簡介：分類號R71171密級單位代碼10422學(xué)號上PD即口工J；口弓和J▲東’，番碩士學(xué)位論文THESISFORMASTERDEGREE專業(yè)學(xué)位論文題目較大囊性子宮腺肌病2例報(bào)告并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)CASEREPORTANDLITERATUREREVIEWOFBIGCYSTICUTERINEADENOMYOSIS培養(yǎng)專業(yè)指導(dǎo)合作單位名稱教師導(dǎo)師醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科學(xué)王國云教授2015年9月10EL目錄摘要1ABSTRACT3符號說明5前言6日IJ吾材料與方法8結(jié)果12日木”討‘淪13結(jié)論17參考文獻(xiàn)18附圖20子宮內(nèi)膜異位研究進(jìn)展文獻(xiàn)復(fù)習(xí)28參考文獻(xiàn)40致謝45攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄46

簡介：目的通過觀察女性GRAVES病患者血清IGF1、IGF2表達(dá)水平，探討其在GD引起的骨量下降或骨質(zhì)疏松發(fā)病機(jī)制中的作用。方法收集于2013年10月2014年8月在我院內(nèi)分泌科就診的初發(fā)女性GD患者57例，分為絕經(jīng)前31例，年齡2448歲，平均年齡（351±81歲，絕經(jīng)后26例，年齡4461歲，平均年齡（530±68）歲。對照組選擇年齡、性別均與病例組相匹配的我院健康體檢者46例，其中絕經(jīng)前18例，年齡2249歲，平均年齡（344±76）歲，絕經(jīng)后28例，年齡在4658歲，平均年齡（520±67歲。根據(jù)1994年WHO骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)，以腰椎或股骨頸TZ值判斷（絕經(jīng)后女性以T評分為標(biāo)準(zhǔn)，絕經(jīng)前女性以Z評分為標(biāo)準(zhǔn)），將GRAVES病患者分OP組（TZ值≤－25）、低骨量組（－25＜TZ值＜－10）、骨量正常組（－1≤TZ值≤1）三個亞組。采用ELISA法測定IGF1、IGF2水平，放射免疫法檢測FT3、FT4、TSH水平，電化學(xué)發(fā)光法檢測反應(yīng)骨轉(zhuǎn)換的指標(biāo)NOCN、TP1NP、ΒCROSSLAPS水平，化學(xué)發(fā)光法檢測E2、FSH、LH水平，全自動生化分析儀檢測CA、P、FPG、TC、TG、HDL、LDL水平。所有患者均于采血當(dāng)天采用雙能X線骨密度儀（DXA）測定腰椎（L14）和股骨頸（NECK）及前臂13的骨密度。結(jié)果1女性GD患者絕經(jīng)前后組與相應(yīng)對照組比，年齡、絕經(jīng)年限無明顯差異，BMI降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）；女性GD患者絕經(jīng)前后與健康體檢者相比，血FT3、FT4、IGF1顯著升高，TSH、IGF2降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005，P＜001）；血NOCN、TP1NP、ΒCROSSLAPS顯著升高，血TC、TG、LDL、HDL水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005，P＜001）；FPG水平升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）；血GA、血P無明顯變化；女性絕經(jīng)后甲亢組與對照組比較，血FSH、LH、E2水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）；女性GD患者絕經(jīng)前后與健康體檢者相比，NECK、前臂13BMD降低，且以前臂13降低更明顯P＜005，P＜001，而L14BMD在女性絕經(jīng)后GD患者中較健康組降低明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005，在女性絕經(jīng)前GD患者中L14BMD與健康組相比無明顯變化。2女性絕經(jīng)后與相應(yīng)絕經(jīng)前相比，無論是否患有GD，BMI升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005），血ΒCROSSLAPS、NOCN、TP1NP升高，血IGF1、IGF2水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PP3在女性GD患者中按骨密度測定結(jié)果TZ評分分組，與骨量正常組相比，無論絕經(jīng)前后，骨質(zhì)疏松組與骨量下降組血IGF1、NOCN、TP1NP、ΒCROSSLAPS水平均升高，IGF2水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P4在女性GD患者中，血IGF1與血FT3、FT4、TP1NP呈顯著正相關(guān)（R0543，R0547，R0523，P＜005，與TSH、前臂13、NECK及L總的BMD呈負(fù)相關(guān)（R0385，R0353，R0444，R0384，P＜005；血IGF2與血FT3、FT4、ΒCROSSLAPS呈顯著負(fù)相關(guān)（R0422，R0405，R0504，P＜005，與TSH、前臂13、NECK及L總的BMD呈正相關(guān)（R0423，R0412，R0435，R0479，P＜005。結(jié)論1女性GD患者，血IGF1水平顯著升高，與血FT3、FT4呈正相關(guān)，與TSH呈負(fù)相關(guān)，可能參與對甲狀腺功能的調(diào)節(jié)，且與血清TP1NP呈正相關(guān)，與ΒCROSSLAPS相關(guān)性不明顯，表明IGF1主要通過影響成骨細(xì)胞調(diào)節(jié)GD患者的骨代謝，但其與各部位BMD均呈負(fù)相關(guān)，考慮可能IGF1促成骨作用不足以抵抗GD引起的骨丟失，最終導(dǎo)致患者BMD下降，且在前臂13處下降更為明顯；2女性GD患者，血IGF2水平顯著降低，與血TSH呈正相關(guān)，與FT3、FT4呈負(fù)相關(guān)，考慮血清中高水平的FT3、FT4可能抑制IGF2的分泌，其與血清ΒCROSSLAPS呈負(fù)相關(guān)，與TP1NP、NOCN的相關(guān)性不明顯，并與各部位BMD均呈顯著正相關(guān)，表明低水平的IGF2主要影響破骨細(xì)胞，由于GD患者本身存在高骨轉(zhuǎn)換，在此基礎(chǔ)上血清中低水平的IGF2可通過增加破骨細(xì)胞活性，促進(jìn)骨吸收，加速骨轉(zhuǎn)換，加重OP的發(fā)生；3絕經(jīng)后婦女，無論是否患有GD，血清IGF1、IGF2水平均降低，且在OP組中降低更為顯著，表明IGF1、IGF2均參與了PMOP的發(fā)生與發(fā)展。

