農(nóng)作物秸稈青貯飼料中耐低溫乳酸菌的篩選、鑒定及驗證研究.pdf

1、針對西藏地區(qū)高原寒冷氣候不利于常規(guī)商品化乳酸菌制劑發(fā)揮其改善青貯發(fā)酵品質(zhì)的問題，發(fā)掘和利用適合于西藏地區(qū)優(yōu)質(zhì)青貯飼料生產(chǎn)的乳酸菌種質(zhì)資源尤為重要。本研究以西藏主要農(nóng)作物秸稈青貯飼料為研究對象，從中分離耐低溫乳酸菌并進行鑒定，進而優(yōu)選出產(chǎn)酸和生長能力俱佳的乳酸菌菌株。在此基礎(chǔ)上，將篩選出的乳酸菌菌株應(yīng)用于西藏地區(qū)牧草和農(nóng)作物秸稈青貯飼料中，探討其在低溫條件下對西藏地區(qū)牧草和農(nóng)作物秸稈青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響。為西藏地區(qū)優(yōu)良耐低溫青貯乳酸菌添

2、加劑的開發(fā)與應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。
　　1.西藏主要農(nóng)作物秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的研究
　　本試驗研究了添加葡萄糖對西藏地區(qū)不同農(nóng)作物秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響。青貯原料分別為燕麥秸稈、玉米秸稈、青稞秸稈和小麥秸稈。試驗設(shè)置2個處理，對照組(C)和1％葡萄糖添加組(G)。分別在青貯第10d和45 d開窖取樣，測定青貯發(fā)酵品質(zhì)。結(jié)果表明:玉米秸稈和燕麥秸稈自然發(fā)酵容易獲得成功;青稞秸稈和小麥秸稈自然發(fā)酵難以獲得成功。添加葡萄糖對農(nóng)

3、作物秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)改善效果不明顯，認為限制西藏農(nóng)作物秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的主要因素是乳酸菌數(shù)量及活性不足。
　　2.西藏主要農(nóng)作物秸稈青貯飼料中耐低溫乳酸菌的理化特性及篩選鑒定
　　本試驗以青稞秸稈、燕麥秸稈、小麥秸稈和玉米秸稈青貯10d和45 d的青貯飼料為研究對象，從中共分離出20株耐低溫乳酸菌菌株，均為同型發(fā)酵乳酸菌。其中乳酸球菌8株，其余均為乳酸桿菌。通過耐酸試驗，20株乳酸菌菌株均能在pH值3.5～7.0的條件下生長

4、，尤其是HG24、LH2、O7、O30、LOG5、LOG9、WG10、WG27、LW4、M1、MG26、LMG4仍可在pH3.0的條件下微弱生長，表明這12株乳酸菌菌株適應(yīng)酸性環(huán)境能力更強。在耐鹽性上，所有乳酸菌菌株均能在3％和6.5％ NaCl條件下生長良好。溫度試驗中，所有乳酸菌菌株都能夠在5～30℃范圍內(nèi)良好生長。因此，青藏高原極端環(huán)境中篩選出的20株乳酸菌菌株具有較強的耐酸、耐鹽和耐低溫性，對環(huán)境具有較強的適應(yīng)性，而且能廣泛地利

5、用碳源，更適于在極端環(huán)境下生存。經(jīng)形態(tài)、生理生化特性測定及16S rRNA序列鑒定，確定菌株LH7、LO7、LO8、W34、LW7和M35為戊糖片球菌（P.Pentosaceus），LH9和LOG9為乳酸片球菌(P.Acidilactici)，LM8為棒狀乳桿菌扭曲亞種（L.coryniformis subsp.torquens），HG24、LH2、O7、O30、LOG5、WG10、WG27、LW4、M1、MG26和LMG4均為植物乳桿

6、菌（L.Plantarum）。分離的四種乳酸菌中，植物乳桿菌與其他三種乳酸菌相比，產(chǎn)酸能力較強，生長速率較快。植物乳桿菌的所有菌株中，M1的產(chǎn)酸能力最強，生長速率最快;戊糖片球菌的所有菌株中，LO7的產(chǎn)酸能力最強，生長速率最快;乳酸片球菌的所有菌株中，LOG9的產(chǎn)酸能力最強，生長速率最快。因此將篩選出菌株M1、LM8、LO7和LOG9作為青貯添加劑研究其對青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響。
　　3.耐低溫乳酸菌對不同青貯溫度下意大利黑麥草青貯發(fā)

7、酵品質(zhì)的影響
　　本試驗研究了篩選出的四株耐低溫乳酸菌菌株在不同青貯溫度下對意大利黑麥草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響。試驗設(shè)對照組(B)和4株不同乳酸菌處理組(M1，LM8，LO7，LOG9)，青貯第30d開窖取樣，測定青貯發(fā)酵品質(zhì)。結(jié)果表明:在青貯溫度為25℃，15℃，10℃時，添加篩選的乳酸菌均顯著降低了意大利黑麥草青貯飼料的AN/TN和乙酸含量，顯著提高了LA/AA、乳酸、干物質(zhì)和WSC含量，改善了青貯發(fā)酵品質(zhì)。綜合所有發(fā)酵品質(zhì)指

8、標，青貯溫度為25℃時，添加乳酸菌M1組發(fā)酵品質(zhì)最好，青貯溫度為10℃和15℃時，添加乳酸菌LM8組發(fā)酵品質(zhì)最好。這表明棒狀乳桿菌LM8更適合用做低溫條件下的青貯添加劑。
　　4.耐低溫乳酸菌對西藏葦狀羊茅和燕麥秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響
　　本試驗研究了篩選出的四株耐低溫乳酸菌菌株對西藏當?shù)厝敔钛蛎┖脱帑溄斩捛噘A飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響。試驗設(shè)對照組(B)、商品乳酸菌處理組(G)和4株篩選出的乳酸菌處理組(M1，LM8，LO7，LO