提高免疫層析試紙條靈敏度方法的研究.pdf

1、目前有許多常見的食品檢測(cè)方法，主要包括氣相色譜質(zhì)譜法、液相色譜質(zhì)譜法、高效液相色譜法以及酶聯(lián)免疫吸附法等，然而這些方法都需要昂貴的儀器、復(fù)雜的前處理以及專業(yè)的操作人員，這些特點(diǎn)限制了它們的現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。免疫層析試紙條是一種操作簡(jiǎn)單、快速、結(jié)果穩(wěn)定、價(jià)格低廉的檢測(cè)方法，適宜于樣品的現(xiàn)場(chǎng)快速篩查，然而，免疫層析試紙條的檢測(cè)靈敏度較低，因此，應(yīng)用受到限制。本研究初步探索了提高免疫層析試紙條靈敏度的方法。
　　本實(shí)驗(yàn)以食源性致病菌大腸桿菌 O

2、157:H7為研究對(duì)象，基于雙抗夾心的檢測(cè)原理，成功建立了膠體金免疫層析信號(hào)放大試紙條檢測(cè)系統(tǒng)。本研究在傳統(tǒng)膠體金免疫層析試紙條的基礎(chǔ)上，通過添加增敏劑（氯金酸和鹽酸羥胺）提高檢測(cè)信號(hào)。利用膠體金試紙條讀取儀獲得信號(hào)放大前后試紙條的檢測(cè)限分別為為4×104 CFU/mL及5×103 CFU/mL，信號(hào)放大后靈敏度提高了8倍，檢測(cè)時(shí)間為20 min；該試紙條與27株非目標(biāo)菌無交叉反應(yīng)；以牛奶為食品基質(zhì)，用試紙條對(duì)增菌培養(yǎng)不同時(shí)間的樣本進(jìn)行

3、檢測(cè)，信號(hào)放大后的試紙條檢出陽性信號(hào)的時(shí)間比傳統(tǒng)試紙條短1.5 h。該試紙條具有快速、靈敏、操作簡(jiǎn)單、適宜于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的特點(diǎn)，為大腸桿菌O157:H7的高靈敏檢測(cè)提供了一種新的方法。
　　合適的探針材料是提高免疫層析試紙條檢測(cè)靈敏度的重要因素。在本實(shí)驗(yàn)中，基于競(jìng)爭(zhēng)抑制的檢測(cè)原理，成功制備了銀金多孔納米粒子免疫層析試紙條并對(duì)克倫特羅進(jìn)行檢測(cè)。通過添加不同量的氯金酸到十六烷基三甲基氯化銨包裹的銀納米粒子溶液，制備了不同金銀含量以及不同孔

4、徑大小的銀金多孔納米粒子，由于獲得的銀金多孔納米粒子的表面活性劑帶正電，通過添加巰基十一烷酸到十六烷基三甲基氯化銨包裹的銀金多孔納米粒子溶液，成功地將銀金多孔納米粒子的表面電荷從正電荷轉(zhuǎn)變?yōu)樨?fù)電荷。將巰基十一烷酸包裹的不同的銀金多孔納米粒子與抗克倫特羅單克隆抗體分別反應(yīng)，得到相應(yīng)的免疫探針，將它們并應(yīng)用于免疫層析試紙條進(jìn)行克倫特羅檢測(cè)。結(jié)果顯示，隨著氯金酸添加量的增加，獲得的銀金多孔納米粒子的Ag/Au摩爾比從12.69:1、4.78: