大鼠尺神經(jīng)損傷平面與修復(fù)時(shí)間對(duì)爪內(nèi)骨骼肌影響的檢測(cè)及評(píng)價(jià)研究.pdf

1、目的:研究SD大鼠尺神經(jīng)不同損傷平面和不同修復(fù)時(shí)間對(duì)其支配的爪內(nèi)骨骼肌形態(tài)學(xué)和肌細(xì)胞凋亡的影響,為法醫(yī)臨床學(xué)尺神經(jīng)損傷鑒定合理時(shí)間的研究提供基礎(chǔ)。通過尺神經(jīng)損傷修復(fù)3個(gè)月后行爪內(nèi)骨骼肌的觀察,比較不同時(shí)間和不同斷面尺神經(jīng)損傷后的治療效果,觀察臨床上延遲修復(fù)和早期修復(fù)的療效區(qū)別以及神經(jīng)損傷部位對(duì)爪內(nèi)骨骼肌影響的區(qū)別。
　　 材料和方法本課題分兩部分。
　　 (一)第一部分大鼠尺神經(jīng)損傷平面與修復(fù)時(shí)間對(duì)爪內(nèi)骨骼肌形態(tài)學(xué)的影響

2、研究
　　 選擇SD大鼠42只,以尺神經(jīng)肘部和腕部平面分為兩組,將兩個(gè)平面的尺神經(jīng)以銳器切斷,建立大鼠尺神經(jīng)損傷模型。大鼠左側(cè)尺神經(jīng)按照損傷后即刻、傷后1個(gè)月和傷后3個(gè)月分為三組,每組6只,在各時(shí)間組分別進(jìn)行損傷尺神經(jīng)縫合修復(fù)作為實(shí)驗(yàn)組。以大鼠右側(cè)尺神經(jīng)為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組不予縫合修復(fù)。另設(shè)不予任何實(shí)驗(yàn)處理的6只大鼠為正常對(duì)照組。(設(shè)腕部尺神經(jīng)損傷即刻修復(fù)組為W0,腕部尺神經(jīng)損傷1個(gè)月修復(fù)組為W1,腕部尺神經(jīng)損傷3個(gè)月修復(fù)組

3、為W3,相應(yīng)時(shí)間組的肘部尺神經(jīng)損傷修復(fù)組為E0、E1和E3)。尺神經(jīng)修復(fù)3個(gè)月后取出各組大鼠的雙側(cè)爪內(nèi)肌,依次稱量各組爪內(nèi)骨骼肌濕重,經(jīng)中性福爾馬林液固定后,常規(guī)制成石蠟切片,分別進(jìn)行HE染色和Masson染色,并測(cè)量爪內(nèi)骨骼肌細(xì)胞的橫截面積和膠原纖維占肌纖維截面積的比率。
　　 (二)第二部分尺神經(jīng)損傷平面與修復(fù)時(shí)間對(duì)爪內(nèi)骨骼肌細(xì)胞凋亡的影響研究
　　 選擇SD大鼠42只,以尺神經(jīng)肘部和腕部?jī)蓚€(gè)損傷平面分為兩組,實(shí)驗(yàn)分

4、組同第一部分。尺神經(jīng)修復(fù)3個(gè)月后取出各組大鼠的雙側(cè)爪內(nèi)肌,中性福爾馬林固定后制成石蠟切片,進(jìn)行爪內(nèi)骨骼肌細(xì)胞凋亡的免疫組織化學(xué)染色觀察。
　　 結(jié)果:
　　 (一)第一部分
　　 1.各組大鼠爪內(nèi)骨骼肌濕重和肌細(xì)胞橫截面積結(jié)果示:W0、W1、E0和E1組的左側(cè)實(shí)驗(yàn)組與右側(cè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)側(cè)均明顯高于實(shí)驗(yàn)對(duì)照側(cè),各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；W3和E3組的左側(cè)實(shí)驗(yàn)組與右側(cè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　

5、　 2.相同損傷部位,不同修復(fù)時(shí)間的各實(shí)驗(yàn)組大鼠爪內(nèi)骨骼肌濕重和肌細(xì)胞橫截面積結(jié)果示,正常對(duì)照組與W0組之間無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,正常對(duì)照組和W0組均高于W1和W3組,W1組亦明顯高于W3組,且各組差異均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；E0、E1、E3組和正常對(duì)照組之間的比較結(jié)果與W0、W1、W3組和正常對(duì)照組之間的比較結(jié)果均一致。
　　 3.失神經(jīng)支配后爪內(nèi)骨骼肌中膠原纖維增多,隨失神經(jīng)時(shí)間延長(zhǎng),膠原纖維亦逐漸增多,但早期增生(

