食用菌內(nèi)生菌的分離鑒定及其代謝產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、內(nèi)生菌是一類(lèi)生長(zhǎng)于活體植物組織中的特殊的微生物,在研究過(guò)的植物中普遍存在,并且內(nèi)生菌能夠產(chǎn)生與宿主相同或相似的生物活性物質(zhì)。從內(nèi)生菌中篩選活性高的內(nèi)生菌株為尋找新型生物活性物質(zhì)開(kāi)辟了一條新的道路。食用菌是美食良藥兼用的大型真菌,目前有關(guān)食用菌內(nèi)生菌報(bào)道極少,并且主要是探討一些野生食用菌菌種人工栽培難是否與子實(shí)體內(nèi)的某些菌群有關(guān)的問(wèn)題。為了更好的了解和利用食用菌內(nèi)生菌資源,尋找到能產(chǎn)生與食用菌宿主相同或者相似的生物活性物質(zhì)的內(nèi)生菌株,更好

2、地了解不同類(lèi)群食用菌栽培方式和食用菌內(nèi)生菌分離方法與內(nèi)生菌在食用菌組織中的生態(tài)分布及數(shù)量之間的關(guān)系,本研究采用不同栽培方式的白蘑菇、香菇、秀珍菇、金針菇、豬肚菇、茶樹(shù)菇子實(shí)體為研究對(duì)象,分別采用研磨法、組織塊法、印跡法三種方法分離食用菌內(nèi)生菌試圖尋找到食用菌內(nèi)生菌的多樣性和內(nèi)生菌在食用菌組織中的生態(tài)分布規(guī)律。本研究研磨法從白蘑菇子實(shí)體中篩選出抑菌活性顯著的內(nèi)生菌株AB-114,對(duì)其分類(lèi)地位、抗菌物質(zhì)提取鑒定進(jìn)行了系統(tǒng)研究,主要試驗(yàn)結(jié)果如

3、下：
　　 ⑴用研磨法從六種食用菌子實(shí)體中共分離內(nèi)生菌58株,其中白蘑菇、香菇、秀珍菇內(nèi)生菌數(shù)量分別為27、19、12株,其它三種食用菌未分離到;通過(guò)抑菌試驗(yàn)分離到具有抑菌作用的內(nèi)生菌共15株,其中白蘑菇9株、香菇4株、秀珍菇2株,總抑菌率為29％。用組織塊法從六種食用菌子實(shí)體中共分離內(nèi)生菌21株,白蘑菇12株,香菇3株,秀珍菇6株,其它三種食用菌未分離到;印跡法未分離到食用菌內(nèi)生菌。AB-114活菌拮抗試驗(yàn)和發(fā)酵液拮抗試驗(yàn)結(jié)果

4、表明:該菌株對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌、木霉四種病原菌都表現(xiàn)出強(qiáng)的抑制作用,特別是對(duì)大腸桿菌、酵母菌和木霉,抑菌圈均達(dá)到了15 mm以上,所以AB-114菌株具有一定的研究和應(yīng)用潛力。
　　 ⑵對(duì)內(nèi)生細(xì)菌AB-114菌株的形態(tài)和分子鑒定進(jìn)行深入的研究,AB-114的生物學(xué)特性表明:該菌株的pH值適應(yīng)范圍較廣,但在pH低于5.0菌體生長(zhǎng)受到明顯抑制,最適培養(yǎng)pH值為7.0;最適溫度為30℃,致死溫度為70℃。該菌為需氧菌,

5、可以發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、水解淀粉,能利用檸檬酸鹽、丙二酸鹽,不產(chǎn)生硫化氫,能還原硝酸鹽,產(chǎn)生吲哚等。其16 SrDNA經(jīng)測(cè)定全長(zhǎng)是1440 bp,將此序列通過(guò)BLAST程序與GenBank中收集的氨基酸序列比對(duì),結(jié)果表明,AB-114菌株與多個(gè)假單胞菌屬細(xì)菌聚類(lèi)于一個(gè)分支上,同源性都在99％以上,基于生物學(xué)特性和16 SrDNA序列分析,將AB-114菌株歸類(lèi)于假單胞菌屬。
　　 ⑶采用有機(jī)溶劑沉淀法和溶媒萃取法對(duì)AB-114菌株發(fā)