簡介：骨是成年人體中少數(shù)幾個仍保持再生潛能的器官之一，是唯一一個生命中能保持不斷重塑的器官。骨有兩種形成方式即膜內(nèi)成骨和軟骨內(nèi)成骨。骨再生與軟骨內(nèi)成骨相似，主要始于間充質(zhì)干細(xì)胞的趨化和增殖。有效的骨再生在臨床上許多骨或肌肉骨骼系統(tǒng)疾病中發(fā)揮著非常重要的作用，如部分骨缺損、骨折不愈合，骨質(zhì)疏松性骨折，失敗的脊椎融合術(shù)等。因此，探究闡明骨形成的分子機(jī)制對于了解骨疾病的發(fā)病機(jī)理至關(guān)重要。在胚胎成骨以及成人骨修復(fù)和骨轉(zhuǎn)換中涉及到一類被廣泛應(yīng)用的細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS，傳統(tǒng)認(rèn)為MSCS主要存在于骨髓，但是后期研究發(fā)現(xiàn)MSCS也可以存在其他組織器官。MSCS具有多向分化潛能，能分別向成骨、成脂、成軟骨、成纖維等細(xì)胞系分化。有許多研究顯示有許多不同的信號通路在調(diào)控干細(xì)胞自我更新及世系提交等方面發(fā)揮著重要的作用，但是在骨再生研究中調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨方向分化的機(jī)制是需要關(guān)注且探討的關(guān)鍵性問題。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BONEMPHGEICPROTEINS，BMPS）對于發(fā)育過程中的細(xì)胞增殖和分化都發(fā)揮著重要的作用，可以調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞向骨、軟骨、脂肪和肌腱等方向分化，是研究比較早，也是最具有潛力的一類誘導(dǎo)MSCS成骨分化的細(xì)胞因子。BMPS屬于TGFΒ超家族成員，目前已知有20余種BMPS。本實(shí)驗(yàn)室前期對BMP2BMP15共14種BMPS進(jìn)行了系統(tǒng)分析，發(fā)現(xiàn)BMP9是誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)和體外成骨分化能力最強(qiáng)的BMPS成員。BMP9（也稱為生長分化因子2，GDF2）最初是從生長發(fā)育的小鼠肝臟中分離得到的，它的作用包括誘導(dǎo)和維持前腦膽堿能神經(jīng)元的表型，抑制肝臟葡萄糖產(chǎn)生，誘導(dǎo)脂代謝關(guān)鍵酶表達(dá)及刺激小鼠鐵調(diào)素1的表達(dá)。BMP9誘導(dǎo)成骨的活性具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值，也越來越受到關(guān)注，但是BMP9在誘導(dǎo)干細(xì)胞成骨過程中的調(diào)節(jié)機(jī)制卻不甚明了。許多其他生長因子可能與BMP9誘導(dǎo)成骨存在協(xié)同或拮抗作用，本實(shí)驗(yàn)室也已經(jīng)進(jìn)一步證實(shí)了BMP9調(diào)節(jié)著一系列特異的下游靶通路，這些通路的因子都在BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中發(fā)揮著重要作用。本實(shí)驗(yàn)研究的目的是探究1NOTCH信號通路是否與BMP9在誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中存在著必然的聯(lián)系2NOTCH信號通路在BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中發(fā)揮著關(guān)鍵且不可缺的作用3BMP9調(diào)控NOTCH信號通路誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的可能機(jī)制。在本研究的第一部分首先，使用NOTCH信號傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵酶Γ分泌酶的抑制劑COMPOUNDE抑制了Γ分泌酶的活性，通過檢測早期成骨指標(biāo)堿性磷酸酶ALP活性，研究其對BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化作用的影響，結(jié)果表明抑制Γ分泌酶的活性可以降低BMP9誘導(dǎo)IMEFS細(xì)胞的早期成骨作用。隨后，通過茜素紅S染色分析成骨晚期指標(biāo)鈣鹽沉積的情況，結(jié)果顯示抑制Γ分泌酶的活性可以降低BMP9誘導(dǎo)的IMEFS細(xì)胞的晚期成骨作用。此部分初步證實(shí)，NOTCH信號通路在BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中發(fā)揮著重要的作用，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。接下來，提取IMEFS總RNA，通過RTPCR檢測NOTCH受體和配體的內(nèi)源性表達(dá)情況，結(jié)果表明NOTCH1表達(dá)最多，而NOTCH4，DLL3及DLL4則看不到表達(dá)。因此，我們想看看表達(dá)最多的NOTCH1對BMP9誘導(dǎo)IMEFS細(xì)胞成骨分化的影響，提取顯性負(fù)性NOTCH1DNNOTCH1腺病毒感染過的IMEFS的總RNA，進(jìn)行RTPCR證實(shí)DNNOTCH1的競爭性抑制作用，為接下來的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)保證抑制NOTCH1活性奠定基礎(chǔ)。體外實(shí)驗(yàn)，通過ALP定性和定量實(shí)驗(yàn)，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測OPN和OCN表達(dá)以及茜素紅S染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DNNOTCH1可以抑制BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞早期成骨指標(biāo)ALP的活性，抑制晚期成骨指標(biāo)OPN和OCN的表達(dá)以及抑制鈣鹽沉積，并且其抑制作用存在劑量依賴性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，將腺病毒DNNOTCH1和BMP9共同感染IMEFS，在裸鼠皮下進(jìn)行注射，檢測DNNOTCH1競爭性抑制NOTCH1后，對BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞的體內(nèi)成骨作用的影響，結(jié)果表明1細(xì)胞接種4周后，各組都形成了堅(jiān)硬的包塊，表明各組均有骨組織形成。2MICROCT掃描和影像重建結(jié)果顯示抑制NOTCH1作用可降低形成的骨包塊的體積。3石蠟包埋、切片進(jìn)行HE染色，結(jié)果顯示DNNOTCH1能夠抑制骨小梁數(shù)量及形成質(zhì)量。4ALCIANBLUE染色結(jié)果顯示DNNOTCH1能導(dǎo)致不成熟的軟骨基質(zhì)形成。5MASSONSTRICHROME染色結(jié)果顯示DNNOTCH1導(dǎo)致藍(lán)綠色的骨基質(zhì)明顯減少，骨組織成熟度降低。總之，抑制NOTCH1的活性，能夠降低BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)成骨分化的數(shù)量以及成熟質(zhì)量，這與之前的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦相吻合。通過前面兩個方面的研究，可知道NOTCH與BMP9在誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化方面存在著密切的聯(lián)系。