miRNAs在慢性痛風(fēng)患者血漿中的表達(dá)及穿虎通痹合劑對(duì)差異性miRNAs表達(dá)的干預(yù)作用研究.pdf

1、目的：應(yīng)用microRNA基因芯片技術(shù)檢測(cè)慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血漿中微小 RNA（microRNAs，miRNAs）的表達(dá)譜系，篩選其與正常人血漿中差異性表達(dá)的miRNAs，應(yīng)用熒光定量PCR（RT-qPCR）技術(shù)對(duì)部分差異性表達(dá)的miRNAs進(jìn)行驗(yàn)證分析。同時(shí)研究穿虎通痹合劑治療慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的臨床療效和對(duì)差異性 miRNAs表達(dá)的干預(yù)作用，探討 miRNAs在慢性痛風(fēng)中的作用機(jī)制，研究穿虎通痹合劑治療慢性痛風(fēng)的作用新靶點(diǎn)，為中醫(yī)藥

2、防治慢性痛風(fēng)提供新的臨床和分子學(xué)依據(jù)。
　　方法：⑴采集4例慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和4例健康對(duì)照者的空腹血血漿，采用Trizol法提取RNA，運(yùn)用exqion的LNATM miRNAs microarray高通量檢測(cè)篩選miRNAs的表達(dá)譜系，運(yùn)用聚類分析軟件分析差異性表達(dá)的miRNAs。⑵擴(kuò)大慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者樣本量至60例，擴(kuò)大健康對(duì)照組的樣本量至30例，采用RT-qPCR方法對(duì)部分差異性表達(dá)的miRNAs進(jìn)行驗(yàn)證分析。⑶采用隨機(jī)

3、、雙盲、雙模擬、平行對(duì)照研究的方法，將195例慢性性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者按隨機(jī)數(shù)字表法分為穿虎通痹合劑組、別嘌醇組和對(duì)照組，采集患者治療前、治療后4周及8周的血漿，運(yùn)用RT-qPCR方法檢測(cè)部分差異性miRNAs，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定趨化因子2（CCL2）和趨化因子8（CXCL8）水平，分析穿虎通痹合劑對(duì)差異性表達(dá)miRNAs和趨化因子CCL2、CXCL8的干預(yù)作用。
　　結(jié)果：①慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血漿中有48個(gè)miRNAs呈差異

4、性表達(dá)，其中表達(dá)明顯上調(diào)較對(duì)照組≥1.5倍的有36個(gè)，分別為 miR-502-5p、miR-4748、miR-4726-5p、miR-10a-3p、miR-302a-3p、miR-4251、miR-5580-5p、miR-639、miR-4764-5p、miR-631、miR-4531、miR-1284、miR-H8-5p、miR-198；、miR-4466、miR-874-3p、miR-5190、miR-205-3p、miR-204-

5、5p、miR-183-3p、miR-H1、miR-1471、miR-660-3p、miR-92a-2-5p、miR-1255a、miR-505-5p、miR-765、miR-4780、miR-4324、miR-4738-3p、miR-4800-5p、miR-B1-5p、miR-4455、miR-5004-3p、miR-4632-3p、miR-4634；表達(dá)下調(diào)較對(duì)照組≤1.5倍的有12個(gè)，包括miR-548l、miR-361-5p、mi

6、R-326、miR-151a-3p、miR-486-5p、miR-769-5p、miR-130b-3p、miR-423-3p、miR-4288、miR-4732-5p、miR-584-5p、miR-339-5p。②進(jìn)一步行RT-qPCR驗(yàn)證分析顯示，慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者血漿中miR-339-5p、miR-486-5p和 miR-361-5p表達(dá)水平明顯低于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），與miRNAs基因芯片結(jié)果相一致。

7、③臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，穿虎通痹合劑組、別嘌醇組和對(duì)照組患者的基線指標(biāo)無(wú)顯著差異（p>0.05）。三組治療4周后的差值比較，穿虎通痹合劑和別嘌醇組在上調(diào)血漿miR-486-5p和miR-361-5p和降低血漿CCL2水平方面優(yōu)于對(duì)照組；穿虎通痹合劑在上調(diào)血漿miR-339-5p水平及降低血漿CCL8水平方面優(yōu)于別嘌醇組和對(duì)照組。三組治療8周后的差值比較，穿虎通痹合劑和別嘌醇組較對(duì)照組能更好的上調(diào)血漿 miR-486-5p和miR-361-5

8、p水平，穿虎通痹合劑較別嘌醇組和對(duì)照組能更好的上調(diào)血漿miR-339-5p和降低血尿酸水平。意向性分析顯示，穿虎通痹合劑和別嘌醇組較對(duì)照組能明顯降低慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作率，而穿虎通痹合劑較別嘌醇副作用更少。④慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者的血漿miR-486-5p及miR-361-5p水平與其疼痛評(píng)分和C反應(yīng)蛋白（CRP）等呈顯著負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：⑴慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎血漿中miR-502-5p、miR-4748等36個(gè)miRNAs表達(dá)

9、上調(diào)，miR-339-5p、miR-486-5p、miR-361-5p等12個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。48個(gè)差異性miRNAs可能在慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中起重要作用。⑵血漿miR-486-5p及miR-361-5p水平與慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)疼痛評(píng)分等反映炎癥嚴(yán)重程度的指標(biāo)相關(guān)，可作為判斷病情和臨床轉(zhuǎn)歸的生物學(xué)指標(biāo)。⑶穿虎通痹合劑治療慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的臨床療效與別嘌醇組相當(dāng)，它可能通過(guò)上調(diào)miR-339-5p、miR-486-5p、m