大鼠牙胚根端條件培養(yǎng)基對人牙周膜干細胞向成牙骨質(zhì)樣細胞分化的作用.pdf

1、牙骨質(zhì)是覆蓋在牙根表面的一層硬結(jié)締組織,是建立牙周膜與牙根之間附著的重要結(jié)構(gòu)。炎癥情況或異常機械刺激下會引起牙骨質(zhì)的破壞,甚至導致不可逆性牙根吸收。牙齒發(fā)育完成以后,成牙骨質(zhì)細胞來源有限。牙周膜干細胞作為一類具有自我更新和多向分化特性的早期未分化細胞,是成牙骨質(zhì)細胞來源的理想選擇。研究表明,microRNAs在干細胞的自我更新和分化中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本實驗利用大鼠牙胚根端條件培養(yǎng)基,誘導人牙周膜干細胞向成牙骨質(zhì)樣細胞分化,以期為后續(xù)

2、研究牙周膜干細胞向成牙骨質(zhì)細胞分化過程中microRNAs的調(diào)控作用提供研究基礎(chǔ)。
　　實驗目的:研究大鼠牙胚根端條件培養(yǎng)基對人牙周膜干細胞向成牙骨質(zhì)樣細胞分化的作用。
　　實驗方法:免疫磁珠法分選出STRO-1陽性的牙周膜干細胞,利用克隆形成效率實驗及免疫細胞化學染色對分選后的細胞進行鑒定。制作牙胚根端條件培養(yǎng)基誘導牙周膜干細胞分化。對誘導后的細胞進行形態(tài)學觀察、Alizerin Red Solution染色、免疫細胞化學

3、染色、ALP活性檢測以及Real-timePCR檢測。
　　實驗結(jié)果:克隆形成效率分析顯示牙周膜干細胞呈克隆式生長;免疫細胞化學結(jié)果顯示,免疫磁珠分選的陽性細胞均能表達間充質(zhì)干細胞標志物STRO-1和血管周圍細胞標志物CD146;所有細胞Vimentin蛋白表達陽性而Cytokeratin蛋白表達陰性。Alizerin Red Solution染色顯示,誘導組細胞表面出現(xiàn)大量礦化結(jié)節(jié);免疫細胞化學染色結(jié)果顯示,誘導后的細胞能夠表達