然后，又引入使用兩個配體JAGGED1和DLL1過表達(dá)腺病毒，通過提取腺病毒JAGGED1或DLL1感染過的IMEFS細(xì)胞的總RNA，進(jìn)行RTPCR驗(yàn)證JAGGED1及DLL1過表達(dá)的效果，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)打基礎(chǔ)。在體外實(shí)驗(yàn)中，用JAGGED1或DLL1與BMP9聯(lián)合感染IMEFS后，通過ALP定性和定量實(shí)驗(yàn)檢測早期成骨指標(biāo)ALP活性，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測成骨晚期指標(biāo)OPN和OCN表達(dá)以及茜素紅S染色檢測晚期成骨指標(biāo)鈣鹽沉積，結(jié)果顯示DLL1能夠在體外增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)IMEFS成骨分化的作用，JAGGED1能在體外增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的ALP活性，鈣鹽沉積及OPN的表達(dá)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，將JAGGED1或DLL1和BMP9共感染IMEFS細(xì)胞，對裸鼠進(jìn)行皮下注射，4周后觀察并獲取皮下包塊，MICROCT掃描和影像重建，石蠟包埋，切片，進(jìn)行組織化學(xué)染色（HE染色，ALCIANBLUE染色和MASSONSTRICHROME染色），結(jié)果顯示，DLL1能增加BMP9誘導(dǎo)的IMEFS成骨分化活躍程度，與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，而JAGGED1則能增加軟骨形成，降低骨成熟度?？傊?，DLL1過表達(dá)能夠增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化，而JAGGED1則降低骨成熟度。進(jìn)一步，想最終確認(rèn)NOTCH信號通路與BMP9的密切聯(lián)系，引入使用兩個特殊的小鼠成纖維干細(xì)胞株DKOPS1PS1（Γ分泌酶關(guān)鍵成分）及PS2雙敲除后，外源性植入PS1進(jìn)行補(bǔ)救，相當(dāng)于正常細(xì)胞株DKOEVPS1及PS2雙敲除后，外源性植入空載體，做對照，想檢測當(dāng)PS1敲除后，NOTCH信號傳導(dǎo)受阻礙對BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響。首先，采用WESTERNBLOT檢測PS1及NACASTIN的表達(dá)情況，證實(shí)PS1確實(shí)補(bǔ)救成功。緊接著，通過體外實(shí)驗(yàn)檢測，BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的早期指標(biāo)ALP的活性及晚期指標(biāo)OPN和OCN的表達(dá)情況及晚期指標(biāo)鈣鹽沉積情況，結(jié)果顯示PS1敲除相比PS1補(bǔ)救的IMEFS，BMP9誘導(dǎo)成骨分化的作用明顯降低。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PS1敲除后BMP9誘導(dǎo)的骨形成包塊體積明顯減小，骨小梁數(shù)量及形成質(zhì)量明顯降低，骨包塊的成熟程度及骨形成過程的活躍度度亦明顯降低?？傊瞬糠纸Y(jié)果表明PS1作為NOTCH關(guān)鍵酶Γ分泌酶的關(guān)鍵成分在BMP9誘導(dǎo)的IMEFS成骨分化中發(fā)揮著關(guān)鍵而不可缺的作用，進(jìn)一步說明NOTCH信號通路在BMP9誘導(dǎo)成骨分化中的關(guān)鍵作用。通過第一部分的結(jié)果，初步了解到1抑制Γ分泌酶的活性能降低BMP9誘導(dǎo)的IMEFS在體內(nèi)及體外的成骨作用2DNNOTCH1競爭與配體結(jié)合從而抑制NOTCH1活性亦能在體內(nèi)及體外降低BMP9誘導(dǎo)IMEFS的成骨作用3過表達(dá)配體DLL1能增加體內(nèi)及體外BMP9誘導(dǎo)的成骨作用，JAGGED1能增加體外BMP9誘導(dǎo)成骨作用，而在體內(nèi)增加軟骨形成，降低骨成熟度4敲除Γ分泌酶關(guān)鍵成分PS1干擾NOTCH信號傳導(dǎo)能明顯降低BMP9誘導(dǎo)的IMEFS在體內(nèi)及體外的成骨作用?？傊?，可以認(rèn)識到NOTCH信號通路在BMP9誘導(dǎo)的成骨分化中發(fā)揮著重要不可缺的作用，NOTCH信號通路是BMP9發(fā)揮作用的重要的下游靶通路。因此，在第二部分將初步探討B(tài)MP9調(diào)控NOTCH信號通路的機(jī)制1DNNOTCH1競爭與配體結(jié)合抑制NOTCH1活性，JAGGED1或DLL1過表達(dá)，敲除Γ分泌酶關(guān)鍵成分PS1，對BMP9誘導(dǎo)IMEFS成骨分化早期細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響2BMP9促進(jìn)IMEFS成骨分化過程N(yùn)OTCH胞內(nèi)段NICD及NOTCH1在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)情況3IMEFS細(xì)胞中BMP9誘導(dǎo)IMEFS成骨分化過程中NOTCH家族受體及配體基因表達(dá)情況及PS1敲除后BMP9作用下RUNX2、OPN、OCN、HEY1、ID1和CTGF表達(dá)變化。首先，流式細(xì)胞術(shù)檢測，作用24H后，DNNOTCH1能明顯降低BMP9促進(jìn)IMEFS增殖的作用，即G2期及G2S期明顯降低JAGGED1或DLL1則能明顯增加BMP9的作用，即G2期及G2S期明顯增高DKOPS1相比DKOEV的G2期及S期G2期同樣明顯升高。這部分表明，BMP9在誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化早期具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用而NOTCH信號通路在BMP9促進(jìn)細(xì)胞增殖中發(fā)揮著必不可少的作用。其次，免疫細(xì)胞熒光化學(xué)檢測，作用24H后，BMP9能明顯增加IMEFS細(xì)胞中NOTCH胞內(nèi)段NICD的表達(dá)，并且主要定位于細(xì)胞核內(nèi)，同樣BMP9也能增加細(xì)胞中NOTCH1的表達(dá)。然后，通過RTPCR檢測BMP9作用下，NOTCH受體和配體MRNA在IMEFS細(xì)胞中的表達(dá)情況，從結(jié)果看，不同的NOTCH成員呈現(xiàn)不同的表達(dá)趨勢。從第13天，不同的NOTCH成員表達(dá)變化完全不同。在第1天BMP9明顯促進(jìn)NOTCH1、NOTCH2及DLL4的表達(dá)，而對JAGGED2及DLL1有輕度抑制表達(dá)作用，BMP9促進(jìn)表達(dá)的NOTCH成員多于抑制表達(dá)的成員。接著，將PS1敲除后，BMP9作用下，第3天及第5天RUNX2、OCN、OPN和ID1明顯降低，ID1在PS1補(bǔ)救后第5天比第3天表達(dá)降低第2天，BMP9作用下DKOPS1的HEY1及CTGF都明顯高于DKOEV。通過第二部分結(jié)果，得知1BMP9在誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞早期能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖，在抑制NOTCH1活性及敲除PS1后，BMP9促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用也隨之下降，JAGGED1及DLL1則能增加這種促進(jìn)作用。