線粒體融合蛋白2對(duì)大鼠骨骼肌L6肌細(xì)胞GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)位的影響.pdf

1、線粒體作為細(xì)胞能量代謝的核心，其結(jié)構(gòu)和功能的改變與胰島素抵抗的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。然而，線粒體缺陷是胰島素抵抗的原因，結(jié)果，還是其中的一個(gè)伴隨過程，目前仍有爭(zhēng)議。事實(shí)上，最早的關(guān)于線粒體功能與糖尿病之間相關(guān)性的研究是van den Ouweland JM等于1992年發(fā)現(xiàn)的線粒體DNA突變可導(dǎo)致母系遺傳性糖尿病。目前，關(guān)于二者相關(guān)性的眾多研究更傾向于線粒體功能的缺陷是繼發(fā)于胰島素抵抗而發(fā)生的，而非其始動(dòng)因素。但是隨著線粒體氧化及磷酸化能

2、力的下降，胰島素抵抗的程度也隨之增加，因此可以推斷線粒體功能的缺陷是加劇胰島素抵抗的原因之一。
　　 線粒體融合蛋白2（mitofusin 2，Mfn2）是位于線粒體外膜上的一種跨膜蛋白，它促進(jìn)了線粒體的融合，并且參與了線粒體代謝的調(diào)節(jié)。其表達(dá)具有組織特異性，在骨骼肌、心肌及大腦等高能量代謝組織中高表達(dá)。近期的研究提示Mfn2在葡萄糖穩(wěn)態(tài)的維持中起到了重要的作用，此外，Mfn2表達(dá)的缺陷可能是胰島素抵抗發(fā)生的潛在病理生理機(jī)制之一

3、。研究發(fā)現(xiàn)，在Mfn2/shRNA BALB/c小鼠中，早期即出現(xiàn)胰島素抵抗，同時(shí)伴有肝葡萄糖生成增加。Sebastian D等發(fā)現(xiàn)Mfn2缺失可引起線粒體功能障礙，活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)生成增加，c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)活性增強(qiáng)，而胰島素信號(hào)通路的關(guān)鍵分子胰島素受體底物1（insulin receptor substrate-1，IRS

4、-1）失活。骨骼肌細(xì)胞中Mfn2功能的獲取增加了葡萄糖氧化率及線粒體膜電位，而線粒體膜電位的增加說明線粒體丙酮酸氧化作用的增強(qiáng)及三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化的增強(qiáng)。最近，有學(xué)者提出在非糖尿病及糖尿病個(gè)體中Mfn2表達(dá)與胰島素敏感性之間存在著正相關(guān)關(guān)系。
　　 無論是在健康個(gè)體還是在2型糖尿病患者中，骨骼肌對(duì)葡萄糖的攝取和利用在全身葡萄糖穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)中都發(fā)揮了重要的作用。葡萄糖的攝取是葡萄糖代謝過程中的主要限速步驟，在骨骼肌中這一過程主要

5、由葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(glucose transporter 4，GLUT4)完成。GLUT4是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族(GLUTs)中的一員，主要存在于骨骼肌和脂肪組織中。GLUT4表達(dá)減少或轉(zhuǎn)位障礙直接導(dǎo)致骨骼肌對(duì)葡萄糖的攝取障礙，最終導(dǎo)致高血糖。GLUT4的轉(zhuǎn)運(yùn)主要是通過兩個(gè)獨(dú)立的信號(hào)途徑完成，一為胰島素依賴的信號(hào)途徑（PI3K-Akt途徑），另一條為非胰島素依賴的信號(hào)途徑(AMPK途徑)。研究發(fā)現(xiàn)全身葡萄糖的攝取與骨骼肌中GLUT4的表

6、達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。GLUT4的表達(dá)可通過調(diào)節(jié)GLUT4啟動(dòng)子區(qū)的肌細(xì)胞增強(qiáng)子2（myocyte enhancer factor 2，MEF-2）來實(shí)現(xiàn)，其中組蛋白去乙?；?histone deacetylases，HDACs)、過氧化物酶體增生物激活受體γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptorγ coactivator 1α, PGC-1α)及p38均可通過MEF-2來調(diào)節(jié)

