簡(jiǎn)介：分類號(hào)____________密級(jí)______________ＵＤＣ____________單位代碼______________碩士學(xué)位論文論文題目傳染性皮下及造血組織壞死病毒分子流行病學(xué)調(diào)查研究學(xué)號(hào)_________________________姓名_________________________專業(yè)名稱_________________________學(xué)院_________________________指導(dǎo)教師___________________________________________________________________________論文提交日期2016年5月25日范東東116461311075036生物化學(xué)與分子生物學(xué)海洋學(xué)院陳炯獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得寧波大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。簽名___________日期____________關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解寧波大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。（保密的論文在解密后應(yīng)遵循此規(guī)定）（保密的論文在解密后應(yīng)遵循此規(guī)定）簽名___________導(dǎo)師簽名___________日期____________

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)S85828授予學(xué)位單位代碼授予學(xué)位單位代碼10434編號(hào)Z2013173山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文德州德州地區(qū)新型鵝細(xì)小病毒地區(qū)新型鵝細(xì)小病毒流行病學(xué)調(diào)查及流行病學(xué)調(diào)查及DZDZ0101株新型鵝株新型鵝細(xì)小病毒細(xì)小病毒全基因組序列分析全基因組序列分析THEEPIDEMICINVESTIGATIONABOUTNOVELGOOSEPARVOVIRUSINDEZHOUANDTHECOMPLETEGENOMEANALYSISOFANOVELGOOSEPARVOVIRUSDZ012016年12月9日姓名姓名吳蓓吳蓓學(xué)位類別學(xué)位類別獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士領(lǐng)域領(lǐng)域獸醫(yī)獸醫(yī)研究方向研究方向分子病分子病原學(xué)原學(xué)學(xué)院學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師姜世金姜世金教授教授關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期

簡(jiǎn)介：Y9275‘0”E學(xué)位論文＆N日自‰～表征健康鵝群新城疫病毒的分離及生物學(xué)特性研究陳露精導(dǎo)彀帥呈室孟塾掛，塹劌盤塋堅(jiān)蒸塑劌，22』QQ申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別』L±一學(xué)科專業(yè)名稱垂墮蘭匡芏論文提交日期三螋￡生』且一論文答辯日期2QQ§生§目學(xué)位授予單位J業(yè)型繭L一學(xué)位授予日期2Q豎生§旦答辯委員會(huì)主席盔垂建燃論文評(píng)閱人型堅(jiān)雖熬蕉韭圭鴦絲蕉00六年五月2塹叢查蘭墅主堂些墮苧SDL41041GO的MDT為110．2．192．0H，ICPI為O．1010，43L，被判定為NDV弱毒株；3株病毒SD／I／04／GO、SD／6／04／GO和JS／I／05／GO的MDT為84．889．4H，ICPI為O．8400．966，被判定為NDV中等毒力毒株兩株病毒JS／I／03／GO和SD／5／04／GO的MDT為53．154．6H，ICPI為1．7801．820，被判定為NDV強(qiáng)毒株。2鵝源新城疫病毒融合蛋白基因部分片段的克隆及序列分析用RTPCR技術(shù)擴(kuò)增、克隆了上述1L株鵝源NDVF基因部分片段，經(jīng)測(cè)序獲得F基因5’端EDNA前1700NT全長(zhǎng)1705NT序列，分析測(cè)定的序列及由其推導(dǎo)的氨基酸序列。結(jié)果表明，6株病毒SD／I／03／GO、AH／I／04／GO、JS／I／04／GO、SD／2／04／GO、SD／3／04／GO和SD／4／04／GOF蛋白裂解位點(diǎn)序列為112GROG．RL117，符合典型的NDV弱毒株特征；5株病毒SD／I／04／GO、SD／6／04／GO、JS／I／05／GO、JS／I／03／GO和SD／5／04／GOF蛋白裂解位點(diǎn)序列均為112RRQKRF117，符合典型的NDV強(qiáng)毒株特征。將11株鵝源NDVF基因編碼區(qū)1654BP核苷酸序列與新城疫標(biāo)準(zhǔn)毒株及近年來國(guó)內(nèi)外分離的鵝源或雞源NDV相應(yīng)序列進(jìn)行比較。結(jié)果表明，6個(gè)弱毒株和3個(gè)中等毒力毒株之間的同源性大于97％，兩株強(qiáng)毒與其他9株病毒的同源性為90．3％．92．1％。根據(jù)核苷酸序列推導(dǎo)出相應(yīng)的551個(gè)氨基酸序列，6個(gè)弱毒株及3個(gè)中等毒力毒株之間的同源性高達(dá)97．1％．97．5％，兩株強(qiáng)毒與其他9株病毒的同源性為91．8％．93．5％。近年來國(guó)內(nèi)部分雞源分離株與6個(gè)弱毒株和3個(gè)中等毒力毒株相應(yīng)氨基酸序列的同源性超過96％，而11株病毒與1997年以來國(guó)內(nèi)分離到的對(duì)鵝具有高度致病性的NDV相應(yīng)序列的同源性最高僅為94．7％。另外，對(duì)F蛋白信號(hào)肽區(qū)和F蛋白N一未端27個(gè)高變氨基酸位點(diǎn)的比較表明，從外表健康鵝分離的11株鵝源NDV，不管是弱毒株、中等毒力毒株還是強(qiáng)毒株，都在相應(yīng)位點(diǎn)上和某些雞源毒株有很高的相似性。以F基因高變區(qū)374NT片段第47～420NT為基礎(chǔ)，用軟件繪制遺傳發(fā)生樹，發(fā)現(xiàn)6個(gè)弱毒株靠得很近，與基因II型的LASOTA株同處1個(gè)分支3個(gè)中等毒力毒株與基因II型的TEXASGB株共同位于另一個(gè)分支；兩個(gè)強(qiáng)毒株則與近年來分離自發(fā)病鵝群的部分VLLD亞型毒株共同形成另一個(gè)分支。對(duì)F蛋白7個(gè)特征性氨基酸位點(diǎn)的比較、分析發(fā)現(xiàn)，6株弱毒及3個(gè)中等毒力毒株與LASOTA株、F48E8株分別在7個(gè)和6個(gè)位點(diǎn)具有完全相同的氨基酸殘基兩個(gè)強(qiáng)毒株的前4個(gè)位點(diǎn)與從

