蛔蟲(chóng)體腔液對(duì)3T3-L1細(xì)胞增殖分化影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、本試驗(yàn)主要探討蛔蟲(chóng)體腔液(Ascaris body cavity fluid,ABF)對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化及凋亡的影響,以揭示蛔蟲(chóng)體腔液對(duì)機(jī)體脂類代謝的作用機(jī)理。試驗(yàn)方法:收集蛔蟲(chóng)體腔液,將起始濃度為3200μg/mL的蛔蟲(chóng)體腔液分別稀釋為3000μg/mL、2000μs/mL、1000μg/mL、800μg/mL、600μg/mL、400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、10μg/mL作

2、為試驗(yàn)材料。利用3T3-L1細(xì)胞建立試驗(yàn)?zāi)Ｐ?分別設(shè)立細(xì)胞增殖試驗(yàn)、凋亡試驗(yàn)、分化試驗(yàn)和PPARγ mRNA表達(dá)試驗(yàn)。增殖試驗(yàn)組:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的3T3-L1細(xì)胞常規(guī)消化計(jì)數(shù),準(zhǔn)確將細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中,1d后將各濃度的蛔蟲(chóng)體腔液分別接種于細(xì)胞板繼續(xù)培養(yǎng),分別在24h、36h、48h時(shí)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性,觀察不同濃度的蛔蟲(chóng)體腔液在不同時(shí)間段對(duì)3T3-L1細(xì)胞增殖的影響;凋亡試驗(yàn)組:細(xì)胞分化過(guò)程中設(shè)置蛔蟲(chóng)體腔液1000μg/mL組和

3、空白對(duì)照組,36h后分別收集各組細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞晚期凋亡率。分化試驗(yàn)組:將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,設(shè)置3000μg/mL ABF組、2000μg/mL ABF組、1000μg/mL ABF組、500μg/mL ABF組、100μg/mL ABF組、50μg/mL ABF組、10μg/mL ABF組,分化過(guò)程中分別加入對(duì)應(yīng)濃度的ABF,分化結(jié)束后進(jìn)行油紅O染色,在510nm波長(zhǎng)測(cè)吸光度;PPARγ mRNA表達(dá)試驗(yàn)組:

4、細(xì)胞分化過(guò)程中設(shè)置1000μg/mL ABF組、100μg/mLABF組和對(duì)照組,分化結(jié)束后提取細(xì)胞RNA,用RT-PCR方法檢測(cè)PPARγ、GAPDHmRNA的相對(duì)表達(dá)。
　　 試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.細(xì)胞增殖結(jié)果:相同作用時(shí)間,ABF對(duì)3T3-L1細(xì)胞增殖的抑制作用與濃度成正比;當(dāng)濃度一定時(shí),ABF對(duì)3T3-L1細(xì)胞的抑制作用隨時(shí)間的增加而增大。
　　 2.細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果:在3T3-L1分化過(guò)程中加入10

5、00μg/mLABF,細(xì)胞的凋亡率由正常分化組的15.99％提高到25.87%,可顯著提高細(xì)胞凋亡率。
　　 3.細(xì)胞分化染色結(jié)果:高濃度的ABF(2000μg/mL、1000μg/mL、500μg/mL)可以極顯著降低胞內(nèi)脂肪的產(chǎn)生量(P＜0.01),胞內(nèi)產(chǎn)脂量分別為對(duì)照組的26.5%、55.5%和81.5%。低濃度(100μg/mL、50μg/mL、10μg/mL)的ABF與對(duì)照組相差不明顯,甚至還高于對(duì)照組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義(P＞0.05)。
　　 4.PPARγ mRNA表達(dá)結(jié)果:前脂肪細(xì)胞3T3-L1誘導(dǎo)分化過(guò)程中加入1000μg/mLABF,細(xì)胞PPARγmRNA表達(dá)量明顯降低(P＜0.01),為對(duì)照組的57.6%,而10μg/mL的ABF對(duì)PPARγmRNA表達(dá)量的影響與對(duì)照組相比,差異不顯著(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.ABF干預(yù)脂質(zhì)代謝可能與抑制3T3-L1細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。
　　 2.ABF