這可能與NOTCH參與了BMP9早期促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的作用相關(guān)。2BMP9能夠增加NOTCH胞內(nèi)段NICD的表達(dá)，并且促進(jìn)其轉(zhuǎn)移到核內(nèi)，同時也能增加NOTCH1的表達(dá)，可能由于BMP9促進(jìn)NOTCH1等NOTCH成員的表達(dá)，從而激活信號傳導(dǎo)，NICD表達(dá)增多并解離，繼而進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)促進(jìn)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。3BMP9作用下，NOTCH家族成員表達(dá)均發(fā)生不同變化，第1天BMP9促進(jìn)表達(dá)的NOTCH成員多于抑制表達(dá)的成員，尤其NOTCH1表達(dá)明顯增高。PS1缺失情況下，RU似2、OPN、OCN、HEY1、ID1和CTGF表達(dá)均降低，說明BMP9可以調(diào)控NOTCH表達(dá)發(fā)生變化，而BMP9調(diào)控靶基因作用又需要有NOTCH參與。綜上所述，抑制NOTCH信號通路能抑制BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中抑制NOTCH1活性能抑制BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)于細(xì)胞增殖和成骨分化中DLL1增加BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和成骨分化，JAGGED1能增加BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和體外成骨分化BMP9作用下，NOTCH受體和配體均發(fā)生不同的表達(dá)變化，可能是BMP9通過早期作用于NOTCH1或其它成員導(dǎo)致其表達(dá)發(fā)生變化，從而激活NOTCH如NOTCH1DLL1信號傳導(dǎo)通路，而增加NOTCH1胞內(nèi)段NICD的表達(dá)，促進(jìn)下游靶基因韻轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而參與對細(xì)胞增殖的調(diào)控，進(jìn)而促進(jìn)成骨分化。

簡介：點(diǎn)擊查看更多導(dǎo)師運(yùn)用掛線療法治療恥骨直腸肌綜合征的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié).pdf精彩內(nèi)容。

簡介：背景戰(zhàn)傷，車禍，包括地震，泥石流等自然災(zāi)害造成的嚴(yán)重創(chuàng)傷以及骨髓炎，骨腫瘤等大手術(shù)都可以造成大面積的骨缺損。如今對于這種大面積的骨缺損臨床上通常選擇植入生物材料用以填補(bǔ)缺損并促進(jìn)新骨生成否則難以保證積極的治療效果。但是修補(bǔ)材料的選擇至今沒有令人滿意的答案。通常的缺損修補(bǔ)材料按其來源基本可分為三種自體骨，異體骨，人工骨。自體骨移植一直以來都作為骨移植的金標(biāo)準(zhǔn)，但其來源的受限較多，難以廣泛用于臨床。而如今生物材料技術(shù)的突飛猛進(jìn)，使得臨床醫(yī)生和醫(yī)學(xué)科技工作者越來越多的把目光投向人工骨。目的研究生物玻璃顆粒植入缺損早期的成骨表現(xiàn)和降解情況。并對照研究二氧化鈰復(fù)合生物玻璃顆粒在植入缺損早期的成骨表現(xiàn)與單純生物玻璃顆粒相比有無差異。同時評價(jià)其炎癥反應(yīng)情況，觀察二氧化鈰復(fù)合生物玻璃顆粒是否具有抗炎能力。探討二氧化鈰是否可作為一種新材料用于組織工程領(lǐng)域并檢驗(yàn)新的復(fù)合式材料能否綜合兩種材料的優(yōu)點(diǎn)。材料1單純生物玻璃顆粒2二氧化鈰復(fù)合生物玻璃顆粒。方法選擇6只體重在2530KG的成熟新西蘭大白兔。分為2周和4周2個組，每組3只兔子，在每只兔子左右股骨髁部制造06CM的圓柱形貫通型損傷模型，分別隨機(jī)植入二氧化鈰復(fù)合生物玻璃顆粒和單純型生物玻璃顆粒，每只兔子均被植入二氧化鈰復(fù)合生物玻璃顆粒和單純生物玻璃顆粒各一種。術(shù)后觀察實(shí)驗(yàn)動物的生命體征和健康狀態(tài)，并觀察局部傷口愈合狀態(tài)，大體判斷炎癥反應(yīng)程度。分別在術(shù)后2周和4周按分組情況處死實(shí)驗(yàn)動物，取出標(biāo)本。10％中性福爾馬林固定，脫水，硬組織包埋，切片，做VG染色，光鏡觀察材料植入部位的成骨情況和降解情況。圖像分析計(jì)算新生骨面積，缺損面積，剩余材料面積等相關(guān)數(shù)據(jù)。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果術(shù)后全部6只動物均正常存活至取材時間，其間生命體征和健康狀態(tài)均處于正常范圍以內(nèi)。大體觀察傷口愈合良好，未見嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。光鏡下觀察，2周時兩種材料所種植缺損內(nèi)均有新生骨生成，但兩種材料新生骨生成率之間相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P061，P005）。4周時兩種材料的新生骨量明顯增多（單純生物玻璃顆粒組P0024，二氧化鈰復(fù)合生物玻璃顆粒組P0005，兩者P值均小于005）。4周時，兩種材料的新生骨生成率之間相比，其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P062，P005）。2周和4周時材料均未見明顯降解，兩個時間段材料殘余量對比以及兩種材料之間的材料殘余量對比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P005）。結(jié)論生物玻璃顆粒在術(shù)后2周即能促進(jìn)新骨生成，新生骨主要生成于缺損周邊骨與材料交界位置，其后逐漸向缺損中心蔓延生長，4周時可在材料中心部位觀察到新生骨。二氧化鈰復(fù)合生物玻璃未引起炎癥反應(yīng)，其成骨能力對比單純生物玻璃顆粒無差異，有良好的生物相容性，可以作為一種組織工程新材料對其作進(jìn)一步的研究。