簡(jiǎn)介：獨(dú)鉍性聲驤本人聲明，所呈交的學(xué)位論文，是在指導(dǎo)教師指導(dǎo)下，通過我的努力取得的成果，并且是自己撰寫盼。盡我所知，除了文中作了標(biāo)注和致謝中已經(jīng)作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)獲得學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一I可對(duì)本研究做出貢獻(xiàn)媳阿志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意。如被查有嚴(yán)重侵犯他人知識(shí)產(chǎn)權(quán)蝴亍為，由本人承擔(dān)應(yīng)有盼責(zé)任。學(xué)位論文作者親筆簽名弛日期C鹼L厶壘些論文使用授權(quán)的說明本人完全了解江西農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閩和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。保密，在年后解密可適用本授權(quán)書?？诓槐Ｃ?，本學(xué)位論文屬于不保密。0請(qǐng)?jiān)诜娇騼?nèi)打“妒’學(xué)位論文作者親筆簽名拖蟲昆日期＆旦』61篁指導(dǎo)教師親筆簽名目辮塑≤≤纊目錄19病毒分離14110動(dòng)物接種試驗(yàn)15111細(xì)胞培養(yǎng)151111細(xì)胞復(fù)蘇151112細(xì)胞凍存15112病毒感染細(xì)胞一15113PRVTCID50的測(cè)定15114病毒的鑒定151141細(xì)胞CPE151142培養(yǎng)細(xì)胞的PCR鑒定161143感染細(xì)胞超薄切片的制作一162結(jié)果與分析1621病毒PCR鑒定結(jié)果1622動(dòng)物接種試驗(yàn)1723病毒的分離及鑒定18231細(xì)胞CPE18232培養(yǎng)細(xì)胞的PCR鑒定18233感染細(xì)胞的電鏡觀察1924病毒TCIDSO的測(cè)定一203討論204小結(jié)一21第四章犬源偽狂犬病毒江西株GD、GE基因的克隆與測(cè)序分析221材料與方法2211主要生化試劑2212主要儀器設(shè)備2213常用試劑的配制2214引物設(shè)計(jì)2315PRVDNA模板的制備一2316毒力基因的PCR擴(kuò)增2317目的片段的克隆23171PCR產(chǎn)物的回收23172目的片段與克隆載體的連接2418連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化24181重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化24182陽性菌落的篩選、鑒定24183重組質(zhì)粒的提取24184目的片段測(cè)序和序列分析252結(jié)果與分析2521PRV江西株GD基因的PCR擴(kuò)增2522PRV江西株GE基因的PCR擴(kuò)增一2523PRV江西株GD基因分析25231PRV江西株GD基因核苷酸及編碼的氨基酸序列分析25232PRVGD基因遺傳進(jìn)化分析29

簡(jiǎn)介：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)專業(yè)專業(yè)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文題目華南地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)及HY毒株分離鑒定研究學(xué)位申請(qǐng)人姓名王培培導(dǎo)師姓名宋長(zhǎng)緒研究員夏平安教授夏平安教授專業(yè)學(xué)位類別獸醫(yī)碩士領(lǐng)域預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向畜禽疫病分子病原學(xué)中國(guó)鄭州2016年6月河南農(nóng)業(yè)大學(xué)2016屆碩士畢業(yè)論文河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明、使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾書河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明、使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾書學(xué)位論文題目華南地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)及HY毒株分離鑒定研究學(xué)位類別碩士研究生學(xué)生姓名王培培學(xué)科專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師姓名宋長(zhǎng)緒夏平安學(xué)位論文是否保密如需保密，解密時(shí)間年月日獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人呈交論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得河南農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。特此聲明。研究生簽名導(dǎo)師簽名日期年月日日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾承諾本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷本和電子版本，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意河南農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)辦法的有關(guān)規(guī)定，在畢業(yè)離開河南農(nóng)業(yè)大學(xué)后，就在校期間從事的科研工作發(fā)表的所有論文，第一署名單位為河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河南農(nóng)業(yè)大學(xué)所有,否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。