7、GLUT4的表達(dá)。Sriwijitkamol A等報(bào)道在肥胖的胰島素抵抗大鼠中存在不同程度的AMPK-PGC-1α信號(hào)通路的異常，并且認(rèn)為AMPK可能是通過PGC-1α誘導(dǎo)GLUT4蛋白表達(dá)。隨后Leick L等證實(shí)了這一觀點(diǎn)，研究發(fā)現(xiàn)AICAR干預(yù)(AMPK激動(dòng)劑)可誘導(dǎo)野生型小鼠GLUT4蛋白表達(dá)增加，而在PGC-1α敲除小鼠中無此改變，進(jìn)一步肯定了AMPK-PGC-1α途徑在調(diào)節(jié)GLUT4表達(dá)中的重要作用。
　　 最近在一

8、項(xiàng)關(guān)于糖尿病減肥手術(shù)的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，6名病態(tài)肥胖女性患者通過手術(shù)成功減重之后Mfn2 mRNA表達(dá)水平升高，同時(shí)伴有GLUT4mRNA表達(dá)上調(diào)及全身葡萄糖的攝取增加，并且Mfn2 mRNA與GLUT4mRNA表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系。然而Mfn2在葡萄糖攝取方面的更深入的研究目前尚未見報(bào)道。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食喂養(yǎng)所致胰島素抵抗的大鼠模型中骨骼肌Mfn2及GLUT4表達(dá)減低。國外亦有報(bào)道，在肥胖和2型糖尿病患者骨骼肌中同樣存在Mfn

9、2及GLUT4的表達(dá)減低，且兩者之間存在正相關(guān)關(guān)系。
　　 那么在整體動(dòng)物模型中，Mfn2過表達(dá)能否抗衡病理?xiàng)l件，改善大鼠胰島素抵抗呢？本研究通過高脂飲食構(gòu)建大鼠胰島素抵抗模型，觀察Mfn2腺病毒干預(yù)后對(duì)大鼠胰島素敏感性的變化及對(duì)骨骼肌GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運(yùn)的影響;通過腺病毒轉(zhuǎn)染L6肌細(xì)胞，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步驗(yàn)證Mfn2對(duì)GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，進(jìn)一步探討Mfn2影響GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運(yùn)的具體機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括以下三部分

10、:
　　 第一部分Mfn2對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠骨骼肌GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
　　 目的:Mfn2過表達(dá)對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠胰島素敏感性及骨骼肌GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
　　 方法:40只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組(NC，n=10)、高脂飲食組(HF，n=10)、高脂+空病毒組(HF+Ado，n=10)、高脂+ Mfn2腺病毒組(HF+AdMfn2，n=10)，

11、NC組給予普通飼料喂養(yǎng)，HF組、HF+Ado組及HF+組給予高脂飼料喂養(yǎng)8周，實(shí)驗(yàn)第8周末應(yīng)用清醒狀態(tài)下高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各組大鼠胰島素抵抗程度。實(shí)驗(yàn)第9周開始，NC組、HF組、HF+Ado組及HF+AdMfn2組分別接受0.1ml生理鹽水、生理鹽水、Ado、AdMfn2經(jīng)尾靜脈注射，每周1次，共3周。病毒濃度為1×1010pfu/ml。實(shí)驗(yàn)第11周末再次行高胰島素正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各組大鼠胰島素抵抗程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前取血用于

12、生化指標(biāo)的測(cè)定，之后處死各組大鼠，留取骨骼肌組織標(biāo)本于-80℃低溫冰箱保存。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)方法檢測(cè)骨骼肌Mfn2及GLUT4 mRNA的表達(dá)。Western blot方法檢測(cè)骨骼肌Mfn2、胰島素受體β(IRβ)、磷脂酰肌醇-3激酶（PI-3K）、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、腺苷酸活化蛋白激酶α（AMPKα）、p-AMPKα及GLUT4蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠空腹

