貴州省鼠類動(dòng)物鉤端螺旋體分子流行病學(xué)特征及其與人間疫情相關(guān)性研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:了解貴州省鼠類宿主動(dòng)物鉤端螺旋體(簡(jiǎn)稱鉤體)帶菌情況、菌型分布、分子流行病學(xué)特征及其與人間鉤體病疫情的相關(guān)性,為貴州省鉤體病的預(yù)防和控制提供科學(xué)依據(jù)。
  方法:1.對(duì)2010~2014年對(duì)貴州省黔東南州鉤體疫源地采用夜夾捕鼠法捕獲鼠類。無(wú)菌操作取鼠腎臟于EMJH培養(yǎng)基中培養(yǎng)分離鉤體。2.采用致病性鉤體特異的 PCR引物對(duì)分離的鉤體菌株進(jìn)行鑒定,進(jìn)一步運(yùn)用血清群 PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行血清群鑒定,并采用傳統(tǒng)的顯微鏡凝集試驗(yàn)對(duì)分群

2、結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。3.選擇7個(gè)串聯(lián)重復(fù)序列VNTR位點(diǎn),運(yùn)用MLVA方法對(duì)分離的致病性鉤端螺旋體DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物采用2%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳,凝膠成像系統(tǒng)成像拍照并計(jì)算出各 VNTR位點(diǎn)的擴(kuò)增長(zhǎng)度,分析菌株各 VNTR位點(diǎn)的重復(fù)數(shù)目,采用聚類分析法分析分離株與參考菌株間的聚類關(guān)系。4.采用7個(gè)管家基因位點(diǎn)的MLST方法對(duì)分離菌株各管家基因位點(diǎn)進(jìn)行雙向測(cè)序,7個(gè)管家基因位點(diǎn)序列與參考序列進(jìn)行比對(duì),獲得每株菌的等位基因譜并確定序列

3、ST型,將分離菌株等位基因譜與參考菌株構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,觀察菌株間親緣進(jìn)化關(guān)系。5.收集2010~2014年的貴州省病例報(bào)告數(shù)據(jù),利用描述性流行病學(xué)方法進(jìn)行分析??偨Y(jié)鉤體病人的血清學(xué)檢測(cè)、培養(yǎng)結(jié)果,并分析其與宿主動(dòng)物鉤體菌株間的相關(guān)性及貴州省鉤體病的流行情況。
  結(jié)果:1.2010~2014年貴州省鉤體監(jiān)測(cè)點(diǎn)布夾數(shù)6750夾次,共捕鼠646只鼠密度為9.57%,以黑線姬鼠最多(240只),占總數(shù)的37.15%。共培養(yǎng)出鉤端螺旋體菌

4、株56株,鼠類鉤體帶菌率為8.67%。黑線姬鼠帶菌率最高,達(dá)23.33%。2.PCR鑒定結(jié)果顯示,56株鉤體菌株均為致病性鉤端螺旋體。血清群PCR鑒定結(jié)果顯示56株菌株均為黃疸出血群菌株,顯微凝集試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與PCR方法鑒定結(jié)果一致。3. MLVA分析顯示,56株菌有VNTR4、 VNTR36、VNTR50位點(diǎn)出現(xiàn)重復(fù)數(shù)目差別,56株菌被分為6個(gè)MLVA型。聚類分析顯示,56株菌株與參考菌株黃疸出血群56601株聚類關(guān)系最近。4.MLS

5、T分型結(jié)果顯示,56株鉤體菌株的7個(gè)MLST位點(diǎn)完全一致,均為ST1型。聚類分析顯示,56株菌株與參考菌株黃疸出血群56601株聚類關(guān)系最近。5.貴州省2010~2014年報(bào)告的病例數(shù)共計(jì)73例,死亡8例,病死率10.96%。病例地區(qū)分布主要集中在黔東南州。病例以男性為主(95.89%);職業(yè)以農(nóng)民為主。9月份為貴州省鉤體病的高發(fā)季節(jié)。病人血清抗體陽(yáng)性率為38.89%,均為抗黃疸出血群鉤體抗體。病原學(xué)檢測(cè)從送檢的7份患者血液和尿液標(biāo)本中

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