注保密學(xué)位論文在解密后適用于本授權(quán)書。注保密學(xué)位論文在解密后適用于本授權(quán)書。研究生簽名導(dǎo)師簽名學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)簽名日期年月日日期年月日日期年月日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)S8317單位代碼10364密級(jí)學(xué)號(hào)14720172安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文安徽部分地區(qū)病雞中CAV的血清學(xué)調(diào)查及病毒分離鑒定SEROLOGICALINVESTIGATIONVIRUSISOLATIONIDENTIFICATIONOFCAVINFECTIONINDISEASEDCHICKENSINSOMEAREASOFANHUIPROVINCE研究生儲(chǔ)鴻蒙指導(dǎo)教師劉雪蘭副教授合作指導(dǎo)教師葉紅副教授申請(qǐng)學(xué)位類別獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱獸醫(yī)研究方向獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)二零一六年六月摘要雞傳染性貧血病毒（CHICKENANEMIAVIRUS，CAV）主要引起雞胸腺、骨髓等免疫器官發(fā)生病變，從而導(dǎo)致免疫抑制，容易繼發(fā)其他病原微生物感染。我們對(duì)送檢本實(shí)驗(yàn)室的病雞通過CAV抗體陽性率調(diào)查，病毒分離和動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)等方法，初步了解安徽省部分地區(qū)發(fā)病雞群中CAV感染狀況，為防控雞傳染性貧血病提供參考。首先，本研究應(yīng)用IDEXX雞傳染性貧血病病毒抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)來自安徽省126個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的共228份雞血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，126個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)中CAV抗體檢測(cè)呈陽性為7063。228份血清樣品中有145份呈CAV抗體陽性，總陽性率為6360。根據(jù)血清樣本來源顯示，皖南地區(qū)CAV抗體陽性率為60，皖中地區(qū)為6446，皖北地區(qū)為6222。不同品種雞中肉雞CAV抗體陽性率為4286、蛋雞品種為5152、土雞抗體陽性率為7083；不同日齡病雞中，150日齡CAV抗體陽性率5222，50100日齡抗體陽性率為5882，100150日齡抗體陽性率為5806，150200日齡抗體陽性率為8621，200日齡以上的抗體陽性率相對(duì)最高，為90。其次，對(duì)CAV抗體檢測(cè)陽性且肝臟出現(xiàn)腫瘤樣結(jié)節(jié)的病雞，制備病理組織切片，提取肝組織DNA，以PCR方法檢測(cè)CAV及可能混感的病毒。對(duì)2份CAV檢測(cè)陽性的病料液孵育MDCCMSB1細(xì)胞，觀察細(xì)胞病變。結(jié)果顯示，病理組織切片染色結(jié)果可見明顯的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；擴(kuò)增結(jié)果表明CAV與ALVJ、MDV存在混合感染，從9份腫瘤中檢測(cè)出8份CAV，其中有5份和ALVJ檢測(cè)雙陽性，對(duì)其中2份腿肌出血、胸腺明顯萎縮的陽性樣品中CAV凋亡素（VP3）基因序列進(jìn)行同源性分析表明，AHCHCAV1與EF176599（山東株）同源性最高為100，而AHCHCAV2與M55918（德國(guó)株）和EF17659（山東株）同源性均為994。最后，將上述PCR鑒定CAV陽性的2個(gè)樣品經(jīng)氯仿和雙抗處理后孵育MDCCMSB1細(xì)胞并盲傳，在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞病變，并提取DNA進(jìn)行PCR鑒定；將細(xì)胞毒通過卵黃囊接種6DSPF雞胚，并通過腿肌注射1日齡SPF雛雞進(jìn)行回歸實(shí)驗(yàn)，觀察剖檢病變并通過PCR檢測(cè)CAV。結(jié)果顯示，病料液處理的MDCCMSB1細(xì)胞在第二代和第四代細(xì)胞均出現(xiàn)明顯腫脹、死亡等細(xì)胞病變。PCR檢測(cè)結(jié)果CAV為陽性；在回歸試驗(yàn)中，接種13D后，少數(shù)雞胚發(fā)育明顯受阻，胚體小于對(duì)照組，但多數(shù)病變不明顯。1日齡雛雞在接種細(xì)胞毒21D時(shí)剖檢，可見腿肌明顯出血、胸腺明顯出血，部分萎縮等剖檢病變；PCR檢測(cè)結(jié)果均為CAV陽性。由此表明，我們成功分離并鑒定了2株CAV安徽毒株（分別

簡(jiǎn)介：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬瘟病毒致病的臨床生物學(xué)特性研究姓名徐鳳軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)獸醫(yī)指導(dǎo)教師王振勇南斗錫20051217山東農(nóng)業(yè)大學(xué)頌士學(xué)位論文中文摘要隨著豬瘟疫苗的普遍應(yīng)用，豬瘟HC的發(fā)病率和病死率明顯減少。近年來HC流行和發(fā)病的特點(diǎn)已發(fā)生了很大變化，除典型的病例外，在一些地區(qū)和豬場(chǎng)出現(xiàn)了一種非典型豬瘟，給養(yǎng)豬業(yè)帶來很大的經(jīng)濟(jì)損失。為了探討免疫時(shí)間、免疫劑量、免疫方法等對(duì)豬瘟及非典型豬瘟發(fā)生的影響，以及豬瘟病毒的強(qiáng)、弱能否引起豬瘟的發(fā)生，確定比較適合的免疫程序，準(zhǔn)確的診斷方法，避免豬瘟、非典型豬瘟造成損失，進(jìn)行了本實(shí)驗(yàn)。對(duì)不同免疫時(shí)間、不同免疫劑量對(duì)仔豬及母豬進(jìn)行免疫，然后采集血清，應(yīng)用不同的方法檢測(cè)豬瘟抗體水平。結(jié)果如下1通過流行病學(xué)、癥狀學(xué)和病理剖檢初步確診之后，再作免疫熒光試驗(yàn)以進(jìn)一步確診的條件下，發(fā)現(xiàn)當(dāng)前非典型豬瘟普遍流行，尤其在混合感染的條件下，更是如此。