簡介：目的通過巨刺結(jié)合功能鍛煉治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的臨床研究，觀察巨刺法結(jié)合功能鍛煉治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的療效并探討其作用機(jī)制。方法臨床研究采用隨機(jī)對照的方法，將60例膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎均為單側(cè)的病人分為治療組巨刺結(jié)合功能鍛煉組、對照組功能鍛煉組各30例。治療三個療程后，觀察兩組膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的癥狀療效積分及改善率的變化，并比較治療前后股四頭肌的肌電圖波幅AMPLITUDE，AMP的變化。結(jié)果1、兩組的LEQUESNEMG膝骨關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度計(jì)分治療前后自身比較均有顯著差異P005。3、兩組療效比較治療組有效率933％，對照組有效率80％，兩組療效具有顯著性差異P005。結(jié)論1、巨刺結(jié)合功能鍛煉組及單純功能鍛煉組均能使膝關(guān)節(jié)OA癥狀的積分下降、改善率值增加，說明巨刺和功能鍛煉均是治療膝關(guān)節(jié)OA的有效方法，但相比之下，巨刺結(jié)合功能鍛煉組療效更優(yōu)。2、巨刺結(jié)合功能鍛煉明顯提高了膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎患者股四頭肌中的股直肌、股內(nèi)側(cè)肌的AMP值，對股外側(cè)肌影響不大，總體說明巨刺結(jié)合功能鍛煉對股四頭肌的肌力有改善作用。3、巨刺結(jié)合功能鍛煉組對膝關(guān)節(jié)炎OA的臨床療效優(yōu)于單純功能鍛煉組，但其確切作用途徑與機(jī)理函待從多方面進(jìn)一步地深入研究。

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。肛∥1，。。J研究生簽名敗W導(dǎo)師簽章身笏儼≥級學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章。。?！?一矽廠妒年鄉(xiāng)月日河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名玻耖導(dǎo)師簽章彩滲少，夠年；其疆B中文摘要自體下頜頦部骨移植修復(fù)單側(cè)唇裂術(shù)后鼻底凹陷的臨床研究摘要目的介紹自體下頜頦部骨移植修復(fù)單側(cè)唇裂術(shù)后鼻底凹陷的方法，探討以此方法進(jìn)行唇裂術(shù)后鼻底凹陷與牙槽突裂同期修復(fù)的可行性，并進(jìn)行初步的臨床應(yīng)用，觀察臨床效果。方法通過對2005年1月至2013年12月我科收治的8例單側(cè)唇裂術(shù)后鼻底凹陷畸形患者行下頜骨頦部唇側(cè)骨板移植矯正術(shù)，并對其中5例合并有牙槽突裂的患者同期行牙槽突裂整復(fù)術(shù)，觀察記錄術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后的鼻底高度、外鼻形態(tài)、功能變化。8例患者中男性5例，女性3例，年齡為921歲，中位年齡15歲，經(jīng)完善的術(shù)前檢查，正畸治療，符合手術(shù)適應(yīng)癥，患者主觀上要求進(jìn)行手術(shù)治療，并對本手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)表示接受。術(shù)者由河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院口腔頜面外科主任醫(yī)師屆0主任醫(yī)師擔(dān)任。術(shù)前行全口曲面斷層片及CT檢查，根據(jù)需要預(yù)估需骨量，確定具體手術(shù)方案，去除正畸牽引裝置，視口腔衛(wèi)生情況行齦上潔治及齦下刮治術(shù)，常規(guī)術(shù)前備皮，禁食水。手術(shù)采用全麻，口插管，頭后仰，常規(guī)消毒鋪巾。對于不伴有牙槽突裂的患者，手術(shù)以上頜前庭溝橫行切口分離暴露至梨狀孔邊緣，對于伴有牙槽突裂的患者，則行裂隙緣切口，修整創(chuàng)緣后分別對位縫合鼻腔側(cè)、前庭側(cè)、腭側(cè)黏骨膜瓣形成完整的錐形植骨床，并測量患側(cè)梨狀孔下緣骨缺損寬度作為取骨參考。于下頜前庭溝作橫行切口分離暴露頦部骨質(zhì)，在兩側(cè)下尖牙之間鉆孔并切取大小為20CM051CM，厚度約O3O5CM的長方體骨塊，確定取骨范圍時應(yīng)結(jié)合骨塊與兩側(cè)下尖牙、下前牙根尖及下頜骨下緣距離綜合決定，以避免損傷鄰牙牙根或?qū)е孪骂M下緣骨質(zhì)過于薄弱引起的病理性骨折。頦部骨塊取出后，可見部分髓腔側(cè)松質(zhì)骨附于皮質(zhì)骨板，但其表面粗糙不整，小梁狀結(jié)構(gòu)明顯，不利于就位穩(wěn)定，予以修整。將修整后的植骨塊移植于梨狀孔下緣植骨區(qū)，橫跨于骨質(zhì)缺損區(qū)之上，并以牙科刮匙配合薄骨鑿刮取部分骨板髓腔側(cè)松質(zhì)骨，充填于牙槽突裂植骨床，利用皮質(zhì)骨天然曲度及厚度恢復(fù)鼻底高度及梨狀孔下緣的連續(xù)性。如缺隙較大，則可聯(lián)合應(yīng)用少量人工骨粉充填。在骨塊兩側(cè)末端與上頜骨質(zhì)重疊處鉆孔，單層皮質(zhì)骨鈦釘固定，過程中避免傷及兩

簡介：中圖法分類號R78212學(xué)校代碼10661學(xué)號2012493密級公開碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文（專業(yè)型學(xué)位）上頜前牙區(qū)即刻種植后唇側(cè)骨板變化上頜前牙區(qū)即刻種植后唇側(cè)骨板變化的臨床臨床研究研究ACLINICALSTUDYOFLABIALBONEPLATEREMODELINGINTHEANTERIMAXILLAAFTERIMMEDIATEIMPLANTATION姓名名張彩美張彩美專業(yè)業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)口腔臨床醫(yī)學(xué)研究方向研究方向口腔種植學(xué)口腔種植學(xué)導(dǎo)師師徐世同教授徐世同教授培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位遵義醫(yī)學(xué)院遵義醫(yī)學(xué)院2015年5月遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文中英文縮略詞表中英文縮略詞表縮略詞縮略詞英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱CBCTCONEBEAMCOMPUTEDTOMOGRAPHY錐形束CTGBRGUIDEDBONETISSUEREGENERATION引導(dǎo)骨組織再生術(shù)MSCTMULTISLICECT多層螺旋CT

簡介：點(diǎn)擊查看更多人工骨材料在TLIF中的應(yīng)用研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：隨著新型醫(yī)用鈦合金植入材料不斷應(yīng)用于臨床，解決了以往許多難以解決的問題，特別在骨科領(lǐng)域中，作為骨內(nèi)植入體和硬組織修復(fù)材料的醫(yī)用鈦合金植入材料得到了廣泛的臨床應(yīng)用。但是對于生物有機(jī)體而言，醫(yī)用金屬植入材料畢竟還是異物，其在物理和化學(xué)性能方面與體內(nèi)環(huán)境還存在著巨大的區(qū)別。在現(xiàn)實(shí)的骨科臨床應(yīng)用中，這種金屬材料自身性質(zhì)的差異往往會帶來很嚴(yán)重的問題。為了解決這些問題，人們開始著手研究如何提高醫(yī)用鈦合金植入材料的生物相容性，使植入體能夠與周圍的骨組織形成穩(wěn)定的生物結(jié)合，保證植入體的近、遠(yuǎn)期效果。對于骨科而言，我們所關(guān)心的植入金屬材料生物相容性主要包括材料與宿主之間的生物力學(xué)、物理化學(xué)方面的相互作用。表現(xiàn)為材料與宿主直接或間接接觸時涉及組織接受與定向結(jié)合、應(yīng)力傳遞與分布、材料表面生物學(xué)行為等等一系列生物學(xué)行為。對于骨科而言，我們最關(guān)心材料的力學(xué)特性和表面特性。