沉默F(xiàn)NBP1基因?qū)θ薍L-7702細(xì)胞體外增殖及遷移能力的影響.pdf

1、目的:構(gòu)建靶向FNBP1 siRNA干擾載體并篩選特異高效的RNAi靶點(diǎn),研究FNBP1基因沉默后對人正常的肝細(xì)胞HL-7702體外增殖以及遷移能力的影響。
　　 方法:設(shè)計(jì)并構(gòu)建了3個(gè)靶向FNBP1 siRNA干擾載體(Si-1,Si-2,Si-3),經(jīng)酶切和DNA測序鑒定后轉(zhuǎn)染人正常的肝細(xì)胞HL-7702。RT-PCR和Western blot檢測瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中FNBP1基因的干擾效率,篩選出特異高效的RNAi靶點(diǎn)。并用G4

2、18篩選穩(wěn)定表達(dá)了RNAi的細(xì)胞株,用XTT法檢測細(xì)胞體外增殖率,劃痕法檢測細(xì)胞的遷移能力。
　　 結(jié)果:酶切和測序結(jié)果證明干擾質(zhì)粒構(gòu)建正確;轉(zhuǎn)染特異性的干擾質(zhì)粒(Si-1、Si-2、Si-3)細(xì)胞的FNBP1基因表達(dá)量與對照組相比均有所降低,3個(gè)干擾組(Si-1、Si-2、Si-3)細(xì)胞的FNBP1基因表達(dá)量分別為對照組的(66.4±1.01)％,(24.2±0.81)%,與(44.9±0.92)%,Si-1、Si-2、Si-