免疫熒光抗體診斷技術(shù)的檢出率、特異性及敏感性很高。2應(yīng)用ILIA、DOTELISA、豬瘟抗體免疫金標(biāo)試紙條三種方法對(duì)150份不同階段豬血清同步進(jìn)行豬瘟抗體的檢測(cè)，其中任何兩種之間檢測(cè)經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、20日齡豬、40日齡豬以及育肥豬血清中豬瘟抗體的結(jié)果均無顯著差異P005，表明這三種方法均可用于豬瘟抗體的檢測(cè)。3不同日齡段的豬群豬瘟抗體水平差異較大，經(jīng)產(chǎn)母豬的免疫狀況相對(duì)較好，而育肥豬和后備母豬的免疫狀況不理想，但是育肥豬在育肥階段不發(fā)生豬瘟。4通過應(yīng)用豬瘟單克隆抗體純化酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)豬瘟抗體，可以確定豬場(chǎng)存在豬瘟病毒隱性感染。這些由低毒株引起的隱性感染豬瘟屬非典型豬瘟，可以通過垂直感染或者水平傳播。5使用豬瘟DOTELISA診斷試劑盒，具有操作簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、敏感、特異的優(yōu)點(diǎn)，非常適用于規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)豬瘟免疫檢測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查。6疫苗保存溫度或者存放時(shí)間影響疫苗效力。防疫操作不嚴(yán)格，免疫程序不合理或免疫劑量不足，會(huì)擾亂免疫應(yīng)答。藥物及營(yíng)養(yǎng)影響機(jī)體免疫

簡(jiǎn)介：分類號(hào)；癌級(jí)單位代碼10019學(xué)號(hào)S030164飛蛾差弋夭普碩士學(xué)位論文白草花葉病毒P1基因生物學(xué)功能的研究及轉(zhuǎn)激活蛋白基因煙草的培育STUDIESOILTHEBIOLOGICALFUNCTIONOFTHEP1GENEOFPENNISETUMMOSAICVIRUSANDPRODUCTIONOFTRANSGENICTOBACCOPLANTSWITHALLACTIVATORPROTEINGENE研究生匿型指導(dǎo)教師蓮在主熬攫申請(qǐng)學(xué)位類級(jí)別一盔堂亟專業(yè)名稱撞毖痘理堂研究方向擅物痘垂堂所在學(xué)院盤堂皇生毖拉苤堂院二零零六年五月中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文ABSTRACTABSTRACTSTUDIESONTHEFUNCTIONOFTHEP1GENEOFPENNISETUMMOSAICVIRUSPOTYVIRUSWEREPERFORMEDBYTRANSFORMINGTHEGENEINTONICOTIANABENTHEMIANAANDINSERTINGITINTOPVXVECTORTOBEINOCULATEDONTOⅣBENTHEMIANATHEPLANTEXPRESSIONVECTORPCAMBIAL301CARRYINGTHEP1GENEOFPENNISETUMMOSAICVIRUSWASCONSTRUCTED，USINGTHE35SPROMOTERFROMVECTORPRTL03BYPSTLDIGESTIONTOBACCOLEAFDISCSWERETRANSFORMEDVIAAGROBACTERIUMTUMEFACIENSMEDIATEDPROCEDUREP1TRANSGENICTOBACCOPLANTLETSWEREOBTAINEDMOLECULARDETECTIONINDICATEDTHATTHREEOUTOFTHETWENTYTWOTRANSGENICPLANFLETSWEREPOSITIVEP1WANSGENICPLANFLETGREWWEAKERCOMPAREDWITHWILDTYPE，ANDTHELEAVESWEREMUCHSMALLERTHUSWESPECULATETHATTHEP1GENEISDELETERIOUSTOTHEGROWTHANDDEVELOPMENTOFMBENTHEMIANATHEPRODUCTIONOFP1TRANSGENICTOBACCOMAKESITPOSSIBLEFORUSTOFURTHERINVESTIGATETHEBIOLOGICALFUNCTIONSOFTHEP1GENERECOMBINANTVECTORPPVXPLWITHP1GENEOFPENNISETUMMOSAICVIRUSINSERTEDINTOP45P46WASTRANSCRIBED／NVITROANDINOCULATEDTONBENTHEMIANATHENBENTHEMIANAPLANTSINOCULATEDWITHP4SP“CONTROLAPPEAREDSLIGHTSYSTEMICMOSAICSYMPTOM，WHILETHOSEBYPPVXPISHOWEDMOTTLINGANDNECROTICRINGSPOTS，ANDNASCENTLEAVESAPPEAREDABNORMALTHESYMPTOMCAUSEDBYPPVXPLWASMORESERIOUSTHANTHATCAUSEDBYTHECONTROLP45P“P1MAYENHANCEPATHOGENICITYOFPVXWHICHSUGGESTEDSOMEFUNCTIONSOFPLPROTEININADDITION，THESYMPTOMOFPPVXPIINOCULATINGLINESAPPEAREDMUCHLATERCOMPARINGWITHCONTROL，WHICHSUGGESTEDTHATTHEEXPRESSIONOFP1PROTEINMAYDELAYTHESYSTEMICMOVEMENTOFPVXVIRUSPARTICLESANACTIVATORPROTEINGENEFROMFUNGIWHICHWASSHOWNTOENHANCEPLANTSRESISTANCEAGAINSTVIRUSWASCONSTRUCTEDWITHTHEPLANTEXPRESSIONVECTORPCAMBIAL301，ANDTRANSFORMEDINTOTOBACCOUSINGAGROBACTERIUMMEDIATEDTRANSFORMATIONAPPROACHPROLIFERATIONANDREGENERATIONOFTRANSGENICCELLSWERESELECTEDINCULTUREMEDIUMWITHHYGROMYCINBTHELEAFDISCSWERECULTIVATEDINMSMEDIUMFORTWODAYSINDARK，THENWERETRANSFERREDTOSELECTIVEMEDIUMMSIGEMMULEAPPEAREDWITHINTHREEWEEKSTHENTHEPLANILETSWERECULTIVATEDINMSI【TOINDUCEROOTFORMAFIONMORETHAN100TRANSGENICPLANTLETSHAVEBEENOBTAINEDPCRANDRTPCRANALYSISINDICATEDTHAT29OUTOFTHE30PLANTLETSRANDOMLYSAMPLEDWERETRANSGENICPLANTSTMVWASINOCULATEDTOBOTHTHETRANSGENICANDNONTRANSGENICWILDTYPEPLANTSBOTHOFTHEMSHOWEDSYSTEMICMOSAICSYMPTOM，BUTTHESYMPTOMOFTRANSGENICTOBACCOWASMUCHMILDERAMONTHLATERTHESYMPTOMBECAMESERIOUS，BUTTHELEAVESSHOWEDONLYCHLOROSISBUTNOTYELLOW。