOFRECOMBINANTVIRUSCOULDBEDETECTEDBYINDIRECTIMMUNOFLUORESCENCEASSAYTHERESCULTSHOWEDTHATVP1GENECALLEXISTINTHEII

簡介：J亞群禽白血病病毒感染DF1細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究PROTEOMICANALYSISOFDF1CELLSINFECTEDWITHAVIANLEUKOSISVIRUSSUBGROUPJ博士生范忠軍導(dǎo)師秦愛建教授專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)資助項目聯(lián)合國家基金項目U0831002教育部高校長江學(xué)者和創(chuàng)新團隊計劃IRT0978江蘇省優(yōu)勢學(xué)科支持計劃揚州大學(xué)2012年6月?lián)P州大學(xué)博學(xué)位論文獲得分辨率和重復(fù)性均可滿足分析要求的DF1細(xì)胞的二維電泳圖譜，為后期研究病毒感染細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)組學(xué)提供技術(shù)支持。2J亞群禽白血病病毒感染DF1細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究運用二維電泳結(jié)合質(zhì)譜分析的蛋白質(zhì)組學(xué)方法對DF1細(xì)胞在感染ALVJ后不同時間點的細(xì)胞總蛋白的差異變化情況進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染后6H、12H、1D、2D、3D、5D和7D的7個階段共有86個差異蛋白，差異表達(dá)蛋白主要集中在感染后612H。質(zhì)譜分析共成功鑒定出74個差異蛋白，其中30個上調(diào)，44個下調(diào)。這些差異表達(dá)蛋白從分子生物學(xué)過程來分析主要參與新陳代謝過程、大分子代謝過程、生物學(xué)調(diào)控過程、應(yīng)激反應(yīng)、生物合成等過程；按蛋白功能來分主要具有水解酶活性以及蛋白結(jié)合、氧化還原、核酸結(jié)合等功能。通過蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，我們發(fā)現(xiàn)DJ一1、UCHLL、PEBPL、NPML、HMGBL、ANP32A、TRAPL和VDACL等蛋白與細(xì)胞凋亡及腫瘤的形成、發(fā)展聯(lián)系緊密。其中DJ1最初是作為腫瘤基因被發(fā)現(xiàn)的。它在細(xì)胞的轉(zhuǎn)變、蛋白RNA相互作用的控制、氧化應(yīng)激反應(yīng)以及男性生育等過程中起重要作用；UCHLL是去泛素化酶家族重要成員之一，在細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)多種生物學(xué)過程中起重要作用；PEBPL是一種磷脂結(jié)合蛋白，又稱RAF激酶抑制蛋白。激活的RAF蛋白與細(xì)胞生長、細(xì)胞周期停滯甚至與凋亡有關(guān)；NPML是核仁磷酸蛋白穿梭于細(xì)胞核與細(xì)胞漿之間，參與核糖體的裝配和轉(zhuǎn)運。NPM能對DNA的損傷進(jìn)行調(diào)控，可以激活NFRB轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，阻止細(xì)胞發(fā)生凋亡；HMGBL是典型的非組蛋白，屬于HMG高遷移率族蛋白。HMGBL釋放于細(xì)胞外可參與炎性反應(yīng)、細(xì)胞增殖、分化、遷移及神經(jīng)生長等過程，并與晚期糖基化終產(chǎn)物受體RAGE結(jié)合，參與腫瘤的發(fā)生、生長、浸潤和轉(zhuǎn)移。這些信息為進(jìn)一步研究ALVJ的致病、致腫瘤機理提供了有用的蛋白質(zhì)相關(guān)基礎(chǔ)依據(jù)。3DJ1、UCHLL、VDACL、TRAPL和HMGBL基因REALTIMEPCR標(biāo)準(zhǔn)品的制備及各基因在ALVJ感染中變化情況為了檢測DJ1、UCHLL、VDACL、TRAPL和HMGBL基因在ALVJ感染過程中的變化，我FLJN用PCR的方法擴增出各基因片段，然后連接PGEMT載體，構(gòu)建各基因的載體質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品。將鑒定正確的各基因的T載體質(zhì)粒進(jìn)行10倍梯度稀釋，用REALTIMEPCR擴增各基因分別建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后以ALVJ感染后的DF1細(xì)胞為模板進(jìn)行REALTIMEPCR擴增。結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有檢測基因在ALVJ感染后5D和7D均發(fā)生下調(diào)，而在感染后6H