因此，本研究擬從改善鈦合金植入材料力學(xué)特性以及表面特性兩方面入手，提高材料的生物相容性，并通過動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的方法檢測其對于成骨的影響，以驗(yàn)證其生物相容性改善的情況。對于材料力學(xué)特性的改善，我們選用新近研制具有國家自主知識產(chǎn)權(quán)的新型超低彈性模量鈦合金TI24NB4ZR79SN，其彈性模量僅為33GPA1。因?yàn)楦鶕?jù)以往的相關(guān)研究結(jié)果，彈性模量是決定金屬植入材料骨組織內(nèi)應(yīng)力是否集中的重要參數(shù)，理論上，彈性模量越低、越接近骨，引起應(yīng)力吸收的幾率就越小，不良并發(fā)癥發(fā)生的機(jī)率也就越小。在材料表面改性方面，我們選用50ΜM溝槽的規(guī)則微形態(tài)表面。在本課題組前期進(jìn)行的動物體外實(shí)驗(yàn)中，我們對照觀察了多種微形態(tài)表面上成骨細(xì)胞的生長情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，50ΜM溝槽的規(guī)則微形態(tài)表面的細(xì)胞在生長、分化等方面均具有優(yōu)勢，所以同時作為前期體外實(shí)驗(yàn)的體內(nèi)驗(yàn)證性研究，我們在表面處理上選擇50ΜM規(guī)則微形態(tài)。1低彈性模量鈦合金髓內(nèi)針對兔脛骨骨折愈合及脛骨髓腔內(nèi)成骨的影響目的為了檢驗(yàn)低彈性模量金屬植入材料對于成骨的影響，我們選擇TI24NB4ZR79SN作為實(shí)驗(yàn)對象，選擇目前臨床最常用的鈦合金TI6AL4V作為對照，在兔脛骨骨折髓內(nèi)針內(nèi)固定模型中，檢驗(yàn)這兩種合金材料對于髓內(nèi)針周圍成骨及骨折愈合的影響。方法實(shí)驗(yàn)選用新西蘭大白兔15只，將TI24NB4ZR79SNWT％和TI6AL4VWT％兩種鈦合金材料采用鑄造和機(jī)械加工的方法制成直徑為2MM、長度為85MM的圓棒，作為實(shí)驗(yàn)用的髓內(nèi)針。脛骨做橫行截骨后打入髓內(nèi)針至脛骨骨髓腔以固定骨折，15只動物手術(shù)后均觀察4周。術(shù)后當(dāng)日及術(shù)后各周拍脛骨正側(cè)位片，以確定內(nèi)固定位置。手術(shù)后4周時，處死15只動物，隨機(jī)選擇5只做生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)，5只拔除髓內(nèi)針后做MICROCT實(shí)驗(yàn)，5只帶髓內(nèi)針做病理學(xué)組織學(xué)觀察。其中生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測髓內(nèi)針拔出力與骨折處骨痂的最大牽拉力，單位均為牛頓（N）；MICROCT實(shí)驗(yàn)測量脛骨遠(yuǎn)端髓內(nèi)針周圍的骨密度和骨痂體積比；組織病理切片使用MMA硬組織包埋，硬組織切片，HE染色和三色染色，并進(jìn)行計(jì)算機(jī)輔助的圖像分析計(jì)算骨痂面積比。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS120進(jìn)行雙尾配對T檢驗(yàn)，P值取005。結(jié)果X線片示各只動物的骨折對位、內(nèi)固定位置均良好，骨折線隨時間變得逐漸模糊，骨痂量隨時間增加，基本在第三周就已經(jīng)有較明顯骨痂覆蓋骨折端。生物力學(xué)所得髓內(nèi)針拔出力試驗(yàn)組與對照組分別為1278±100N和1109±79N，具有明顯差異（P0009），而兩組間骨痂最大牽拉力無明顯差別（P076）。從MICROCT所得二維和三維圖像可觀察到明顯的髓腔內(nèi)成骨，BMD與BVF兩組間均有明顯差異。病理學(xué)圖像分析所得的骨痂體積比有明顯差異（P000019）。結(jié)論根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果，可以證實(shí)低彈性模量髓內(nèi)針內(nèi)固定的TI24NB4ZR79SN實(shí)驗(yàn)組與TI6AL4V對照組相比，在手術(shù)后的第四周，實(shí)驗(yàn)組脛骨髓腔內(nèi)有較多的新骨形成，但是對于脛骨骨折愈合的影響并無差異?？傊ㄟ^本實(shí)驗(yàn)可以證實(shí)，低彈性模量金屬植入材料對于周圍成骨具有明顯的促進(jìn)作用。2表面規(guī)則微形態(tài)低彈性模量鈦合金植入物對于兔脛骨內(nèi)成骨的影響目的結(jié)合前一實(shí)驗(yàn)與本課題組前期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們計(jì)劃進(jìn)一步對比并驗(yàn)證不同表面以及處于不同生物應(yīng)力條件下對于體內(nèi)成骨的影響。將分別帶有50ΜM規(guī)則微形態(tài)表面和光滑表面的TI24NB4ZR79SN與TI6AL4V鈦合金內(nèi)植物植入兔脛骨中，觀察手術(shù)后4周時表面新骨生成的情況。方法實(shí)驗(yàn)選用新西蘭大白兔5只，將TI24NB4ZR79SNWT％和TI6AL4VWT％兩種鈦合金材料采用鑄造和機(jī)械加工的方法制成制備成長05CM，厚10MM的正方形基片，在分別加工出50ΜM規(guī)則微形態(tài)表面和光滑表面，作為實(shí)驗(yàn)用的植入物，植入于脛骨中段。其中左側(cè)兩個開槽均放入TI24NB4ZR79SN植入物，右側(cè)兩個開槽均放入TI6AL4V植入物；雙側(cè)脛骨上方的兩個開槽均放入光滑表面植入物，下方的兩個開槽均放入規(guī)則微紋理表面植入物。術(shù)后當(dāng)日及術(shù)后各周拍脛骨正側(cè)位片，以確定內(nèi)固定位置。手術(shù)后4周時，處死的動物，取出脛骨標(biāo)本分別使用MICROCT檢測BMD與BVF；再進(jìn)行組織病理學(xué)分析，MMA硬組織包埋，硬組織切片，而后進(jìn)行顯微X線片觀察、白色背景光視野觀察、偏振光視野觀察以及甲苯胺蘭染色后觀察，并進(jìn)行計(jì)算機(jī)輔助的圖像分析計(jì)算骨痂面積比。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS120進(jìn)行雙尾配對T檢驗(yàn)，P值取005。結(jié)果從MICROCT所得圖像可觀察到明顯的表面成骨灰度影像，所測得的BMD與BVF進(jìn)行統(tǒng)計(jì)后發(fā)現(xiàn)在材料相同時，規(guī)則微紋理表面成骨較好，而表面相同時，低彈性模量鈦合金周圍成骨情況良好，TI6AL4V植入物周圍發(fā)生骨質(zhì)吸收現(xiàn)象。分別通過顯微X線片觀察、白色背景光視野觀察、偏振光視野觀察以及甲苯胺蘭染色后觀察，一方面可以證實(shí)MICROCT所得表面灰度影像確實(shí)為骨組織影像，另一方面也再次驗(yàn)證了MICROCT截面圖中所得到的結(jié)果。甲苯胺蘭染色后，經(jīng)過圖像分析所得的骨痂體積比（BVF）與MICROCT檢測所的結(jié)果接近。結(jié)論根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果，可以證實(shí)在材料相同的前提下，50ΜM的規(guī)則微紋理與光滑表面相比，具有良好的成骨誘導(dǎo)作用；而表面條件相同時，具有低彈性模量的TI24NB4ZR79SN鈦合金植入物對于成骨的影響優(yōu)于目前臨床廣泛使用的TI6AL4V鈦合金?？傊?，通過本實(shí)驗(yàn)可以證實(shí)，低彈性模量金屬植入材料所帶來的低生物應(yīng)力條件與50ΜM的規(guī)則微溝槽帶來的微紋理表面環(huán)境對于成骨均具有良好的促進(jìn)作用。