THEACTIVATORPROTEINMAYPLAYACERTAINROLEINDEFENSEATTHEBEGINNINGOFTMVINFECTIONPRODUCTIONOFTRANSGENICTOBACCOWITHACTIVATORPROTEINGENEISSIGNIFICANTFORBOTHBREEDINGTOBACCOWITHHIGHRESISTANCETOVIRESANDFURTHERINVESTIGATIONOFTHISGENEKEYWORDSPENNISETUMMOSAICVIRUS，P1GENE，TRANSGENICTOBACCO，ACTIVATORPROTEINII

簡(jiǎn)介：趙振鵬豬流行性腹瀉病毒的流行病學(xué)調(diào)查及快速檢測(cè)方法的初步建立1摘要由豬流行性腹瀉病毒PORCINEEPIDEMICDIARRHEAVIRUS，PEDV引起的豬流行性腹瀉PORCINEEPIDEMICDIARRHEA，PED是一種急性胃腸炎疾病，其主要癥狀為水樣腹瀉和嘔吐，現(xiàn)在已經(jīng)成為一種世界性傳染病。2010年我國(guó)南部大面積爆發(fā)豬流行性腹瀉疫情，各個(gè)年齡段的豬均發(fā)病，新生仔豬的發(fā)病率和死亡率都很高。為了了解近兩年該病在我國(guó)的流行病學(xué)特點(diǎn)和建立快速檢測(cè)方法，我們主要開展了以下研究1．豬流行性腹瀉病毒的遺傳變異分析為了調(diào)查我國(guó)豬流行性腹瀉病毒的遺傳變異情況，本研究通過RTPCR方法對(duì)從江蘇、吉林、上海、廣東、河南五省市規(guī)模豬場(chǎng)采集來的314份樣本進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)出PEDV陽性病料76份，陽性率達(dá)24．2％，其中廣東省幾個(gè)豬場(chǎng)的PEDV陽性率最高，高達(dá)94．7％，吉林省幾個(gè)豬場(chǎng)沒檢出PEDV陽性，另外江蘇省、河南省和上海市的PEDV陽性率分別為17．8％、31．6％和27．6％，表明PED在我國(guó)部分地區(qū)仍流行嚴(yán)重，有必要對(duì)PED采取更加嚴(yán)格的防范措施。對(duì)部分陽性樣品中PEDV的S1、M、ORF3基因進(jìn)行克隆、測(cè)序和比對(duì)分析，結(jié)果表明我國(guó)大部分流行株與韓國(guó)、美國(guó)流行株同源性較近，與歐洲流行株以及疫苗株CV777同源性較遠(yuǎn)，只有HNL3和YM毒株與歐洲流行株和疫苗株CV777同源性較近。比對(duì)發(fā)現(xiàn)S1蛋白氨基酸發(fā)生變異明顯，M蛋白和ORF3蛋白的氨基酸較為保守，另外HNL3和YM毒株的ORF3基因與疫苗株DRL3的ORF3基因相同，有49個(gè)核苷酸缺失。2．豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體的研制及特性鑒定為了獲得可用于建立PEDV快速檢測(cè)方法的單克隆抗體，本研究將超速離心法純化的PEDV作為免疫原，免疫6～8周齡BALB／C小鼠，利用免疫熒光法IFA篩選出9株能夠穩(wěn)定分泌抗PEDV抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為PEDV1C12、PEDV2A9、PEDV2C11、PEDV2E5、PEDV2F1、PEDV3E9、PEDV5812、PEDV6DL、PEDV6E10；隨后對(duì)單克隆抗體的腹水熒光效價(jià)、亞類以及特異性等生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。單克隆抗體亞類鑒定結(jié)果顯示，7株單克隆抗體亞類為196，2株為I鮒；其腹水的IFA效價(jià)分別為5．12X104、1．08X104、5．12X104、2．16X104、1．08104、2．048X105、3．2X103、1．024X105、1．024X105WESTERNBBT結(jié)果表明，8株單克隆抗體是PEDVN蛋白特異性抗體，PEDV2A9有可能為針對(duì)構(gòu)象表位的抗體。3．豬流行性腹瀉病毒快速檢測(cè)方法的初步建立為了建立豬流行性腹瀉病毒快速檢測(cè)方法，本研究利用檸檬酸三鈉還原法制備了粒徑30NM的膠體金溶液，采用雙抗體夾心的原理制備PEDV膠體金試紙條。即將金標(biāo)抗體EPIDEMIOLOGICALINVESTIGATIONOFPEDVANDPRELIMINARYDEVELOPMENTOFRAPIDDETECTIONMETHODSABSTRACTPORCINEEPIDEMICDIARRHEAPEDCAUSEDBYPORCINEEPIDEMICDIARRHEAVIRUSPEDVWASADEVASTATINGENTERICDISEASEWITHACUTEDIARRHEA，DEHYDRATIONANDSIGNIFICANTMORTALITYINSWINE．THEREBY,ITISONEOFTHEMOSTIMPORTANTDISEASECAUSINGHEAVYECONOMICLOSSESINCHINA．IN2010，ANOUTBREAKOFPEDOCCURREDINCHINAANDCAUSEDSIGNIFICANTHIGHMORALITYINPIGLETS．TOINVESTIGATETHEMOLECULAREPIDEMIOBGICALFEATURESANDDYNAMICTRENDSOFPEDVANDCOMMITTEDTOBETTERPREVENTIONANDCONTROIOFTHEDISEASE，WECONDUCTEDTHISSTUDYMAINLYINCLUDINGTHREEPARTSASDESCRIBEDBELOW．1．EPIDEMIOLOGYOFPEDINCHINA314SPECIMENSAMPLESWERECOLLECTEDIN5PROVINCESOFCHINADURING2012TO2015ANDWEREDETECTEDBYREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCRTOINVESTIGATETHEEPIDEMIOBGYOFPED．