簡介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文大麥和性花葉病毒（BAMMV）和燕麥花葉病毒（OMV）的分子生物學(xué)研究姓名鄭滔申請學(xué)位級別博士專業(yè)植物病理學(xué)指導(dǎo)教師陳劍平200251浙，工大學(xué)博士學(xué)位論文VPG蛋白是與病毒基因組復(fù)制相關(guān)的蛋白，可能涉及病毒與寄主的互作。為了進(jìn)一步研究病毒與寄主的互作，利用OMVUK實驗室分離物的NIAVPG基因和帶有PUC和2U啟動子的載體PGADT7構(gòu)建了VPG蛋白在酵母中的表達(dá)載體。經(jīng)WESTERNBLOT分析表明，VPG蛋白在酵母中得到正確的表達(dá)。

簡介：分類號河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文密級HENANPROVINCE導(dǎo)師專研究方向論文提交日期2012年6月學(xué)位授予日IIIIIIIIIULIIIIIIIIIIILLIIIIIIIIIIIIIIY2157235河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明、使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾書學(xué)位論文題目河南省豬流感病毒分離株基岡寶F1演化特征和生物特性研究學(xué)位級別碩十學(xué)生姓名張云學(xué)科專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師姓名張龍現(xiàn)教授胡慧副教授學(xué)1_奇論文是否保密保密如需保密，解密時間2013年12月3L同獨創(chuàng)性聲明本人交論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)卜進(jìn)行的研究I作及取得研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得河南農(nóng)業(yè)人學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證IS而使用過的材料，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。與我一同I作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了特此聲明。研究生簽名漲云導(dǎo)師同期IA年占月弼同同期學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的E1JI90本和電子版本，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意河南農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)知識產(chǎn)權(quán)保護辦法的有關(guān)規(guī)定，在畢業(yè)離丌河南農(nóng)業(yè)大學(xué)后，就在校期問從事的科研工作發(fā)表的所有論文，第一署名單位為河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河南農(nóng)業(yè)大學(xué)所有，否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。黧鬈麓解鬣戮一研究生簽名歟石導(dǎo)師簽名量場％砂綆I學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)簽名旦塑魚迕亨旦墾狎閂期7陣廟纖L同期函L扦鉬凰

簡介：分類號分類號S851313授予學(xué)位單位代碼授予學(xué)位單位代碼10434學(xué)號2015120233山東農(nóng)業(yè)大學(xué)全日制碩士專業(yè)學(xué)位論文歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒生物學(xué)特性的研究及其反向遺傳平臺建立BIOLOGICALACTERISTICSOFEUROPEANAVIANALIKESWINEH1N1INFLUENZAVIRUSITSESTABLISHMENTOFREVERSGEICS2017年6月6日姓名楊海明學(xué)位類別獸醫(yī)碩士專業(yè)獸醫(yī)研究方向獸醫(yī)外科學(xué)學(xué)院動物科技學(xué)院指導(dǎo)教師馬衛(wèi)明副教授關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并向社會公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期

