乙酰輔酶A合成酶性質(zhì)分析及其應(yīng)用.pdf

1、本研究通過比較不同來源的乙酰輔酶A合成酶，篩選活性較高的乙酰輔酶A合成酶并研究其酶學(xué)特性，最后將其應(yīng)用到以乙酰輔酶A為前體合成甲羥戊酸的過程中。根據(jù)已有的相關(guān)研究和報(bào)道，在大腸桿菌體內(nèi)有一個(gè)乙酰輔酶A合成酶基因acs，巴氏醋酸桿菌體內(nèi)有兩個(gè)乙酰輔酶A合成酶基因acs1和acs2，且它們都能對(duì)乙酸進(jìn)行較好的代謝。本文首先通過Western Blot分析表明，這3個(gè)編碼乙酰輔酶A合成酶的基因均在E. coli BL21(DE3)中成功表達(dá)。

2、其次，對(duì)3個(gè)不同來源ACS的酶活性進(jìn)行比較，結(jié)果表明，來自于巴氏醋酸桿菌的乙酰輔酶A合成酶(ACS2)具有較高的催化活力，通過對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)的酶學(xué)特性研究，發(fā)現(xiàn)pH7~8、37℃條件下ACS2的酶活性最高，此時(shí)其Km為1.16 mmol/L，最大反應(yīng)速度(Vmax)為20.45 mmol/(L·min)。最后，將ACS2應(yīng)用于以乙酸為底物的甲羥戊酸批次補(bǔ)料發(fā)酵，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)過表達(dá)ACS2單批補(bǔ)料發(fā)酵條件下要優(yōu)于未過表達(dá)的情況，甲羥戊酸產(chǎn)量達(dá)