簡介：點(diǎn)擊查看更多金烏骨通片的研制及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：心肌肥厚、心衰是高血壓、缺血性心肌病等多種心血管疾病的常見合并癥，心肌肥厚、心衰常常伴發(fā)心律失常，特別是心衰時嚴(yán)重的室性心律失常致心源性猝死SUDDENCARDIACDEATH，SCD的發(fā)生率大大提高，成為心血管病死亡的主要原因。有資料顯示我國SCD高達(dá)544萬例年，居各國之首。故揭示心肌肥厚、心衰病理過程中心律失常產(chǎn)生的機(jī)制，尋找有效的預(yù)測措施，是當(dāng)前研究的重要課題。在心肌肥厚、心衰發(fā)展中，伴隨著心肌組織學(xué)肥厚性重構(gòu)，心肌細(xì)胞電生理特征的一個重要改變是動作電位時程ACTIONPOTENTIALDURATION，APD延長，一般認(rèn)為APD延長可因?yàn)樵绾蟪龢OEAD、遲后除極DAD產(chǎn)生觸發(fā)活動和或復(fù)極化的不同步產(chǎn)生興奮折返而導(dǎo)致心律失常。我們小組前期的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小鼠左心室乳頭肌細(xì)胞動作電位時程APD90僅在心衰期明顯延長而心肌肥厚期沒有顯著性延長（見王玉紅碩士論文）。APD延長在體表心電圖上表現(xiàn)為QT間期的延長。據(jù)此推論，反映在整體心電圖上的表現(xiàn)，QT間期在肥厚期和心衰期的表現(xiàn)也應(yīng)不盡相同。但是多種動物和人的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，心肌肥厚和心衰時體表心電圖的QT間期明顯延長。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)僅觀測一個時間點(diǎn)，即肥厚（沒有收縮功能減退）或心衰時電生理的變化，已知心肌肥厚、心衰是個動態(tài)發(fā)展的過程，電生理改變可能有隨時間而變化的特征，我們推測在不同的肥厚模型，甚至同一模型的不同階段，電生理特性的變化可能并不完全相同。本實(shí)驗(yàn)利用小鼠壓力超負(fù)荷性心肌肥厚、心衰模型，連續(xù)動態(tài)地監(jiān)測小鼠從病理過程進(jìn)行性發(fā)展的早期至心衰的晚期不同階段的體表心電圖，以及利用傳統(tǒng)的玻璃微電極技術(shù)，記錄小鼠左心室乳頭肌動作電位早后除極EAD、遲后除極DAD以及觸發(fā)活動情況，以期從心電圖上找到一些可以預(yù)測心肌肥厚電生理變化進(jìn)展的指標(biāo)，并為肥厚、心衰階段小鼠心律失常機(jī)制提供初步的理論依據(jù)。第一部分、心肌肥厚、心衰小鼠體表心電圖的動態(tài)變化目的利用小鼠壓力超負(fù)荷性心肌肥厚、心衰模型，連續(xù)動態(tài)地監(jiān)測小鼠從病理過程進(jìn)行性發(fā)展的早期至心衰的晚期不同階段的體表心電圖，以期從心電圖上找到一些可以預(yù)測心肌肥厚、心衰電生理變化進(jìn)展的指標(biāo)，對臨床預(yù)測患者的預(yù)后將有很好地提示作用。方法1動物模型的制備橫主動脈弓部分狹窄建立壓力超負(fù)荷性小鼠心肌肥厚、心衰模型，術(shù)后2～7周為肥厚期，術(shù)后9～13周為心衰期。2麻醉小鼠體表心電圖測定術(shù)后2周2W、5周5W、9周9W和13周13W的動物進(jìn)行心電圖的監(jiān)測，同時期的SHAM組小鼠作為對照。腹腔注射三溴乙醇（250MGKG）麻醉小鼠后，BIOPACMP150多導(dǎo)生理記錄儀的記錄電極插入小鼠四肢的皮下，記錄標(biāo)Ⅱ?qū)?lián)體表心電圖。結(jié)果1假手術(shù)組和術(shù)后2W的動物未見自發(fā)性心律失常，而術(shù)后5W、9W和13W小鼠出現(xiàn)自發(fā)性心律失常，主要表現(xiàn)為頻發(fā)的室性早搏以及陣發(fā)性室性心動過速，心律失常發(fā)生率分別為15％、28％和63％。2與同時期的假手術(shù)動物相比，術(shù)后2W、5W、9W和13W組動物QT間期以及QTC間期明顯延長，分別延長了204％、327％、497％、610％和271％、321％、439％、591％P＜001。3心肌肥厚心衰小鼠心電圖的另一個重要改變就是J波的變化。所有時期的假手術(shù)組動物心電圖的J波均是正向的，而手術(shù)組動物從2W開始J波就表現(xiàn)為正向值下降，5W開始逐漸低平，到13W時完全翻轉(zhuǎn)。4與同時期的SHAM組動物相比，各B組的PR間期沒有改變，除了術(shù)后2W組動物的RR間期輕微縮短外，其余各組的RR間期比較沒有顯著性差異。結(jié)論心肌肥厚、心衰小鼠自發(fā)性心律失常發(fā)生率逐漸增加，QT間期進(jìn)行性延長，J波幅值逐漸降低，說明隨著疾病的進(jìn)展，心室復(fù)極化異常逐漸加重。第二部分、心肌肥厚、心衰小鼠左心室乳頭肌后除極觸發(fā)活動的動態(tài)變化目的采用傳統(tǒng)的玻璃微電極技術(shù)，記錄心肌肥厚、心衰小鼠左心室乳頭肌動作電位早后除極EAD、遲后除極（DAD）和觸發(fā)活動情況，以及灌流低鉀或者異丙腎上腺素溶液后，所誘發(fā)后除極觸發(fā)活動的情況，探討肥厚、心衰階段小鼠心律失?？赡艿漠a(chǎn)生機(jī)制。方法1動物模型的制備同第一部分。2玻璃微電極技術(shù)記錄乳頭肌動作電位和后除極觸發(fā)活動情況腹腔注射100MGKG戊巴比妥鈉，取出心臟，打開左心室，分離乳頭肌。將乳頭肌用不銹剛針固定在玻璃浴槽中的硅膠上。雙極起搏電極以場刺激驅(qū)動標(biāo)本，由刺激器提供方波信號，波寬1MS，頻率1HZ，電壓強(qiáng)度為閾刺激的15倍。用微電極推進(jìn)器將尖端電阻10～30MΩ的玻璃電極（內(nèi)充3MOLLKCL）緩慢推進(jìn)乳頭肌細(xì)胞內(nèi)，記錄細(xì)胞內(nèi)動作電位AP及自發(fā)的后除極包括EAD和DAD和觸發(fā)活動。選用狀態(tài)良好的乳頭肌細(xì)胞，分別灌流低鉀1MMKCL溶液或者含有異丙腎上腺素20NM溶液，分別記錄誘發(fā)的EAD，DAD以及觸發(fā)活動情況，與同期的正常KH灌流液SHAM組進(jìn)行比較。結(jié)果1與同時期的SHAM組相比，B2WK組和B5WK組小鼠的乳頭肌動作電位APD90保持不變，而在B9WK組和B13WK組中則明顯延長。2在記錄的30分鐘時間內(nèi)，B9WK組和B13WK組動物可見明顯的EAD和DAD，而在SHAM組以及B2WK組和B5WK組未見EAD和DAD的出現(xiàn)。3無論是SHAM組還是B組，當(dāng)灌注高鉀溶液或是異丙腎上腺素后均可出現(xiàn)EAD和DAD。EAD和DAD的發(fā)生率B組明顯高于同時期的SHAM組，并且隨著術(shù)后時間的進(jìn)展而進(jìn)行性增加。結(jié)論隨著心肌肥厚、心衰的病理進(jìn)展，心肌細(xì)胞EAD，DAD以及觸發(fā)活動逐漸增多，心肌細(xì)胞的電不穩(wěn)定性逐漸增加。