簡介：一關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并向社會公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定?！撐淖髡吆灻麑?dǎo)師簽名日期奎K“，■▲產(chǎn)符號及縮略詞聲明英文縮寫英文全稱中文名稱POLYMERASECHAINREACTIONPCR聚苗髀毽武及勝PBSHMLNSDPGGKG此MLLR／MINUMOL／LBPORFKBAMPDHVDVHSPFUTRELD50ELISART。PCRPHOSPHATEBUFFERSALINEHOURMINUTESECONDDAYMICROGRAMGRAMKILOGRAMMICROLITERMILLILITERLITERROTATIONPERMINUTEUNITMOLEPERLITERBASEPAIRSOPENREADINGFLAMEKILOBASEAMPICILINDUCKHEPATITISVIRUSDUCKVIRALHEPATITISSPECIFICPATHOGENFREEUNTRANSLATEDREGIONMEDIANEMBRYOLETHALDOSEENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION磷酸鹽緩沖液小時分鐘秒天微克克千克微升毫升升每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)單位摩爾／升堿基對開放閱讀框架一千個堿基氨芐青霉素鴨肝炎病毒鴨病毒性肝炎無特定病原體非編碼區(qū)胚半數(shù)致死量酶聯(lián)免疫吸附試驗反轉(zhuǎn)錄酶．聚合酶鏈鎖反應(yīng)DHBVDUCKHEPATITISBVIRUS鴨乙型肝炎病毒______●_LI____●_____一

簡介：關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并向社會公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名導(dǎo)師簽名日茁二芻目錄中文摘要IABSTRACTIII1前言111病原學(xué)一212分子生物學(xué)特征一313蛋白組學(xué)特征5131PRRSV的非結(jié)構(gòu)蛋白一5132PRRSV的結(jié)構(gòu)蛋白51321次要結(jié)構(gòu)蛋白51322GP5蛋白61323M蛋白71324N蛋白714流行病學(xué)815致病力816PRRSV的致病機制1017組織病理學(xué)變化1118PRRSV遺傳變異1L19診斷13191血清學(xué)檢測131911酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA131912血清中和試驗SNT131913間接熒光抗體試驗IFA141914免疫過氧化物酶單層試驗OPMA14192分子生物學(xué)檢測14110PRRSV的防治151101建立防控部門，做好保障工作151102做好宣傳工作，普及科學(xué)防治知識15

簡介：IJYLLJL4J2JJIL／U3LLLL6LLFLL／16／LL117LUJL3LLLLLLJEEPIDEMIOLOGICALINVESTIGATIONOFPETDOGSANDCATSANDTHEINHIBITIONOFJAPANESEENCEPHALITISⅥRUSREPLICATIONBYCAPSIDTARGETEDⅥRUSINACTIV舡IONBYPANGRANSUPERVISORPROFPUYANCHEN，APBINZHOUATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULLFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEMASTERDEGREEOFAGRONOMYCOMPLETEDINSEPTEMBER，2012COMMENCEMENTINDECEMBER，2012目錄目錄摘要IA】ISTRACTIII縮略語表VII文獻(xiàn)綜述L第一章豬流行性乙型腦炎的研究進(jìn)展LL豬流行性乙型腦炎分子生物學(xué)特征111病原學(xué)特征一L12流行病學(xué)特征213臨床癥狀和病理變化特征32豬流行性乙型腦炎病毒基因組的結(jié)構(gòu)特征321結(jié)構(gòu)蛋白422非結(jié)構(gòu)蛋白53流行性乙型腦炎病毒的分類和分型74流行性乙型腦炎病毒的毒力和致病機理841流行性乙型腦炎病毒的毒力影響因素。842流行性乙型腦炎病毒的致病機理95流行性乙型腦炎病毒的診斷方法951臨床診斷952病原學(xué)診斷953血清學(xué)診斷1054分子生物學(xué)檢測LL6流行性乙型腦炎病毒疫苗的研究進(jìn)展1261滅活疫苗L262減毒活疫苗1363基因工程疫苗1364流行性乙型腦炎疫苗的發(fā)展方向157豬流行性乙型腦炎的綜合防治措施1571預(yù)防措施1572治療措施16第二章衣殼蛋白靶向核酸酶滅活技術(shù)的研究進(jìn)展19

