IL-10對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBVX基因的HL-7702細胞炎癥相關(guān)因子的影響.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是引起病毒性肝炎的主要病原體之一，其中X基因編碼的X蛋白具有多種生物學功能，可與宿主細胞的多種蛋白相互作用，調(diào)控宿主細胞基因表達，進而影響宿主細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、增殖與分化等。HBV感染可激活多種信號通路并影響炎癥相關(guān)基因的表達，如IL-6、環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)和PGE2等。本研究擬探討炎癥相關(guān)因子在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBV X基因的肝細胞中的

2、表達情況，觀察IL-10對肝細胞炎癥相關(guān)因子表達的影響，為進一步闡明乙肝病毒X蛋白在HBV致病過程中的作用機制提供一些實驗依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用免疫細胞化學S-P法檢測HL-7702、HL-7702空載、HL-7702X三種細胞中COX-2蛋白的表達情況；以不同濃度的白介素10（IL-10）(0、40、60、80ng/ml)處理體外培養(yǎng)的肝細胞，了解在不同時間內(nèi)(24、48h)各組細胞中COX-2蛋白的表達情況。采用半定量RT-P

3、CR方法檢測各組細胞中COX-2 mRNA的表達。體外培養(yǎng)肝細胞，以不同濃度IL-10(0、40、60、80ng/ml)處理后收集細胞上清液，采用ELISA法檢測上清液中IL-6、TNF-α、PGE2的含量。
　　結(jié)果：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBx基因的HL-7702細胞中COX-2蛋白和mRNA的表達較對照組及空載組明顯升高（P<0.05;P<0.05），不同時間段變化無明顯差異（P>0.05）。在加入40、60、80ng/ml的IL-10處

4、理24h及48h后，COX-2蛋白及mRNA的表達均明顯下調(diào)，且各組間比較均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。細胞上清中均有IL-6、TNF-α、PGE2的表達，但穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 HBx基因的 HL-7702細胞中因子的表達無明顯差異（P>0.05），加入IL-10干預(yù)后各組炎癥因子的表達無明顯改變。
　　結(jié)論：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBx基因的肝細胞COX-2的表達均明顯上調(diào)。外源性的IL-10可以抑制肝細胞中COX-2蛋白和mRN A的表達，從而減少