乙醇影響AC16心肌細胞內(nèi)糖原沉積與AKT2及GLUT4蛋白的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　酒精性心肌病(Alcoholic Cardiomyopathy,ACM)是一種獲得性擴張型心肌病，與長期的酒精攝入（80g/天，大于5年）有關(guān)，主要表現(xiàn)為左心室擴張，心肌收縮力減低及心律失常等。在ACM患者及動物模型中，透射電鏡下可見心肌細胞內(nèi)糖原、脂滴異常累積，線粒體結(jié)構(gòu)異常等，但相關(guān)機制尚未明確。ACM發(fā)病機制比較復雜，已有學者在多方面進行探究，包括線粒體功能障礙、氧化應激、糖脂代謝紊亂等機制，目前關(guān)于乙醇對線粒體

2、生成，肌絲鈣離子敏感性及氧化應激的影響受到廣泛關(guān)注，而關(guān)于乙醇對心肌細胞內(nèi)糖原累積的相關(guān)機制研究不夠深入。GLUT4(Glucose transporter4)為葡萄糖轉(zhuǎn)運體，在心肌、骨骼肌及脂肪組織中均有高水平表達，絲氨酸蘇氨酸激酶(AK mouse Thymoma，AKT2)是調(diào)控GLUT4轉(zhuǎn)位的關(guān)鍵蛋白，二者對細胞攝取葡萄糖具有重要的調(diào)控作用。實驗主要檢測不同乙醇濃度對AC16細胞AKT2及GLUT4表達影響，探究ACM患者心肌細

3、胞內(nèi)糖原沉積的分子學機制。
　　方法：
　　1、AC16心肌細胞培養(yǎng)、傳代及凍存;
　　2、應用MTT法檢測不同乙醇濃度對AC16細胞存活率影響，選擇合適的乙醇濃度用于后續(xù)實驗;
　　3、實驗分組:正常對照組(0mmol/L)，低濃度乙醇組（50mmol/L），中濃度乙醇組(100mmol/L)，高濃度乙醇組(200mmol/L);
　　4、光鏡和電鏡下觀察不同乙醇濃度對AC16細胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)影響;

4、r>　　5、應用Western-Blot技術(shù)檢測不同乙醇濃度對AKT2及GLUT4表達水平的影響;
　　6、計量資料用均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析比較組間差異，P＜0.05提示有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)果：
　　1、應用MTT法測定不同濃度乙醇對細胞存活率影響，200mmol/L以下乙醇濃度對細胞存活率無明顯影響，當濃度達到300mmol/L時可見細胞存活率下降至76.2±

5、2.7％(n=3，P＜0.05)，500mmol/L時細胞存活率下降至45.9±3.1％(n=3,P＜0.05)。因此實驗中應用200mmol/L濃度乙醇為最高濃度。實驗分組:正常對照組（0mmol/L），低濃度乙醇組（50mmol/L），中濃度乙醇組(100mmol/L)，高濃度乙醇組（200mmol/L）。
　　2、光鏡下觀察不同乙醇濃度對細胞形態(tài)影響，低濃度乙醇組無明顯改變，中濃度乙醇組細胞體積及細胞核增大，高濃度乙醇組細胞

6、結(jié)構(gòu)改變更為明顯。
　　3、電鏡下觀察AC16細胞超微結(jié)構(gòu)改變，與正常對照組相比，高濃度乙醇組細胞內(nèi)線粒體數(shù)量有所減少，且有大量糖原聚集于細胞內(nèi)。
　　4、不同乙醇濃度對AC16細胞AKT2表達水平影響:AKT2在低濃度乙醇組（50mmol/L）無明顯改變;中濃度乙醇組（100mmol/L）增強66.2％±3.4％(n=3，P＜0.05);高濃度乙醇組(200mmol/L)增強98.9‰1.5％(n=3，P＜0.05)。

7、r>　　5、不同乙醇濃度對AC16細胞GLUT4表達水平影響:GLUT4在低濃度乙醇組（50mmol/L）無明顯改變;而中濃度乙醇組（100mmol/L）表達增強35.6％±4.1％（n=3，P＜0.05）;高濃度乙醇組(200mmol/L)表達增強更為明顯，增強56.9％±2.2％(n=3,P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　乙醇可通過上調(diào)AC16心肌細胞AKT2及GLUT4表達，促進GLUT4轉(zhuǎn)位，增強心肌細胞對葡萄糖的攝