簡介：關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并向社會公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名弛簽名乒芬日期叢F蔓厶?！甀|■簡稱AMPBPBSABLASTDABDEPCDFVDHOEDTAELISAHRPKBLBMINMLNTODORFPBSPCRR／MINRRPCR1℃ID50UTRVN符號說明英文名AMPICILLINBASEPAIRBOVINESERUMALBUMINBASICLOCALALIGNMENTSEARCHTOOL33DIAMINOBENZIDINEDIETHYLPYROCARBONATEDUCKFLAVIVIRUSDUCKHEMORRHAGICOVARITISETHYLENEDIAMINETERAACETICACIDENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYHORSERADISHPEROXIDASEKILOBASELURIABERTINIMEDIUMMINUTEMIILILITERNUCLEOTIDEOPTICALDENSITYOPENREADINGFRAMEPHOSPHATEBUFFERSALINEPOLYMERASECHAINREACTIONROUNDPERMINUTEREVERSETRANSCRIPTIONPCRTISSUECULTUREINFECTIVEDOSEUNTRANSLATEDREGIONVIRUSNEUTRALIZATIONTEST中文名氨芐青霉素堿基對牛血清白蛋白基本局部比對搜索工具3，3’一二氨基聯(lián)苯胺焦碳酸二乙酯鴨黃病毒鴨出血性卵巢炎乙二胺四乙酸酶聯(lián)免疫吸附試驗辣根過氧化物酶核酸分子中1000個堿基對LB培養(yǎng)基分鐘毫升核苷酸光密度開放閱讀框磷酸鹽緩沖液聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)組織半數(shù)感染量非翻譯區(qū)血清中和試驗㈣04川●_■肌7啪MI■I川●I川2洲Y

簡介：STUDYONPORCINEREOVIRUSESBYHEXIAOMINGSUPERVISORPROF．YAOHUOCHUNADISSERTATIONSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEMASTERDEGREEOFAGRONOMYINVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINMAY,2013COMMENCEMENTINJUNE，2013目錄目錄摘要??????????????????????????????????????．IABSTRACT??????????????????????????????????????????????．．III第一章呼腸孤病毒結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)生學(xué)研究進(jìn)展????????????????????．11．呼腸孤病毒基因組和蛋白綜述??????????????????????????L1．1基因組結(jié)構(gòu)???????????????????????????????一31．2內(nèi)衣殼結(jié)構(gòu)???????????????????????????????．．41．3外衣殼????????????????????????????????????????????．72．呼腸孤病毒復(fù)制的概述?????????????????????????????93．病毒組裝的探討???????????????????????????????．134．呼腸孤病毒基因組的組裝???????????????????????????一145．病毒包涵體的形態(tài)發(fā)生????????????????????????????15參考文獻(xiàn)???????????????????????????????????16研究部分????????????????????????????????????．．29第二章中國部分地區(qū)豬群中哺乳動物呼腸孤病毒???????????????????29分子流行病學(xué)調(diào)查????????????????????????????????．．29I材料與方法?????????????????????????????????301．1臨床樣品??????????????????????????????????301．2RNA提取，RT套式PCRRTNPCR????????????????????301．3SL基因的克隆與測序??????????????????????????3L1．4進(jìn)化分析????????????????????????????????3L2結(jié)果????????????????????????????????????????????????．312．1MRV病料的采集、檢測??????????????????????????3L2．2S1基因序列的同源性分析?????????????????????????322．3氨基酸序列分析?????????????????????????????332．4進(jìn)化分析????????????????????????????????333討論????????????????????????????????????????????????．35參考文獻(xiàn)??????????????????????????????????36第三章一株豬源L型呼腸孤病毒的分離及鑒定????????????????????．391材料與方法?????????????????????????????????．401．1細(xì)胞及試劑???????????????????????????????401．2引物設(shè)計????????????????????????????????40