13、血糖、血清胰島素及游離脂肪酸的比較:高脂飲食干預(yù)11周后，大鼠空腹血葡萄糖、胰島素及游離脂肪酸水平HF組、HF+Ado組明顯高于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); HF+AdMfn2組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。HF+Ado組與HF組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），HF+AdMfn2組明顯低于HF組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 2、大鼠葡萄糖輸注率(GIR)的

14、比較:高脂飲食喂養(yǎng)11周后，葡萄糖輸注率(GIR) HF組明顯低于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AdMfn2干預(yù)后GIR明顯增加，HF+AdMfn2組較HF組增加了67％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而HF+Ado組較HF組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3、Mfn2 mRNA和蛋白表達(dá)變化的比較:高脂飲食喂養(yǎng)11周后，HF組Mfn2mRNA和蛋白水平表達(dá)明顯下降，分別為NC組的51％

15、和44％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AdMfn2干預(yù)后，HF+AdMfn2組Mfn2 mRNA和蛋白水平分別為HF組的3.4和3.3倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而HF+Ado組較HF組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4、GLUT4 mRNA和蛋白表達(dá)變化的比較:高脂飲食喂養(yǎng)11周后，HF組GLUT4 mRNA和蛋白水平表達(dá)明顯下降，分別為NC組的56％和66％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

16、.05)。AdMfn2干預(yù)后，HF+AdMfn2組GLUT4mRNA和蛋白水平分別為HF組的1.49和1.31倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而HF+Ado組較HF組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5、AdMfn2干預(yù)對(duì)GLUT4轉(zhuǎn)位的影響:與NC組相比，HF組骨骼肌組織中膜蛋白與總蛋白比值(PM/T)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與HF組相比，AdMfn2干預(yù)后HF+AdMfn2組

17、PM/T比值為HF組的1.87倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;而這一比值在HF+Ado組和HF組中無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 6、AdMfn2誘導(dǎo)GLUT4轉(zhuǎn)位過程中Akt及AMPK信號(hào)通路蛋白表達(dá)的變化:與NC組相比，HF組IRβ、PI-3K、p-Akt和Akt蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而在HF組、HF+Ado組和HF+AdMfn2組中上述指標(biāo)無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)

18、學(xué)意義（P＞0.05）。與NC組相比，HF組p-AMPKα蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HF+Ado組與HF組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AdMfn2顯著增加了AMPKα的磷酸化水平，HF+AdMfn2組p-AMPKα蛋白表達(dá)水平為HF組的2.76倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但總的AMPKα蛋白表達(dá)水平各組間無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:

19、r>　　 1、高脂飲食使大鼠空腹血糖、胰島素及游離脂肪酸水平升高，葡萄糖輸注率下降，導(dǎo)致胰島素抵抗，Mfn2過表達(dá)可改善高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠胰島素抵抗。
　　 2、高脂飲食可使大鼠骨骼肌Mfn2表達(dá)下降，Mfn2過表達(dá)可使骨骼肌Mfn2表達(dá)上調(diào)。
　　 3、高脂飲食可使大鼠骨骼肌GLUT4的表達(dá)及轉(zhuǎn)位減少，Mfn2過表達(dá)可使骨骼肌GLUT4的表達(dá)及轉(zhuǎn)位上調(diào)。
　　 4、Mfn2過表達(dá)在增加GLUT4轉(zhuǎn)位的同時(shí)，伴