THERESUKSSHOWEDTHEPOSITIVERATEREACHEDTO24．2％76／314．PEDPOSITIVERATEOFGUANGDONG、SHANGHAI、JIANGSU、HENANANDJILINWERE94．7％、27．6％、17．8％、31．6％AND0％RESPECTIVELY．SOMEREPRESENTATIVESAMPLESWERESELECTED，ANDS，M，ORF3GENEOFWHICHWEREAMPLIFTED，CBNEDANDSEQUENEED．NUCLEOTIDESEQUENCEALIGNMENTREVEALEDTHATCHINESEEPIDEMICSTRAINSSHAREDTHEHIGHESTIDENTITYWITHSOUTHKOREANANDAMERICANEPIDEMICSTRAINS，BUTLOWESTIDENTITYWITHEUROPEANSTRAINSANDCV777．AMINOACIDSEQUENCEANALYSISBASEDONSTRUCTURALPROTEINSSHOWEDASIGNIFICANTDIVERSITYINS1PROTEIN．AMINOACIDSEQUENCEOFMANDORF3WEREHIGHLYCONSERVED．ORF3GENEWASTHEONLYACCESSORYGENEOFPEDV,ANDTHENUCLEOTIDESEQUENCEALIGNMENTSHOWEDADELETIONABOUT49BPINORF3OFHN13ANDYM．2．PREPARATIONOFMONOCLONALANTIBODIESAGAINSTPEDVBALB／CMICEWEREIMMUNIZEDWITHULTRACENTRIFUGATIONPURIFIEDVIRIONS．AFTERBOOSTIMMUNIZATIONTHESPLEENCELLSOFIMMUNIZEDMICEWEREFUSEDWITHSP2／0MYEBMACELLS．DETCTIONBYIFA，NINEHYBRIDOMACELLSWHICHCANSECRETEMONOCLONALANTIBODIESAGAINSTPEDVWEREGENERATED．THESEHYBRIDOMACELLSWERENAMEDASPEDV1C12，PEDV2A9，PEDV2C11、PEDV二2E5、PEDV2FL、PEDV3E9、PEDV二5812、PEDV6D1、PEDV6E10．THEIMMUNOGLOBULINSUBTYPESOFMONOCLONALANTBODIESWEREIDENTIFIEDWITHACOMMERCIAL

簡(jiǎn)介：貴州大學(xué)2016屆碩士研究生學(xué)位論文屆碩士研究生學(xué)位論文豬病毒性腹瀉豬病毒性腹瀉PCR檢測(cè)方法建立與流行病學(xué)調(diào)查檢測(cè)方法建立與流行病學(xué)調(diào)查學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向研究方向獸醫(yī)獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共衛(wèi)生學(xué)導(dǎo)師師王開功王開功教授指導(dǎo)小組文明教授周碧君教授程振濤副教授溫貴蘭副教授鮮思美副教授研究生生馮旭芳馮旭芳中國(guó)﹒貴州﹒貴陽2016年6月分類號(hào)S8513論文編號(hào)2013022064密級(jí)公開課題來源課題來源1貴州省生豬質(zhì)量安全工程技術(shù)研究中心建設(shè)項(xiàng)目“生豬健康養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與技術(shù)研發(fā)”黔科合農(nóng)C字20114022號(hào)；2貴州省科學(xué)技術(shù)廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目“貴州省仔豬腹瀉性疫病風(fēng)險(xiǎn)分析及綜合防控技術(shù)研究”黔科合NY201530091號(hào)；3貴州省農(nóng)業(yè)委員會(huì)科技計(jì)劃項(xiàng)“貴州省2015年重大動(dòng)物疫病省級(jí)定點(diǎn)監(jiān)測(cè)”201501號(hào)。資助完成資助完成

簡(jiǎn)介：揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文MASTERTHESISBIOLOGICALANDPHYLOGENETICCHARACTERIZATIONOFDIRRERENTSUBGENOTYPENEWCASTLEDISEASEVIRUSESBELONGINGTOGENOTYPEⅥBYMASTERCANDIDATEJIAJIALIUADVISORPROFXIUFANLIUMAJORPREVENTIVEVETERINARYMEDICINEYANGZHOUUNIVERSITYJUNE，2016揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文的核苷酸與氨基酸序列的同源性分別為925～100％和927～100％。同時(shí)，鴿源和雞源Ⅵ型毒株均與60年代VIA亞型分離株的遺傳距離較近；一氨基酸序列同源性分別為952～984％和960～968％，表明80年代分離到的Ⅵ型毒株均由該亞型進(jìn)化而來；而上世紀(jì)80年代之后分離的病毒與VIA亞型之間的遺傳距離越來越遠(yuǎn)。因此，1980S分離到的基因Ⅵ型NDV均由VIA亞型進(jìn)化而來，隨著時(shí)間的推移病毒在進(jìn)化過程中出現(xiàn)了多個(gè)基因亞型。對(duì)40株基因Ⅵ型NDV的全基因序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析結(jié)果與上述基本一致。根據(jù)全基因序列與各基因編碼區(qū)序列分別繪制的遺傳進(jìn)化樹保持一致，說明基因Ⅵ型NDV的遺傳進(jìn)化是在基因組水平上整體進(jìn)行的。此外，為了進(jìn)一步比較鴿源與雞源毒株在分子水平上的差異，我們對(duì)40株基因Ⅵ型NDV的核苷酸及各基因編碼的氨基酸置換情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，與雞源基因Ⅵ型NDV相比，鴿源毒株前導(dǎo)序列的第32位核苷酸由A變?yōu)镚，且鴿源毒株在6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白上均出現(xiàn)了特征性氨基酸位點(diǎn)的變化。關(guān)鍵詞新城疫病毒；基因Ⅵ型；雞；鴿；致病性；遺傳進(jìn)化分析