簡介：MOLECULAREPIDEMIOLOGYOFINFECTIOUSBRONCHITISVIRUSINCHINABETWEEN2009AND2011，ANDDEVELOPMENTOFRECOMBINANTVACCINEUSINGMAREK’SDISEASEVIRUSASVECTORADISSERTATIONSUBMITTEDINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFDOCTOROFPHILOSOPHY●INPREVENTIVEVETERINARYMEDICINECOLLEGEOFVETERINARYMEDICINEYANGZHOUUNIVERSITYYANGZHOU，P．R．CHINAPH．D．CANDIDATEXIAORONGZHANGADVISORPROF．XIUFANLIUAPRIL，2012揚州大學(xué)博士學(xué)位論文QX型分離株數(shù)量最多，占總數(shù)的77．8％42／54。從進(jìn)化樹中還可以看出，QX型分離株又可以進(jìn)一步細(xì)分為兩個不同的基因亞群一一CLUSTERI21株和CLUSTERII21株，經(jīng)典的QX型參考毒株QXIBV和LX4株均屬于CLUSTERI亞群，而CLUSTERII亞群中的毒株均在2010年才開始出現(xiàn)。為了更加系統(tǒng)地描述同期內(nèi)國內(nèi)不同基因型IBV的分布情況，我們將已經(jīng)在GENBANK發(fā)表全長S1基因序列的所有同時期分離株共296株合并進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，結(jié)果顯示，350個同時期分離株可分為19個基因型，其中11個基因型均能根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)報道找到同源的參考毒株，根據(jù)各基因型中包含的毒株數(shù)量多少依次為QX型219株、HN．08型26株、LSC／99I型22株、LDT3／03型12株、TW．I型12株、CHIII型11株、MASS型10株、LDL／97I型3株、CHVI型3株、TWII型2株和793／B型1株，此外還有8個基因型未能歸入已被正式命名的已知基因型，因此暫定名為未定型I～未定型VIII。從分型結(jié)果可以看出，我國流行的IBV基因型具有典型的地域性分布特征，大多數(shù)在周邊國家和地區(qū)廣泛流行的基因型在我國并未發(fā)現(xiàn)。為闡明國內(nèi)不同基因型毒株之間的遺傳演化關(guān)系，根據(jù)遺傳進(jìn)化和基因分型的結(jié)果，從不同基因型中選擇代表性毒株，用RDP3．31軟件對SL基因進(jìn)行重組分析。結(jié)果顯示當(dāng)前國內(nèi)流行的毒株中存在廣泛的重組現(xiàn)象，不同基因型間的重組事件不僅導(dǎo)致同一基因型內(nèi)部發(fā)生分化，出現(xiàn)了不同基因亞群，而且經(jīng)過多次的同源重組后可能會導(dǎo)致新的基因型毒株的出現(xiàn)。綜合不同基因型間發(fā)生的系列重組事件，可以推斷QX型、LSC／99I型、793／B型、LDL／97I型、TW二I型和TWII型是目前在我國流行的所有基因型毒株的原型毒株，除此以外的新出現(xiàn)的基因型均是在這6個基因型的基礎(chǔ)上經(jīng)過一次或多次的同源重組而產(chǎn)生的變異株。2、MASS型H120活疫苗對當(dāng)前流行的主要基因型代表毒株的免疫保護效力試驗根據(jù)遺傳進(jìn)化分析的結(jié)果，從當(dāng)前主要流行的三個IBV基因型中挑選出4個代表毒株AH／2009／1QX型CLUSTERI亞群、JS／2010／12QX型CLUSTERII亞群、JS／2009／5LSC／99I型和JS／2010／6HN08型，分別用MASS型IBV活疫苗H120株進(jìn)行免疫保護效力試驗，以評價現(xiàn)有疫苗對流行毒株的免疫保護狀況。結(jié)果顯示H120疫苗株對不同基因型的IBV毒株免疫保護效力存在較大差異，對同屬于MASS基因型的M41強毒株能夠提供完全保護，且能顯著降低攻毒后氣管和腎臟的排毒率；對于QX型毒株AH／2009／I和JS／2010／12，基本達(dá)到臨床保護標(biāo)準(zhǔn)，但試驗雞氣管和腎臟帶毒的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于M41攻毒組，說明局部免疫保護效果不是非常理想；對于HN08型的JS／2010／6株和LSC／99I型的JS／2009／5株保護效果均不理想，攻毒后雞群表現(xiàn)出較為嚴(yán)重的臨床癥狀和相當(dāng)高的氣管和