20、有AMPK磷酸化水平增加，而Akt磷酸化水平無明顯變化。Mfn2過表達(dá)可能通過AMPK磷酸化增加的方式增加了GLUT4的轉(zhuǎn)位，從而改善了胰島素敏感性。
　　 第二部分 Mfn2對(duì)L6肌細(xì)胞GLUT4表達(dá)的影響
　　 目的:通過腺病毒轉(zhuǎn)染siMfn2及AdMfn2干預(yù)L6肌細(xì)胞，觀察L6肌細(xì)胞GLUT4蛋白的表達(dá)情況，明確Mfn2表達(dá)對(duì)GLUT4蛋白表達(dá)的影響。
　　 方法:將L6細(xì)胞接種于含10％ FBS、100

21、U/ml青霉素、100ug/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，37℃、5％CO2飽和培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，每2-3天傳代一次，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期后將含10％ FBS的培養(yǎng)基換成含2％FBS的培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞分化，共7天。分后成功后，實(shí)驗(yàn)分為四組:
　　 ①正常對(duì)照組(NC group)；
　　 ②正常+空病毒組(Ado group)；
　　 ③正常+小干擾RNA病毒組(siMfn2 group)；
　　 ④正常+

22、Mfn2腺病毒組(AdMfn2 group)。
　　 L6肌細(xì)胞分化成功后，換用含0.5％ FBS的DMEM培養(yǎng)基，以100 pfu/cell(100MOI)的濃度分別加入Ado、siMfn2或AdMfn2轉(zhuǎn)染孵育24h，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前加入胰島素（終濃度為100nM）孵育10min，收集細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)L6肌細(xì)胞Mfn2、AMPKα、p-AMPKα、PGC-1α及GLUT4蛋白的表達(dá)。
　　

23、 結(jié)果:
　　 1、siMfn2及AdMfn2干預(yù)對(duì)Mfn2蛋白表達(dá)影響的比較:siMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞Mfn2蛋白水平明顯下降，siMfn2組約為NC組的13.9％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞Mfn2蛋白表達(dá)水平明顯增加，AdMfn2組約為NC組的2.61倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。為排除病毒轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞的影響，以空病毒作為對(duì)照，Ado組與NC組相比無明顯差異

24、，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AdMfn2組Mfn2蛋白表達(dá)水平較siMfn2組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、siMfn2及AdMfn2干預(yù)對(duì)p-AMPKα及AMPK蛋白表達(dá)影響的比較:siMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞p-AMPKα蛋白水平明顯下降，siMfn2組約為NC組的61.1％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞p-AMPKα蛋白表達(dá)水平明顯增加

25、，AdMfn2組約為NC組的1.49倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ado組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AdMfn2組p-AMPKα蛋白水平較siMfn2組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各組間AMPKα蛋白表達(dá)無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3、siMfn2及AdMfn2干預(yù)對(duì)PGC-1α蛋白表達(dá)影響的比較:siMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞PGC-1α

26、蛋白水平明顯下降，siMfn2組約為NC組的32.4％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞PGC-1α蛋白表達(dá)水平明顯增加，AdMfn2組約為NC組的1.95倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ado組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。AdMfn2組PGC-1α蛋白水平較siMfn2組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4、siMfn2及AdMfn2

27、干預(yù)對(duì)GLUT4蛋白表達(dá)影響的比較:siMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞GLUT4蛋白水平明顯下降，siMfn2組約為NC組的54.5％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞GLUT4蛋白表達(dá)水平明顯增加，AdMfn2組約為NC組的1.62倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ado組與NC組相比無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AdMfn2組GLUT4蛋白水平較siMfn2組明顯升高，

28、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:在L6肌細(xì)胞中，上調(diào)Mfn2表達(dá)可使AMPK磷酸化水平增加，PGC-1α蛋白表達(dá)增加，GLUT4蛋白表達(dá)增加;下調(diào)Mfn2表達(dá)后，隨著Mfn2表達(dá)的下降，p-AMPK、PGC-1α及GLUT4的表達(dá)均隨之出現(xiàn)下調(diào)。
　　 第三部分 AMPK在Mfn2誘導(dǎo)的GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)位中的作用
　　 目的:通過AdMfn2腺病毒轉(zhuǎn)染干預(yù)L6肌細(xì)胞，并加入compound C（

