抗菌活性植物內(nèi)生菌篩選及其發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、植物內(nèi)生菌是一個龐大的具有普遍存在性的微生物特殊類群。近年來，研究表明植物中內(nèi)生菌能產(chǎn)生抗腫瘤、殺菌等特殊活性物質(zhì)，這使得植物內(nèi)生菌的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)展，同時(shí)也成為藥物研究一個新的熱點(diǎn)。 本論文是在抗結(jié)核分枝桿菌的植物內(nèi)生菌篩選的基礎(chǔ)上，根據(jù)"一菌多篩"的原則，擴(kuò)展為具有抑菌活性的植物內(nèi)生菌篩選及其活性菌株發(fā)酵優(yōu)化。論文進(jìn)行了植物樣本表面消毒、內(nèi)生菌分離純化、發(fā)酵及發(fā)酵產(chǎn)物預(yù)處理、抗菌活性菌株篩選、活性菌株鑒定及其發(fā)酵條件優(yōu)化等研

2、究。獲得的主要結(jié)果如下： 1、植物內(nèi)生菌的分離純化 采用己優(yōu)化的表面消毒方法對30種植物樣本進(jìn)行處理，分離得到46株內(nèi)生菌。但9株(3株真菌，6株細(xì)菌)不能在體外培養(yǎng)，另有7株內(nèi)生真菌在本實(shí)驗(yàn)特定的人工培養(yǎng)條件下不產(chǎn)生有性分生孢子。 2、抗菌活性植物內(nèi)生菌的篩選 ①得到菌絲預(yù)處理丙酮樣本37份，乙酸乙酯樣本37份；采用酒精沉淀法對發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理，得到樣本37份。②采用定量的二倍稀釋法(培養(yǎng)基采用改良羅氏

3、斜面培養(yǎng)基)對111份預(yù)處理樣本進(jìn)行初篩，得到來源于商陸(Phytolacca acinosa)的EP-S23，狹葉十大功勞(Mahonia fortunei)EM-L40、香樟(Cinnamomum camphora(Linn.)Presl)EC-S44的3株活性內(nèi)生真菌，其發(fā)酵液提取物溶液濃度為10mg/ml時(shí)對人型結(jié)核標(biāo)準(zhǔn)菌株(H37RV)有抑制作用。其中，EC-S44的發(fā)酵液提取物溶液濃度在15mg/ml時(shí)對人型結(jié)核耐藥菌株有抑

4、制生長作用。③采用KB紙片法對以上3株菌進(jìn)行復(fù)篩，得到香樟內(nèi)生菌EC-S44發(fā)酵液提取物溶液濃度為10mg/ml時(shí)對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單孢菌、大腸桿菌均有不同程度抑制作用，其中對金黃色葡萄球菌的抑菌圈到達(dá)16mm，同時(shí)用瓊脂二倍稀釋法測定最小抑菌濃度(MIC值)為6.5mg/ml。 3、活性菌株的鑒定和發(fā)酵條件優(yōu)化 ①通過初步形態(tài)學(xué)鑒定：香樟(Cinnamomum camphora(Linn.)Pres