簡(jiǎn)介：分類號(hào)S8553單位代碼10364密級(jí)學(xué)號(hào)13720222安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文野鳥源新城疫病毒的基因組分析及其生物學(xué)特性鑒定GENOMICANALYSISBIOLOGICALACTERIZATIONSOFNEWCASTLEDISEASEVIRUSESISOLATEDFROMWILDBIRDS研究生李小陽指導(dǎo)教師李郁教授合作指導(dǎo)老師朱啟運(yùn)研究員申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向家畜傳染病學(xué)所在學(xué)院動(dòng)物科技院答辯委員會(huì)主席2016年6月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名時(shí)間年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議研究生簽名時(shí)間年月日第一導(dǎo)師簽名時(shí)間年月日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)S8553密級(jí)碩士學(xué)位論文華南地區(qū)豬場(chǎng)流感病毒血清學(xué)調(diào)查及重組H3N2亞型SIV候選疫苗株的初步研究何淑儀指導(dǎo)教指導(dǎo)教師張桂紅教授學(xué)院名學(xué)院名稱獸醫(yī)學(xué)院專業(yè)名專業(yè)名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席黃淑堅(jiān)教授中國(guó)廣州2016年6月I摘要豬是流感病毒重要的宿主之一，不僅能感染人流感病毒，而且能感染禽流感病毒，對(duì)當(dāng)前的流感生態(tài)環(huán)境的形成起到重要的作用。甲型H1N12009流感病毒的爆發(fā)，說明豬能夠獨(dú)立地促進(jìn)流感毒株的產(chǎn)生。豬流感（SWINEINFLUENZA，SI）由豬流感病毒（SWINEINFLUENZAVIRUS，SIV）引起，是一種急性和高度感染性呼吸系統(tǒng)性疾病，一般呈現(xiàn)地方流行性。典型的臨床癥狀表現(xiàn)為突發(fā)性咳嗽、高熱、嗜睡、厭食、鼻涕、呼吸困難和體重下降等，具有高發(fā)病率但低死亡率的特征。SI極易導(dǎo)致繼發(fā)感染或混合感染，以致進(jìn)一步發(fā)展成豬呼吸道疾病綜合癥，造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。H1N1、H1N2和H3N2亞型豬流感病毒是目前主要的流行毒株。為了調(diào)查中國(guó)華南地區(qū)豬群豬流感病毒和甲型H1N12009流感病毒（H1N1PDM09）的流行情況，本研究于2013年10月至2014年9月期間，在中國(guó)華南地區(qū)的廣東省、江西省、湖南省、福建省和廣西壯族自治區(qū)共73個(gè)豬場(chǎng)，采集未進(jìn)行流感疫苗免疫的臨床健康豬的血清樣品2208份。采用歐亞類禽豬流感H1N1、類人豬流感H3N2和甲型H1N1PDM09流感病毒，通過血凝抑制試驗(yàn)（HI），對(duì)這2208份血清進(jìn)行SIV和H1N1PDM09流感病毒血清學(xué)檢測(cè)。結(jié)果顯示流感病毒抗體為陽性的血清共1269份（5742）。SIV和H1N1PDM09流感病毒的流行存在明顯的區(qū)域性差異，其中廣東省和廣西壯族自治區(qū)的感染率最高（P001），分別為6448和7500。EAH1N1、H3N2SIV和H1N1PDM09流感病毒抗體陽性率分別是2251、3297和2649。H1N1PDM09流感病毒的抗體幾何平均滴度（GEOMETRICMEANANTIBODYTITERS，GMT）最高（9193104，P005）。EAH1N1和H3N2SIV在冬季血清陽性率最高，然而在冬末（2月）陽性率卻最低（P001）。H1N1PDM09流感病毒抗體陽性率在5月和9月出現(xiàn)高峰（P001）。母豬體內(nèi)的EAH1N1和H1N1PDM09流感病毒抗體陽性率分別為2593和2804，均比仔豬（1963和2329）和育肥豬（2232和2716）高，但仔豬的H3N2SIV抗體陽性率卻比較高。本研究為華南地區(qū)豬場(chǎng)SIV和H1N1PDM09流感病毒的預(yù)防提供參考依據(jù)。普遍認(rèn)為，疫苗是抵抗流感病毒感染最有效的方法。至今，油佐劑的全病毒滅活疫苗是應(yīng)用最廣泛且技術(shù)最成熟的豬流感病毒疫苗。本研究利用反向遺傳技術(shù)，成功構(gòu)建了H3N2亞型豬流感病毒L22的8質(zhì)粒系統(tǒng)。將ASWINEGUANGDONGL222010（H3N2）豬流感病毒的HA、NA基因與APUERTORICO81934的6個(gè)內(nèi)部基因片段重

簡(jiǎn)介：分類號(hào)S48239密級(jí)博士學(xué)位論文廣東省豬群和執(zhí)業(yè)人群流感病毒血清學(xué)調(diào)查及新型PICV載體流感疫苗免疫保護(hù)效果評(píng)價(jià)陳濟(jì)鐺指導(dǎo)教指導(dǎo)教師張桂紅教授學(xué)院名學(xué)院名稱獸醫(yī)學(xué)院專業(yè)名專業(yè)名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席陸承平教授中國(guó)廣州2016年6月I摘要A型流感病毒宿主范圍廣泛，如人、豬、禽、犬等。由于豬呼吸道上皮細(xì)胞的受體分布特性，豬可以被禽類和人類流感病毒感染，而豬流感病毒也可感染人。因此，豬被認(rèn)為是人、豬、禽流感病毒的天然“混合器”，豬流感病毒的常規(guī)監(jiān)測(cè)具有重要的公共衛(wèi)生安全學(xué)意義。目前抵抗流感病毒侵襲的最好方法是進(jìn)行疫苗免疫。但由于流感病毒基因組特征，病毒基因極不穩(wěn)定，進(jìn)化頻繁。疫苗形式及免疫策略有限，這使有效預(yù)防流感病毒的傳染和傳播變得困難。為評(píng)估廣東地區(qū)豬群、執(zhí)業(yè)人群感染多種亞型流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)，從2013年3月至2014年3月，分別從廣東省6個(gè)不同城市的生豬養(yǎng)殖場(chǎng)和活禽市場(chǎng)中分別采集豬群血清樣本，共6510份。其中，生豬養(yǎng)殖場(chǎng)樣本4910份，活禽市場(chǎng)樣本1600份。通過血凝抑制（HI）檢測(cè)血清中抗人類、豬和禽流感病毒抗體的水平，同時(shí)分析各采樣城市地理位置、生長(zhǎng)階段（或活禽市場(chǎng)中存留時(shí)間）、季節(jié)等因素對(duì)血清陽性率影響。