29、AMPK抑制劑），觀察L6肌細(xì)胞中GLUT4表達(dá)及轉(zhuǎn)位的變化，明確AMPK對(duì)GLUT4蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)位的影響。
　　 方法:將L6細(xì)胞接種子含10％ FBS、100U/ml青霉素、100ug/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，37℃、5％CO2飽和培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，每2-3天傳代一次，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期后將含10％ FBS的培養(yǎng)基換成含2％FBS的培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞分化，共7天。實(shí)驗(yàn)分為四組:
　　 ①正常對(duì)照組(NC grou

30、p)；
　　 ②正常+Mfn2腺病毒組(AdMfn2 group)；
　　 ③正常+compound C組(CC group)；
　　 ④Mfn2腺病毒+compound C組(AdMfn2+ CC group)。
　　 L6肌細(xì)胞分化成功后，加入compound C10uM孵育30min，然后以100 pfu/cell(100 MOI)的濃度加入AdMfn2轉(zhuǎn)染孵育24h，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前加入胰島素（終濃度為

31、100nM）孵育10min，收集細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)L6肌細(xì)胞Mfn2、AMPKα、p-AMPKα、Akt、p-Akt、PGC-1α及GLUT4蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、AdMfn2及compound C干預(yù)對(duì)Mfn2蛋白表達(dá)影響的比較:AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，L6肌細(xì)胞Mfn2蛋白表達(dá)水平明顯增加，AdMfn2組約為NC組的3.0倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。CC組

32、較NC組略有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。compound C和AdMfn2共同干預(yù)后，AdMfn2+CC組較NC組相比Mfn2蛋白表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;但較AdMfn2組相比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、AdMfn2及compound C干預(yù)對(duì)p-AMPKα及AMPK蛋白表達(dá)影響的比較:AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，AdMfn2組較NC組相比p-AMPKα蛋白表達(dá)明顯增加

33、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。compound C單獨(dú)干預(yù)及compound C加AdMfn2共同干預(yù)后，CC組和AdMfn2+CC組p-AMPKα蛋白表達(dá)水平較NC組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;同樣低于AdMfn2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而AdMfn2+CC組與CC組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組間AMPKα蛋白表達(dá)無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3

34、、AdMfn2及Compound C干預(yù)對(duì)p-Akt及Akt蛋白表達(dá)影響的比較:各組間p-Akt及Akt蛋白表達(dá)均無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4、AdMfn2及Compound C干預(yù)對(duì)GLUT4轉(zhuǎn)位影響的比較:AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，AdMfn2組較NC組相比GLUT4膜蛋白的表達(dá)水平明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。compound C單獨(dú)干預(yù)及compound C加AdMfn2共同干

35、預(yù)后，CC組和AdMfn2+CC組GLUT4膜蛋白表達(dá)水平較NC組降低，并且也低于AdMfn2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而AdMfn2+CC組與CC組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，AdMfn2組較NC組相比GLUT4總蛋白的表達(dá)水平明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。compound C單獨(dú)干預(yù)及compound C加AdMfn2共同干預(yù)后，CC組和AdMfn2+CC組

36、GLUT4總蛋白表達(dá)較NC組降低，并且也低于AdMfn2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而AdMfn2+CC組與CC組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。GLUT4膜蛋白與總蛋白的比值各組間無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5、AdMfn2及compound C干預(yù)對(duì)PGC-1α蛋白表達(dá)影響的比較:AdMfn2干預(yù)24小時(shí)后，AdMfn2組較NC組相比PGC-1α蛋白表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)

37、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。compound C單獨(dú)干預(yù)及compound C加AdMfn2共同干預(yù)后，CC組和AdMfn2+CC組PGC-1α蛋白表達(dá)水平較NC組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);同樣低于AdMfn2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而AdMfn2+CC組與CC組相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.AdMfn2腺病毒轉(zhuǎn)染L6肌細(xì)胞可上調(diào)細(xì)胞Mfn2表達(dá)，加