低氧對(duì)人牙周膜干細(xì)胞骨向分化的影響.pdf

1、目的：采用組織塊法培養(yǎng)牙周膜干細(xì)胞(periodontal ligament stem cells, PDLSCs)，分別在低氧和常氧條件下培養(yǎng)HPDLSCs，檢測(cè)常氧和低氧情況下HPDLSCs的骨向分化潛能是否有差異。
　　方法：首先采用組織塊法體外分離培養(yǎng)HPDLSCs，并在鏡下觀察HPDLSCs的形態(tài)。分別在常氧和低氧條件下培養(yǎng)HPDLSCs，低氧組的細(xì)胞置于含2％O2、5%CO2和93%N2的低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，常氧組的細(xì)胞

2、置于含20%O2、5%CO2和75%N2的常氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)6h，12h，24h，48h后檢測(cè)其增殖能力以及堿性磷酸酶（ALP）活性，并通過(guò)熒光定量 PCR檢測(cè)低氧培養(yǎng)的 HPDLSCs中骨鈣素（OCN）、低氧誘導(dǎo)因子1α（Hif-1α）、堿性磷酸酶（ALP）、以及成骨相關(guān)基因核心結(jié)合因子（Runx-2）等基因的表達(dá)變化；通過(guò)Western blot法檢測(cè)低氧培養(yǎng)的HPDLSCs中Runx-2、Hif-1α等蛋白的表達(dá)變化。

3、r>　　結(jié)果：培養(yǎng)7~15 d時(shí)鏡下可見(jiàn)從組織塊周圍爬出的長(zhǎng)梭形HPDLSCs。與常氧培養(yǎng)的HPDLSCs相比，低氧組的HPDLSCs的增殖能力略高于常氧組；相比常氧組，低氧組的HPDLSCs的ALP活性高于常氧組，但低氧培養(yǎng)48 h后其ALP活性開(kāi)始下降；熒光定量PCR結(jié)果顯示，低氧組中OCN、Hif-1α、ALP和RUNX-2等成骨基因的表達(dá)明顯升高常氧組，但低氧培養(yǎng)48h后相關(guān)基因的表達(dá)下降；Western blot結(jié)果顯示，低氧