簡介：點(diǎn)擊查看更多中國人群骨幾何學(xué)的基于生物學(xué)通路的全基因組關(guān)聯(lián)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多可注射型海藻酸鈉--明膠--檸檬酸鈣對骨--腱愈合實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第一部分人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定目的體外分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（HMSCS）并進(jìn)行鑒定，為組織工程提供適宜的種子細(xì)胞。方法抽取健康成人骨髓，采用人淋巴細(xì)胞分離液分離純化獲取HMSCS，觀察細(xì)胞形態(tài)特征、生長狀況，從表面抗原表達(dá)及成骨分化能力兩個方面進(jìn)行鑒定。結(jié)果分離細(xì)胞貼壁生長，呈集落樣增殖，放射狀、渦漩狀分布排列。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測細(xì)胞表達(dá)CD44和CD71，CD34、CD45呈陰性表達(dá)，細(xì)胞表面標(biāo)志表達(dá)與間充質(zhì)干細(xì)胞的特征一致。分離的細(xì)胞經(jīng)過成骨條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化后2周，細(xì)胞堿性磷酸酶染色陽性，4周后可以形成鈣結(jié)節(jié)，證明所培養(yǎng)細(xì)胞有向成骨細(xì)胞分化的潛能。表明分離細(xì)胞為間充質(zhì)干細(xì)胞。結(jié)論采用人淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞，能獲得較為純化的HMSCS，可為培養(yǎng)HMSCS提供穩(wěn)定的分離方法。第二部分低氧環(huán)境對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。目的建立人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（HUMANMESENCHYMALSTEMCELLS，HMSCS）體外低氧培養(yǎng)及向成骨細(xì)胞分化的生物模型，研究其生物學(xué)特征，為骨組織工程提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用人淋巴細(xì)胞分離液分離健康成人骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞。取第3代細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)氧濃度及培養(yǎng)基類型分為4組正常氧組（20％O2加DMEMLG）、低氧組（1％O2加DMEMLG）、正常氧成骨誘導(dǎo)組（20％O2加條件培養(yǎng)基）及低氧成骨誘導(dǎo)組（1％O2加條件培養(yǎng)基），通過細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞增殖測定（MTT法）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）檢測、凋亡蛋白及集落形成檢測，觀察低氧對HMSCS增殖凋亡的影響；RTPCR檢測、ALP活性檢測及茜素紅染色，研究低氧環(huán)境對HMSCS成骨分化的影響；檢測FIBRONECTIN、LAMININ和COLLAGENⅠ蛋白表達(dá)，觀察低氧對HMSCS細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響。結(jié)果與正常氧組相比，低氧組中的HMSCS有較高的增殖速度，生長差異顯著P005；低氧組中PCNA染色細(xì)胞增多，高于正常氧組（P005）；低氧組中凋亡細(xì)胞減少，抗凋亡蛋白BCL2表達(dá)增多（P005）；低氧組中的HMSCS生成的集落逐漸增多，明顯高于正常氧組。低氧成骨誘導(dǎo)組培養(yǎng)的HMSC堿性磷酸酶活性逐漸增高，但明顯低于正常氧成骨誘導(dǎo)組，兩者有明顯的差異（P001）；定量RTPCR檢測，正常氧成骨誘導(dǎo)組ALP、OC、COL1A2及BSPMRNA表達(dá)量明顯增加，ALP、OC、COL1A2及BSPMRNA明顯增高（P＜001；培養(yǎng)4周后，與其它三組相比，正常氧成骨誘導(dǎo)組可見到明顯的鈣鹽沉積和染成紅色的鈣結(jié)節(jié)。免疫組織化學(xué)和WESTERNBLOT檢測，低氧組中FN和LA分泌增多（P005），COLLAGENⅠ蛋白表達(dá)無顯著差異（P005）。結(jié)論低氧使HMSCS增殖率增加，集落形成能力增強(qiáng)，抑制成骨細(xì)胞分化，保持干細(xì)胞特征，促進(jìn)HMSCS分泌細(xì)胞外基質(zhì)。第三部分慢性低氧影響HIF1Α、SDF1及VEGF165在HMSCS中的表達(dá)。目的建立體外HMSCS低氧模型，觀察慢性低氧對HMSCS表達(dá)HIF1?。ǖ脱跽T導(dǎo)因子－1?。DF1（基質(zhì)細(xì)胞衍生因子－1）及VEGF165（血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子）的影響，為HMSCS治療缺氧性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。通過比較HIF1Α、SDF1及VEGF165，探討低氧抑制HMSCS成骨分化的機(jī)制。方法采用人淋巴細(xì)胞分離液分離健康成人骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞。取第3代細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)氧濃度及培養(yǎng)基類型分為4組正常氧（N組）（20％O2加DMEMLG）、低氧組（H組）（1％O2加DMEMLG）、正常氧成骨誘導(dǎo)組（NOS組）（20％O2加條件培養(yǎng)基）及低氧成骨誘導(dǎo)組（HOS組）（1％O2加條件培養(yǎng)基），運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測HIF1Α、SDF1及VEGF蛋白表達(dá)，WESTERNBLOT檢測HIF1Α及SDF1蛋白表達(dá)，定量RTPCR檢測HIF1Α、SDF1及VEGF165MRNA表達(dá)。結(jié)果N組和NOS組HMSCS細(xì)胞質(zhì)內(nèi)HIF1Α染色陽性，H組和HOS組HMSCS胞質(zhì)及胞核內(nèi)均強(qiáng)陽性染色。低氧條件下，SDF1染色細(xì)胞數(shù)目明顯增多，VEGF染色呈陽性。HMSCS在慢性低氧的條件下，H組和HOS組HIF1Α、SDF1及VEGF165MRNA表達(dá)水平明顯增高，與N組相比，兩者有顯著差異（P＜005，而N組和NOS組，HIF1ΑMRNA表達(dá)始終處于較低的水平（P005），NOS組SDF1MRNA表達(dá)量持續(xù)增高，14天時達(dá)到峰值，隨后開始降低（P005），N組、H組、NOS組及HOS組隨著時間的延長，VEGF165MRNA表達(dá)均逐漸增多，但H組及HOS組VEGFMRNA表達(dá)始終高于N組和NOS組，NOS組14天時VEGF1165MRNA表達(dá)量快速增加達(dá)到峰值，隨后開始降低（P005）。WESTERNBLOT檢測，H組和HOS組可見HIF1Α及SDF1蛋白表達(dá)增多，明顯高于N組和NOS組（P005），NOS組7天后SDF1蛋白表達(dá)量明顯增加（P005），14天后減少。結(jié)論SDF1和VEGF在正常氧條件下有協(xié)同成骨的作用，低氧條件下HIF1雖然刺激SDF1和VEGF分泌增多，但抑制SDF1和VEGF協(xié)同成骨的作用，SDF1和VEGF分泌還存在著除HIF1調(diào)控以外的途徑。