通過單因素分析法，計(jì)算各因素對(duì)豬群感染不同流感病毒風(fēng)險(xiǎn)的影響。結(jié)果顯示，影響豬群不同亞型流感病毒感染的主要因素為生長(zhǎng)階段（或活禽市場(chǎng)內(nèi)存留時(shí)間）和季節(jié)因素。在活禽市場(chǎng)中存留時(shí)間較長(zhǎng)的豬只，感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于養(yǎng)殖場(chǎng)的豬。廣東各地豬群在秋季感染流感病毒風(fēng)險(xiǎn)較其他季節(jié)高。此外與禽類有密切接觸是豬群感染禽流感（及類禽豬流感）的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。由2013年12月起至2014年1月，在廣東省各地選取符合條件的豬場(chǎng)工人，禽場(chǎng)工人，活禽市場(chǎng)工作人員以及寵物醫(yī)院獸醫(yī)進(jìn)行血清樣本采集，同時(shí)采集無長(zhǎng)期動(dòng)物接觸史的志愿者血清作為對(duì)照。利用HI試驗(yàn)檢測(cè)志愿者血清中抗人類、豬、禽和犬流感病毒抗體的水平。運(yùn)用單因素分析方法計(jì)算不同因素（如，年齡、性別、工作種類以及動(dòng)物接觸情況等）對(duì)人類血清抗體陽性率的影響。通過分析發(fā)現(xiàn)豬場(chǎng)工人感染經(jīng)典豬流感和歐亞類禽豬流感的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于對(duì)照組。而禽場(chǎng)工人感染禽流感病毒AVH7和AVH9的風(fēng)險(xiǎn)則顯著高于非禽類接觸人群?；钋菔袌?chǎng)工作人員感染AVH5、AVH7和AVH9的風(fēng)險(xiǎn)高于其他執(zhí)業(yè)人群。活禽市場(chǎng)工作人員感染豬流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)也高于對(duì)照組人群。該結(jié)果提示活禽市場(chǎng)工作人員同時(shí)面臨兩種不同宿主的流感病毒感染風(fēng)險(xiǎn)。PICHINDE病毒（PICV）屬于沙粒病毒科，沙粒病毒屬成員，是雙義編碼RNA病毒。在感染初期主要攻擊巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，并引起高水平的T細(xì)胞免疫反應(yīng)。

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼10564學(xué)號(hào)2013202843分類號(hào)S85265密級(jí)碩士學(xué)位論文表達(dá)犬瘟熱病毒H基因重組狂犬病病毒生物學(xué)特性的研究趙靜指導(dǎo)教指導(dǎo)教師郭霄峰教授學(xué)院名學(xué)院名稱獸醫(yī)學(xué)院專業(yè)名專業(yè)名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席陳金頂教授中國(guó)廣州2016年6月摘要狂犬?。≧ABIES）是由狂犬病病毒（RABIESVIRUSRABV引起的一種人獸共患傳染病，在全球范圍內(nèi)流行，是目前病死率最高的傳染病之一，一旦感染出現(xiàn)臨床癥狀，幾乎100的死亡。犬瘟熱（CANINEDISTEMPER，CD）是由犬瘟熱病毒（CANINEDISTEMPERVRUS，CDV）引起的高度接觸性傳染病，它在全球范圍內(nèi)流行，死亡率高達(dá)80％，給養(yǎng)犬業(yè)和毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的危害。預(yù)防接種是控制狂犬病和犬瘟熱的主要途徑。目前，傳統(tǒng)的狂犬病弱毒疫苗成本低廉，但存在毒力殘留或致病性回復(fù)突變的安全隱患；進(jìn)口疫苗安全性高，免疫效果好，但價(jià)格昂貴，難以廣泛推廣使用。研制安全、高效、成本低廉的動(dòng)物狂犬病疫苗，仍具現(xiàn)實(shí)意義。市場(chǎng)上應(yīng)用廣泛的犬瘟熱疫苗存在熱穩(wěn)定性差、免疫效果易受母源抗體干擾等多重問題。因此，研制安全、高效的新型CD疫苗具有重要意義。本研究利用已建立的狂犬病病毒（RABIESVIRUSRABV反向遺傳操作技術(shù)平臺(tái)，在通過反向遺傳拯救的狂犬病病毒弱毒株HEPDG的基礎(chǔ)上，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)在狂犬病病毒（HEPDG株）基因組G與L之間再插入犬瘟熱病毒H基因，構(gòu)建了重組全長(zhǎng)CDNA質(zhì)粒PHEPDG（H），成功拯救出同時(shí)表達(dá)狂犬病病毒雙G蛋白和犬瘟熱病毒H蛋白的重組狂犬病病毒HEPDG（H）。通過對(duì)重組病毒的生物學(xué)特性研究，該重組狂犬病毒HEPDG（H）可以在BHK細(xì)胞上穩(wěn)定的增殖，達(dá)到較高的病毒滴度。抽取該重組病毒第2、5、10代的RNA，進(jìn)行RTPCR擴(kuò)增H、DG基因并測(cè)序，基因未發(fā)生突變。熒光定量PCR和WESTERNBLOT驗(yàn)證表明外源基因H和DG能夠表達(dá)。病毒的生長(zhǎng)曲線表明HEPDG（H）保持著與HEPDG毒株相似的生長(zhǎng)特性，在96H達(dá)到高峰，但重組病毒HEPDG（H）的滴度在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)略低于HEPDG毒株。病毒的擴(kuò)散感染實(shí)驗(yàn)顯示在低MOI的情況下，重組病毒HEPDG（H）的擴(kuò)散能力不及HEPDG毒株，這與生長(zhǎng)曲線相吻合。致病性實(shí)驗(yàn)顯示，重組病毒HEPDG（H）與HEPDG對(duì)67周齡成鼠沒有致死性，且重組病毒HEPDG（H）對(duì)成鼠體重的影響弱于HEPDG；而對(duì)3日齡內(nèi)的乳鼠，結(jié)果顯示HEPDG（H）的致命性高于HEPDG。免疫原性實(shí)驗(yàn)顯示，重組病毒HEPDG（H）與HEPDG均能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抗狂犬病的抗體，在7D時(shí)抗體已達(dá)到保護(hù)水平（05EU），且HEPDG（H）可誘導(dǎo)產(chǎn)生CDV中和抗體。攻毒試驗(yàn)顯示HEPDG（H）與HEPDG免疫3周后，誘導(dǎo)的RABV抗體水平能夠抵御CVS24的攻擊，這些結(jié)果表明，重組的狂犬病病毒可以作為有潛力的疫苗候選株。