植物抗菌內(nèi)生菌A11的分離鑒定及其活性物質(zhì)的初步研究.pdf

1、植物內(nèi)生菌作為生活在植物組織內(nèi)部的一大類(lèi)微生物,在其生活史的一定階段或全過(guò)程中對(duì)宿主植物不表現(xiàn)出病癥,由于生活環(huán)境的特殊性,在生理生物學(xué)作用上與外界環(huán)境微生物都有所不同.在長(zhǎng)期共同進(jìn)化過(guò)程中,植物內(nèi)生菌與宿主植物之間形成了一種共生關(guān)系,外界環(huán)境條件與宿主植物代謝變化影響著植物內(nèi)生菌的種類(lèi)及其代謝發(fā)生相應(yīng)變化.隨著世界人口的增長(zhǎng),某些癌癥,抗藥細(xì)菌,寄生原生動(dòng)物和病原真菌嚴(yán)重影響著人們身體健康,尋找更有效藥物迫在眉睫.植物抗菌內(nèi)生菌作為植

2、物內(nèi)生菌中的一類(lèi),能產(chǎn)生多種新的抗菌活性物質(zhì),不但可以幫助人類(lèi)解決健康問(wèn)題,也可以解決植物和動(dòng)物健康問(wèn)題,但現(xiàn)階段對(duì)植物抗菌內(nèi)生菌的研究剛剛開(kāi)始,對(duì)其特性了解還不夠深入,無(wú)法對(duì)其充分利用,因此,對(duì)植物抗菌內(nèi)生菌的研究不僅能帶來(lái)巨大的社會(huì)效益還具有現(xiàn)實(shí)的理論意義.該實(shí)驗(yàn)主要選擇了一些具有藥用功效的植物組織作為抗菌內(nèi)生菌分離材料,對(duì)從蘆薈中分離到的一株具有廣譜抗菌活性的A11菌進(jìn)行了種屬鑒定,并對(duì)其抗菌物質(zhì)進(jìn)行了分離純化.實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1、

3、采用組織表面消毒的方法從銀杏、蘆薈等十多種植物組織中分離出了115株植物內(nèi)生菌.2、內(nèi)生菌A11具有廣譜的抗菌活性,對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等革蘭氏陽(yáng)性菌有很強(qiáng)的抑制作用,但對(duì)革蘭氏陰性菌的抑制活性不高,對(duì)一些植物病原真菌如番茄晚疫病原菌,桃紅粉單端孢菌、桃褐腐病原菌等也有較好的抑制效果,對(duì)引起食品腐敗的霉菌如青霉、黃曲霉等同樣有很好的抑制效果.3、參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》第八版和《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》,通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察,該菌株在

4、PDA培養(yǎng)基上菌體桿狀,產(chǎn)生芽孢,芽孢膨大為中生或近端生,革蘭氏染色呈陽(yáng)性,對(duì)內(nèi)生菌A11做生理生化特征測(cè)定,其接觸酶陽(yáng)性,氧化酶為陰性,運(yùn)動(dòng)性強(qiáng),有鞭毛,能水解淀粉,利用尿素,不降解羧甲基纖維素,V.P陽(yáng)性,利用葡萄糖等各種糖類(lèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣,硫化氫的產(chǎn)生和亞硝酸還原都為陰性,兼性厭氧,該菌在不同培養(yǎng)基上菌體的形態(tài)有很大的變化,從短桿狀到絲狀,生長(zhǎng)的最適溫度范圍28-30.5℃;對(duì)內(nèi)生菌A11做16S rDNA序列測(cè)定,4、內(nèi)生菌A11產(chǎn)生

5、的抗菌活性物質(zhì)具有廣譜抗菌活性,5、發(fā)酵液經(jīng)121℃處理15min,8000r/min離心5min取上清液,上清液用2倍體積的無(wú)水乙醇∶丙酮(1∶1,vol/vol)處理去掉多糖及蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì),8000r/min離心5min取上清液進(jìn)行減壓濃縮,回收有機(jī)溶劑,濃縮液用1倍體積的正丁醇進(jìn)行萃取,萃取兩次,合并萃取相,濃縮干燥后,水進(jìn)行充分溶解,用0.22um的濾膜過(guò)濾除去不溶物及細(xì)菌,過(guò)sephadex G-25分子篩,使活性物質(zhì)與其它雜