miRNAs在腎癌中的表達(dá)及功能研究.pdf

1、目的：
　　研究miRNAs(miR-122,-210,-363)在腎癌中的表達(dá)及臨床相關(guān)性,并探討miR-122在腎癌中的功能作用。
　　方法：
　　1.本研究主要采用RT-qPCR方法檢測(cè)miRNAs在腎癌中的表達(dá)情況。在本研究組前期第二代大規(guī)模平行測(cè)序的基礎(chǔ)上,對(duì)51例腎癌及其癌旁組織樣本、20例腎癌及正常對(duì)照外周血樣本分別進(jìn)行RNA的抽提,然后將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,再應(yīng)用RT-qPCR方法進(jìn)一步驗(yàn)證m

2、iRNAs(miR-122,-210,-363)在腎癌與正常對(duì)照樣本中的表達(dá)差異,最后對(duì)miRNAs與腎癌患者的臨床病理特征之間的的相關(guān)性進(jìn)行深入分析。
　　2.本研究主要采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)對(duì)腎癌中miR-122的功能作用進(jìn)行深入探討。通過轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,分別進(jìn)行MTT試驗(yàn)和劃痕試驗(yàn)來分析細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的程度變化,進(jìn)而探討miR-122在腎癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。
　　結(jié)果：
　　1.與相應(yīng)的對(duì)照組比較,miR-122

3、和miR-210在腎癌患者的組織和外周血中表達(dá)均顯著升高,其中miR-122分別上調(diào)約19.74倍(P﹤0.05)、24.11倍(P﹤0.05),miR-210分別上調(diào)約7.00倍(P﹤0.05)、7.87倍(P﹤0.05);miR-363在腎癌組織中表達(dá)明顯下調(diào),平均下調(diào)約11.49％(P﹤0.05),然而在腎癌外周血中卻表現(xiàn)為表達(dá)顯著升高,平均上調(diào)約13.82倍(P﹤0.05)。且miR-363的相對(duì)表達(dá)水平與腎癌患者的年齡、病理分

4、型及分期顯著相關(guān)(P﹤0.05)。2.細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,MTT試驗(yàn)結(jié)果顯示,與相應(yīng)的negative control組和空白組比較,轉(zhuǎn)染pre-miR-122后腎癌細(xì)胞的增殖率明顯升高,轉(zhuǎn)染miR-122 inhibitor后腎癌細(xì)胞增殖率顯著降低(P﹤0.05);劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染pre-miR-122后腎癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng),而轉(zhuǎn)染miR-122 inhibitor后腎癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力減弱。
　　結(jié)論：
　　1