6、即刻修復(fù)組)并不明顯,到失神經(jīng)1個(gè)月后開始明顯增多,失神經(jīng)3個(gè)月時(shí)見大量膠原纖維并可見肌肉纖維化。大鼠爪內(nèi)骨骼肌中膠原纖維占肌纖維截面積比率的結(jié)果顯示,W1和E1組的實(shí)驗(yàn)組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)側(cè)均低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照側(cè),其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；W0、W3、E0和E3組的左側(cè)實(shí)驗(yàn)組與右側(cè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組,其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相同修復(fù)時(shí)間,腕部與肘部相比,W0組和E0組之間；W1組和E1組之間；及W3組和E3組之間的爪內(nèi)骨骼肌濕重、肌細(xì)胞截面積和膠原纖

7、維的增生變化,其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (二)第二部分
　　 1.隨失神經(jīng)時(shí)間延長(zhǎng),爪內(nèi)骨骼肌中促凋亡基因表達(dá)蛋白Fas和Caspase-3表達(dá)逐漸增高,抑凋亡基因表達(dá)蛋白Bcl-2表達(dá)降低；恢復(fù)神經(jīng)支配后,Bcl-2表達(dá)顯著升高,Fas和Caspaso=3表達(dá)降低。W0、W1、E0和E1組的實(shí)驗(yàn)組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)側(cè)的Fas和Caspase-3表達(dá)增高幅度明顯低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照側(cè),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而W3和E3組的實(shí)

8、驗(yàn)組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組的Fas和Caspase-3的表達(dá)增高均無明顯差異,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。W0、W1、W3、E0、E1和E3的實(shí)驗(yàn)側(cè)與實(shí)驗(yàn)對(duì)照側(cè)相比,實(shí)驗(yàn)側(cè)的Bcl-2表達(dá)量均大于實(shí)驗(yàn)對(duì)照側(cè),各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.相同損傷部位,不同修復(fù)時(shí)間的各實(shí)驗(yàn)組大鼠爪內(nèi)骨骼肌中Fas和Caspase-3表達(dá)比較,正常對(duì)照組與W0組之間無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,正常對(duì)照組和W0組均低于W1和W3組,W1組亦明顯低于W3組,且各

9、組差異均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；E0、E1、E3組和正常對(duì)照組之間的比較結(jié)果與W0、W1、W3組和正常對(duì)照組之間的比較結(jié)果均一致。
　　 3.相同損傷部位,不同修復(fù)時(shí)間的各實(shí)驗(yàn)組大鼠爪內(nèi)骨骼肌中Bcl-2表達(dá)比較,正常對(duì)照組低于W0組和W1組,但高于W3組；W0組高于與W1組和W3組；W1組高于W3組,各組差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；E0、E1、E3組和正常對(duì)照組之間的比較結(jié)果與W0、W1、W3組和正常對(duì)照組之間的比較結(jié)果均一致。

10、>　　 4.相同修復(fù)時(shí)間,腕部與肘部相比,W0組和E0組之間；W1組和E1組之間；及W3組和E3組之間的Fas、Caspase-3和Bcl-2表達(dá)的變化均一致,無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.大鼠肘部和腕部的尺神經(jīng)損傷即刻修復(fù)能完全恢復(fù)爪內(nèi)骨骼肌的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)；損傷1個(gè)月時(shí)修復(fù)能部分恢復(fù)爪內(nèi)骨骼肌的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)；損傷3個(gè)月時(shí)修復(fù)對(duì)爪內(nèi)骨骼肌的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)恢復(fù)無明顯作用。
　　 2.大鼠肘部和腕

11、部的尺神經(jīng)損傷即刻和1個(gè)月修復(fù)組的爪內(nèi)骨骼肌中膠原纖維增多并不明顯,而3個(gè)月修復(fù)組的爪內(nèi)骨骼肌中膠原纖維顯著增生,說明膠原纖維的增多是影響爪內(nèi)骨骼肌恢復(fù)的一個(gè)重要影響因素。
　　 3.大鼠肘部和腕部的尺神經(jīng)損傷即刻修復(fù)組的爪內(nèi)骨骼肌細(xì)胞凋亡不明顯；損傷1個(gè)月修復(fù)組的爪內(nèi)骨骼肌中見較多細(xì)胞凋亡；損傷3個(gè)月修復(fù)組的爪內(nèi)骨骼肌中見大量細(xì)胞凋亡。
　　 4.大鼠腕部與肘部尺神經(jīng)損傷修復(fù)對(duì)爪內(nèi)骨骼肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和細(xì)胞凋亡改變的影